雞大腸桿菌的分離和鑒定及耐藥性監測

[中圖分類號] S831 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2013）05-0205-01

雞大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的一種常見疾病。包括大腸桿菌性腹膜炎，輸卵管炎，滑膜炎，臍炎，氣囊炎，肉芽腫，炎和其他疾病，大腸桿菌到處是廣泛存在于自然環境中，因此，形成一個雞威脅整個過程，對家禽業的重大損失。大腸桿菌血清型，對當地流行菌株和不同血清型，同時，隨著抗生素的廣泛使用，并在強大腸桿菌的耐藥性，為臨床合理用藥，我們確定了滑縣境內的大腸桿菌菌株，大型養雞場，并在此基礎上對藥物耐藥性的監測。

一、材料

1.病料病禽的糞便或泄殖腔棉拭子，2009年10月采自滑縣某雞場

2.培養基

普通肉湯，普通營養瓊脂，試劑，生化反應培養基等按《現代微生物培養基和試劑手冊》配制。伊紅美藍瓊脂（EMB），Mueller和hintion瓊脂（MH），北京陸橋商檢新技術公司生產， 批號分別為：005027，NCCLS（nationalcommittee laboratorystandards美國臨床實驗室標準化委員會）法規頒布的專用培養基。

3. 實驗動物 18～22g昆明系小白鼠，購于河南省實驗動物中心

4.藥敏紙片

河南科技有限公司生產，批號：091023， NCCLS規定的厚紙片，直徑6.25mm，分為10種：氨芐西林（AMP），哌拉西林（PIP），青霉素G（P G），卡那霉素（Kan），諾氟沙星（也不），完成了由湍流（TOB），頭孢哌酮（CFP），慶大霉素（GEN），氯霉素（CM P），阿米卡星（AKN）。

二、方法

1.菌株的分離與鑒定

1.1菌株的分離和培養方法：新鮮糞便或泄殖腔棉拭子，接種肉湯，37℃ 18～24 h劃線接種于EMB平板，經過37℃ 18～24小時后可疑菌落，進行革蘭染色鏡檢。上述培養特性和形態，染色反應，與大腸桿菌菌株在普通營養瓊脂斜面上純粹的增長保持一致，生化鑒定。

1.2致病性試驗

將上述生化反應已鑒定為大腸桿菌的菌株接種于普通肉湯，用37℃ l8 h的肉湯培養物，分別腹腔接種18～22g的小白鼠，200ul/只，觀察存活情況。

2.耐藥監測

分離后的大腸桿菌18株，采用Kriby-Bauer（K-B法）進行耐藥性監測方法，NCCLS紙片擴散法和發布我的藥敏試驗。菌株接到柵斜面上，37℃ 18小時，用生理鹽水沖洗草坪。細菌數量稀釋0.5麥斯威爾比濁管。對5x107-108 CFU/mL等效CFU/mL，MH10厘米直徑的培養皿瓊脂傾注了厚4毫米MH瓊脂平板，15雨用無菌棉簽蘸菌液濃度，管的內壁將經過3次是多余的菌液擠在瓊脂表面涂層。60每一個旋轉。最后，沿板邊涂抹一周。3～5分鐘后在室溫下干燥。無菌鑷子使用藥物的瓊脂盤中心表面，距離應大于24毫米。從盤面邊緣板應大于15 mill，35℃16～18小時

閱讀結果，記錄各紙片的抑菌圈直徑.

三、結果

1.菌株的分離與鑒定

大腸桿菌菌株L8分離，黑人在伊紅美藍瓊脂金屬光澤的菌落形成的革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍，單或雙。該菌能發酵葡萄糖，乳糖，麥芽糖，甘露糖醇，蔗糖的酸氣，發酵幾株，酸或酸氣；MR陽性試驗；V負P試驗；生產吲哚；尿素酶試驗陰性；硝酸鹽還原試驗陽性；吲哚試驗陽性；枸櫞酸鹽利用試驗陰性；糖鐵坡三酸，黃底黑現象，無氣。

2.致病性試驗

18株大腸桿菌接種到小鼠l8-22 G。只有4在24小時內死亡，其余的生活。

3.抑菌圈直徑的耐藥性監測

結果見表l。

表1 耐藥性監測抑菌圈直徑結果 mm

注：-無抑菌圈

4.按NCCLS法規判定的耐藥性

監測試驗

結果見表2。

表2 耐藥性監測試驗結果統計 %

四、討論

1.的分離和鑒定，分離的18株大腸桿菌，4株致病性大腸桿菌，占22.22%。L株死于禽疾病，1株發病死亡，2株從健康的鳥。分布的農場仍然致病性大腸桿菌。局部免疫性較高的鳥只有承運人可以不表現癥狀，但是可以直接傳送到其他家的鳥，引起的死亡的發生率，應注意及時消毒工作。

2.藥敏試驗結果可以看出，大腸桿菌敏感率的主要藥物比哌拉西林，環丙沙星，慶大霉素，丁胺卡那霉素，妥布霉素，丁胺卡那霉素60%，頭孢哌酮藥物敏感率可以達到90%以上，為有效預防和控制大腸桿菌病有一定的參考價值。

3.種血清型的大腸桿菌？許多農場，藥物是不一樣的。在耐藥監測我們的氨芐青霉素的耐藥率為43.67%，卡那霉素的耐藥率為40%，氯霉素抗性是l3.33 %，這表明抗生素的長期使用單一藥物耐藥的主要原因。因此，在臨床耐藥監測應定期進行，選擇幾個敏感藥物交替使用，能收到較好的效果。