茯苓多糖的提取技術

[中圖分類號] S-1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2013）11-0182-01

一、引言

茯苓多糖為我國傳統中藥茯苓的主要有效成分，具有抗腫瘤、抗病毒、增強機體免疫力、抗氧化、降血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于醫療、保健等領域，具有廣闊的開發應用前景。

二、材料與方法

1.茯苓多糖的提取方法

2.均勻設計實驗對超聲波提取茯苓多糖提取工藝

2.1器材及藥品

茯苓，數控超聲波清洗器，紫外分光光度計，電子分析天平。葡萄糖標準品，苯酚，濃硫酸和鋁片等。

2.2.方法

2.2.1藥材粉碎度的選擇 參照文獻條件，取不同粒度茯苓藥材，在乙醇濃度50%，提取溫度45℃條件下超聲提取20 min，。實驗結果表明，藥材粒度為20～60目時，提取時提取率較好。

2.2.2提取次數的選擇 取20～60目粒度茯苓藥材，在2.2.2.1條件下分別提取1，2，3次，結果表明，超聲波提取1次后，茯苓多糖即已提取完全。

2.2.3 茯苓提取物中多糖含量的測定方法

2.2.3.1 4%苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加鋁片0.1 g和碳酸氫鈉0.05 g，蒸餾并收集182 ℃餾分，稱取4 g，在100 ml容量瓶加水溶解至刻度線，然后放冰箱內冷藏備用。

2.2.3.2制備標準曲線 精密稱取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的無水葡萄糖標準品15 mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻置室溫下（約24℃）備用（濃度為0.6 mg/ml）。精密量取對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分別置于100 ml容量瓶中，并加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液2 ml，置具塞試管中，分別加入4%的苯酚溶液1 ml，混勻后迅速加入濃硫酸7.0 ml，搖勻，并于45℃水浴中保溫30 min后取出，置冰水浴中5 min后取出。然后以第1份為空白對照組，用分光光度計在490 nm的波長處測定其吸收度A，以吸光度（A）為縱坐標，溶液濃度C為橫坐標。統計，進行線性回歸。

2.2.3.3苯酚-硫酸法測茯苓多糖含量 將各提取方法所得樣品制成1 g/ml的溶液，精密量取2 ml，照標準曲線的制備項下的方法，用紫外分光光度法測定其吸光度，從標準曲線的回歸方程中計算 出待測溶液濃度，并進一步計算出其多糖含量（以葡萄糖量計）。

2.2.4 均勻實驗設計及結果分析實驗結果用多元回歸處理，將實驗結果輸入均勻設計分析軟件2.10。驗證實驗按上述優化的超聲提取條件，進行3次茯苓多糖的超聲提取，結果得到優化條件下的茯苓多糖提取率為5.58%，與回歸方程的預測值5.60%很接近，且重復實驗相對偏差不超過2.5%，說明超聲優化條件重復性良好。

3.茯苓多糖純化方法

3.1蛋白質的去除方法

Severge法 根據蛋白質在氯仿等有機溶劑中變性的特點，從而去除蛋白。按多糖水溶液體積的1/4～1/3加入氯仿：戊醇（正丁醇）=5∶1，劇烈振搖20～30 min，除去含有蛋白質的氯仿和正丁醇混合液。

3.2 茯苓多糖的脫色 通常用活性炭吸附，但此法易造成多糖的損失，所以一般用弱堿性樹脂、DEAE纖維素吸附色素。通過離子交換柱不僅能達到脫色的目的，而且可以進行分離[3]。

3.3透析除小分子雜質透析在逆相流水中進行，pH值保持在6.0～6.5。操作時將需要處理的茯苓多糖于雙蒸水中過夜溶脹后，置于半透膜透析袋中，雙蒸水透析，透析液濃縮后用乙醇沉淀多糖[4]。

3.4 大孔吸附樹脂純化茯苓多糖[5]應用大孔樹脂純化茯苓多糖，取得了較好的效果。該法具有吸附量大、選擇性好、吸附速度快、易于解吸附、機械強度高、再生處理簡便等優點。

三、結果與討論

以上實驗考察了影響藥材有效成分提取的4個主要因素：藥材粒度、固液比、提取時間，提取次數來研究茯苓多糖的提取，并對用傳統加熱回流和超聲提取茯苓多糖的實驗均進行了最佳工藝的驗證，并對其因素的顯著性影響進行了分析，得到了加熱回流和超聲提取茯苓多糖的最佳工藝條件，并對它們進行了處理，從而得到了從茯苓中提取茯苓多糖的較為理想的方法——超聲波提取法。茯苓多糖的超聲提取方法簡便，提取率高達5.58%左右，比常規提取方法的操作時間縮短10～20倍，而且多糖得率高。超聲提取天然藥物有效成分具有周期短、成本低、不破壞活性成分等顯著優點，具有很好的應用前景。

參考 文獻

[1]聶金媛，吳成巖，吳世容，等.微波輔助提取茯苓中茯苓多糖的研究[J].中草藥，2004，35（12）：1346.

[2]趙聲蘭，趙榮華，陳 東，等.茯苓皮中茯苓多糖的提取工藝優化[J].時珍國醫國藥， 2006 ，17（9）：2730.

[3]王藝峰.茯苓菌核多糖及其衍生物的結構及生物活性[DB/OL]. 武漢大學碩士論文，2004：1.

[4]陳 莉.茯苓多糖提取工藝的優化及開發利用研究[DB/OL].貴州大學碩士論文，2007.

[5]李玲. 多糖的分離、純化與分析[J]. 新疆工學院學報， 1996，17（2）：129.