卵巢組織切片的制作

摘要：本文重點(diǎn)論述了采用石蠟切片法進(jìn)行卵巢連續(xù)組織的切片制作過程。整個(gè)切片過程可以劃分為修整蠟塊、準(zhǔn)備工作的進(jìn)行、切片厚度的確定、切片的實(shí)施、鋪片、貼片、烘片等四個(gè)環(huán)節(jié)。本文還就切片制作過程中的注意事項(xiàng)進(jìn)行了論述。

關(guān)鍵字：卵巢組織 組織切片 石蠟切片

中圖分類號(hào)：R713.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：C 文章編號(hào)：1005-0515（2013）11-031-01

引言

伴隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，我國的醫(yī)學(xué)行業(yè)也進(jìn)入了高速發(fā)展期。其中“數(shù)字人”是計(jì)算機(jī)科學(xué)技術(shù)應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)方面。它將現(xiàn)代計(jì)算機(jī)技術(shù)與醫(yī)學(xué)技術(shù)結(jié)合到一起，采用計(jì)算機(jī)圖像技術(shù)與數(shù)據(jù)處理技術(shù)使人體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)化。組織切片的制作是人體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)化的第一步，它通過對(duì)組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行切片處理，獲取組織結(jié)構(gòu)的第一手?jǐn)?shù)據(jù)，然而，再通過數(shù)據(jù)的處理完成結(jié)構(gòu)恢復(fù)還原。卵巢組織切片可以用于卵巢部結(jié)構(gòu)的分析、卵巢疾病的治療都有著重要意義。本文就卵巢組織切片制作過程以及注意事項(xiàng)進(jìn)行簡(jiǎn)要的闡述。

一、卵巢連續(xù)組織切片的制作

切片的制作主要分為以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：

1、修整蠟塊

根據(jù)組織切片的大小，將蠟塊修整到適宜的大小。一般會(huì)在組織邊緣的0.6～1.1處，將余下的蠟塊全部切除掉。

2、準(zhǔn)備工作

組織切片的制作過程主要包括轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)、一次性刀片，毛筆、鉛筆、彎鑷、展片槽、小燒壞、載玻片、漂烘溫控儀等。在這些工具準(zhǔn)備完畢之后，要將切片刀安裝到切片要的刀臺(tái)上，將刀臺(tái)上的螺絲緊固住，不要在切片的過程中發(fā)生松動(dòng)。完成刀片的安裝，就要進(jìn)行蠟塊的安裝。被修整的蠟塊要安裝在金屬持蠟器上，將蠟器的角度調(diào)整到合適位置，調(diào)整后的蠟塊應(yīng)使其內(nèi)部的組織處于水平位置。刀刃與蠟塊表面應(yīng)呈5度夾角。將蠟塊與刀片調(diào)整到適宜的位置，讓刀架與蠟塊的位置都固定好，使蠟塊與刀刃保持接觸狀態(tài)。

切片厚度的確定

切片厚度的確定要考慮到組織結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，要考慮到組織切片的用處，切片機(jī)的厚度調(diào)節(jié)器上具有厚度調(diào)整的刻度，范圍為0～50μm。切片的厚度既要滿足實(shí)驗(yàn)的要求，同時(shí)也要考慮到切片的染色質(zhì)量，不應(yīng)出現(xiàn)掉片的情況，因此，卵巢組織的切片厚度可以確定為30μm。確定好切片厚度，將厚度調(diào)節(jié)器上的刻度調(diào)整到30μm的值上。

切片

先將標(biāo)本切修出來，當(dāng)需要進(jìn)行切片的組織完全顯露出來時(shí)停止。由于輪轉(zhuǎn)式切片在進(jìn)行組織的切取時(shí)，是由下向上進(jìn)行的，為了保證切片的完整性不被破壞，組織中不要出現(xiàn)刀紋的裂縫，還要將組織上比較硬或比較脆的一端放在上部分進(jìn)行切割。切片過程中，注意左手與右手的配合，一般都是左手拿毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切刀。操作都應(yīng)時(shí)刻利用毛筆將由于石蠟被切開而發(fā)生卷曲的碎片，順著切片的速度，向下緩慢的移動(dòng)毛筆，保證切片的平整。一定要注間毛筆的移動(dòng)速度要與切刀的旋轉(zhuǎn)速度保持一致，過快或過慢都會(huì)影響到組織切片的質(zhì)量。由于切刀在進(jìn)行組織塊的切割過程中會(huì)散出一定的熱量，石蠟的硬度會(huì)發(fā)生變化，這時(shí)需要采用冰塊冷敷的方法，降低切刀片與組織塊的溫度。

