P16在腦血管畸形中的表達及其意義

【摘要】 目的：探討P16基因在腦血管畸形（CVM）及正常腦組織中的表達情況，討論其臨床病理意義。方法：收集腦血管畸形標本，利用免疫組化方法測定P16蛋白在正常腦組織及腦血管畸形中的表達情況。結果：在腦血管畸形標本及正常腦組織標本中P16蛋白陽性表達率分別為32.1%（18/56）及7.4%（2/27），兩者比較差異有統計學意義（P<0.05）；P16蛋白在海綿狀血管瘤中的表達率高于動靜脈畸形中的表達，兩者比較差異有統計學意義（P<0.05）。結論：P16基因在腦血管畸形（CVM）的發生發展中有重要作用。

【關鍵詞】 P16； 基因； 腦血管畸形； 免疫組織化學

在炎癥、腫瘤等情況下，可以引起血管生成（angiogenesis），血管生成生成的過程中有多種因素參與，包括血管內皮生長因子（VEGF）及細胞周期控制蛋白等[1-2]。目前腦血管畸形的形成過程尚不明確，但是血內皮細胞的增殖在腦血管畸形的形成過程中起著重要的作用[3]。

筆者應用免疫組化方法檢測P16蛋白在腦血管畸形患者標本及正常腦組織中的表達情況，并分析其臨床病理意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集東莞市虎門醫院及延大附院病理科1995年1月-2012年12月期間進行手術的腦血管畸形患者標本（56例），男女比例（32：34），平均年齡27.2歲（18～42歲），其中動靜脈畸形37例，海綿狀血管瘤19例。對照組為27例正常腦組織進行顱內減壓的患者，。

1.2 實驗試劑及免疫組織化學方法 P16單克隆抗體（即用型）及二抗檢測試劑盒均購自邁新公司。所有標本取材厚度為3 mm，取材后采用10%中性福爾馬林固定，固定時間為12 h，常規脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，3 μm連續切片，烤片1 h（70 ℃），烤片后采用二甲苯脫蠟，所有切片應用檸檬酸進行高溫高壓抗原修復處理，加一抗后保濕盒內常溫孵育1 h，PBS緩沖液沖洗，二抗常溫孵育0.5 h，DAB顯色，蘇木素復染細胞核，中性樹膠封片。每批切片實驗均設立明確的陽性對照及陰性對照。

1.3 結果判定標準 （1）病理醫生在奧林帕斯BX50顯微鏡下進行評估所有免疫組化玻片。（2）P16蛋白主要表達于血管內皮細胞的細胞核，細胞核出現淡黃色、黃色或棕黃色顆粒為陽性表達。（3）隨機選取10個40×10高倍視野，進行觀察計數。（4）評估陽性細胞百分率及陽性細胞染色強度。Ⅰ：陽性細胞百分率：<5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。Ⅱ：染色強度：不著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分及黃褐色3分。Ⅰ×Ⅱ≥3分為陽性，<3分為陰性[4]。

1.4 統計學處理 采用SPSS 16.0軟件對所得數據進行統計分析，計數資料采用 字2檢驗和Fisher確切概率法分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在55例腦血管畸形患者免疫組化切片中P16蛋白的陽性表達為18例（32.1%）高于在27例正常腦組織免疫組化切片中的表達2例（7.4%），表達率比較差異有統計學意義（ 字2=6.09，P=0.014）；在腦血管畸形的患者中P16蛋白在海綿狀血管瘤中的表達高于在動靜脈畸形中的表達，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

近年來發現一個與P53同樣重要的P16抑癌基因，它的突變或缺失參與了多種腫瘤的形成[5-7]。血管內皮細胞的增殖在腦血管畸形的發生發展過程中起著重要的作用[8]。細胞的增殖周期受相關基因及其表達產物的調控，如果細胞周期調控出現異常，細胞的增殖狀態也將進入異常。Pl6基因是參與細胞周期調控的基因之一，它是細胞周期的負調控蛋白，可以阻止細胞從G1期進入S期[9]。P16基因通過突變、缺失及甲基化的形式失活，從而喪失對細胞周期調控的作用[10]。P16基因的失活意味著P16的低表達，但是在許多研究中卻發現：存在甲基化的P16基因失活，與P16蛋白的表達明顯相關，其機制可能增殖失控的細胞反饋性提高P16蛋白的表達[11]。筆者的研究結果與之類似：在56例腦血管畸形患者免疫組化切片中P16蛋白的陽性表達率為32.1%（18/56）高于在27例正常腦組織免疫組化切片中的表達率為7.4%（2/27），差異有統計學意義（P<0.05）；同時，在腦血管畸形的患者中P16蛋白在海綿狀血管瘤中的表達高于在動靜脈畸形中的表達，差異有統計學意義（P<0.05）。結果表明：P16基因參與了腦血管畸形的發生發展過程，P16蛋白的表達與血管內皮細胞的增殖正相關，在海綿狀血管瘤中的表達率高于動靜脈畸形中的表達率，其機制可能是增殖失控的血管內皮細胞負反饋提高了P16蛋白的表達。

參考文獻

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（收稿日期：2013-02-19） （本文編輯：連勝利）