唾液腺染色制片的方法和比較

摘 要 文章以果蠅唾液腺的染色制片方法為例，以果蠅幼蟲的培養養，及幼蟲在性別，年齡對制片效果影響，和制片方法上的一些比較，從而得出好的制片方法和實驗結果。

關鍵詞 果蠅；唾液腺；制片方法

唾腺普遍存在于雙翅目昆蟲中，因為唾液腺細胞核中的染色體巨大，易觀察橫紋。體聯會等特點。易發現重復，倒位，易位等染色體結構變異，從而使唾腺染色體成為細胞遺傳學進化遺傳學和分子遺傳學研究的不可多得的好材料。特別在雙翅目昆蟲的研究中，唾腺細胞的染色和制片技術，顯的尤為重要。本文博眾家之長，兼筆者實踐經驗，尤重視在材料上的選擇、方法上也有改進。采用此方法，染色體易伸展，背景清晰，顏色對比高，獲得很好的染色的圖象。

一、材料與方法

1.果蠅幼蟲的培養

（1）培養基為常見的玉米培養基。玉米粉10克，紅塘13克，瓊脂粉0.7克，酵母粉2克，丙酸0.3ml，加蒸餾水100ml。 （2）培養基要求松軟，含水量較高，營養豐富，發酵良好。 （3）放入5-6對果蠅在18-20℃下培養，幼蟲出現后可將起放入15-18℃低溫培養。利于幼蟲充分發育。

（4）實驗時選用肥大，好動的雌性幼蟲作材料。

2.唾腺的剝離

（1）取一幼蟲放在滴有一滴0.7%生理鹽水的干凈載玻片上。實驗者兩手各拿一支解剖針壓住幼蟲尾端1/3處，用右手的解剖針，壓住頭部，水平拉動，即可拉出一對透明棒狀腺體。清除其上易剝落的脂肪，移走其他雜物。

3.制片

（1）解離。將腺體周圍的生理鹽水吸走，滴1-2滴1N鹽酸，在室溫下解離5分鐘左右，然后剝離其上附著的脂肪體。

（2）染色。滴蒸餾水在一旁，用吸水紙小心吸去鹽酸，反復幾次。加1-2滴改良苯酚品紅染液于腺體上，染色10-15分鐘。

（3）壓片。小心吸去多余染液，用蒸餾水將染上色的腺體沖在另一個干凈載玻片上（小心，別丟失了腺體）。滴上一滴45%醋酸，改上干凈的蓋片，用濾紙吸去多余的染液后，將濾紙條裹緊載片，左手微用力壓住蓋片對角，不讓其滑動，右手拇指適度用力垂直向下壓片，染色體臂分開。

（4）鏡檢。壓好的臨時裝片直接在顯微鏡下觀察，可以看到有染色體臂充分伸展，橫紋帶紋清晰。背景干凈。選擇好的細胞圖象，用顯微攝影照片，或可用石蠟封片，制成臨時標本，進一不制成永久裝片。

二、結果與討論

以上實驗中，應該著重注意以下幾點；

（1）培養基宜加較多的糖，酵母（提供充足的營養），松軟的培養基（含水較多）且低溫下（15-18℃），易培養出肥大的果蠅幼蟲，其唾腺發達。

（2）親本密度對幼蟲發育的影響。培養基中放入5-6對果蠅，不能太多，培養基營養成分固然重要，但其中的幼蟲密度，也會影響幼蟲的發育。成蟲交配后12小時左右就必須將成蟲轉移。充足的空間適于果蠅幼蟲的生長。

（3）幼蟲性別對制片的影響。實驗證明雌性更利于實驗，雌性三齡幼蟲唾腺細胞染色體易被壓伸展，成功率較高。

（4）幼蟲年齡對制片的影響。實驗取材以上午10點左右為好，并選分肥大，好動的幼蟲，其腺體細胞易壓破，染色體易伸展，著色，而不思動的幼蟲可能是快進入蛹期的老齡幼蟲，細胞中染色慝難被壓伸展橫紋也很模糊。

（5）拉出來的唾液腺上常常附有一些脂肪體，直接用解剖針很難分離，還易使脂肪體附在解剖針上，而用1N的鹽酸解離后，只需用針尖輕輕撥動就能分離脂肪體。

（6）唾腺在整個過程中一直要保持濕潤，不能干燥。

（7）用45%的醋酸處理后，就能得到較干凈的背景。也有用背景液和沖洗液來消除背景雜色，獲得干凈的背景效果。只是對于它們的配置略有繁冗，不如直接用45%的醋酸來的快。

（8）也有主張用冰凍壓片，其間和本實驗一樣的需要轉移唾腺，首先來說冰凍壓片效果不明顯，冰凍處理載片也麻煩，其次，唾腺本來就小，轉移中易丟失。即使在本實驗中，也可用吸走鹽酸的方法吸去多余的染液，而不一定轉移腺體，因為這一步需要很謹慎。

（9）壓片十，拇指適當用力垂直下壓，不主張壓片中、有揉動，那樣極易搓動蓋片。

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作者簡介：王 玉（1983-），女，四川江油人，遂寧二中實驗學校，中學二級，理學學士，主要從事中學生物教學工作。