5、鋪片

用鑷子將蠟帶夾起來，保持正面朝上，將蠟帶平鋪在展片箱的水面上，水溫以40～45攝氏度為宜，借助于水的張力，可以將有些褶皺的蠟帶展平。但是，如果切片的褶皺過多，或者是蜷曲的十分嚴(yán)重，可以將蠟帶先放到酒精內(nèi)，稍微展開后，再使用載玻片將其放到展片箱中展平。

6、貼片、烘片

當(dāng)鋪片完成后，切片的平整程度滿足了研究的要求，就要將其從水面上的撈下來，放到載玻片中間的位置，將多余的水分凜干，放置在空氣中一段時(shí)間，當(dāng)切片稍有些干燥后，就可進(jìn)行烤片操作了。烤片操作由烤片儀完成，烤片的時(shí)間一般都是1個(gè)小時(shí)左右，溫度設(shè)置在60～68℃，烤至切片上的石蠟全部去除為止。

二、切片制作過程中的注意事項(xiàng)

1、切片方法的選擇

通常來講，切片方法的選擇與切片的應(yīng)用以及組織結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)有關(guān)，常用的切片制作方法有石蠟切片法，上述的卵巢組織切片就是采用的上述方法。除此之外，還有火棉膠切片、冰凍切片法。所謂冰凍切片法就是將新鮮的標(biāo)本冷凍起來，進(jìn)行切片制作。這種切片的制作方法不受組織塊大小的限制，并且切片的制作過程簡(jiǎn)單，也是醫(yī)學(xué)研究上被廣泛采用的一種方法。火棉膠切法需要耗費(fèi)大量的時(shí)間，各個(gè)環(huán)節(jié)的時(shí)間都要比上述的石蠟切片法浪費(fèi)時(shí)間。而上述的卵巢組織切片采用了石蠟切片法，切片的硬度合理，石蠟的浸泡完全，染色的效果也達(dá)到了預(yù)期的標(biāo)志，最終卵巢組織切片的獲取是十分是成功的。

切片厚度的確定

切片厚度的確定與組織結(jié)構(gòu)與研究實(shí)驗(yàn)要求有關(guān)。一般來講，如果是進(jìn)行大組織切片工作，如果采用切片的厚度定為常規(guī)的5μm，這樣一來，1mm厚的組織就要切片200張，這樣切片的工作量巨大，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，并且切片的準(zhǔn)確性會(huì)受到影響。然而，也不能為了減少工作量而增大切片的厚度，切片過厚，會(huì)對(duì)切片的染色產(chǎn)生影響，在切片染色過程中，很容易出現(xiàn)掉片現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行卵巢組織切片時(shí)，在綜合考慮多方因素后，最終將切片的厚度確定為30μm，這樣既符合研究實(shí)驗(yàn)的要求，工作量還是研究實(shí)驗(yàn)人員可以承受的范圍。

染色時(shí)間的確定

由于本色實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的卵巢組織切片的厚度要大于常規(guī)切片，因此染色過程與常規(guī)切片的染色過程也略有不同。最終將蘇木精的染色時(shí)間由常規(guī)切片的10分鐘縮短為3分鐘，染色時(shí)間應(yīng)根據(jù)光鏡下可以分辨組織結(jié)構(gòu)為依據(jù)靈活掌握。除此之外，分化時(shí)間與伊紅染色時(shí)間也要精確的掌握，保證切片的染色質(zhì)量，確定可以準(zhǔn)確的觀察到組織結(jié)構(gòu)。

定位方法的確定

在進(jìn)行組織切片的過程中，在進(jìn)行石蠟切片時(shí)，在進(jìn)行染色時(shí)，以及烘干時(shí)，組織切片的位置難免會(huì)發(fā)生一定的移動(dòng)，產(chǎn)生偏差，為了將偏差控制在不影響研究實(shí)驗(yàn)的范圍內(nèi)，可以通過設(shè)置一般參照物的方法，保證切位位置的準(zhǔn)確性。常用的切片定位方法有外定位法和內(nèi)定位法。

結(jié)語

人體的卵巢組織是人體的重要器官。對(duì)卵巢組織進(jìn)行切片，獲取人體卵巢的準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)信息，可以有利于卵巢組織各種疾病的治愈。

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