禽多殺性巴氏桿菌病病原的分離鑒定和藥敏試驗

【摘 要】本文通過研究從梧州送檢的疑似多殺性巴氏桿菌病死雞的肝臟中分離出了一株細菌，根據其培養特性與典型的染色特征并結合生化試驗鑒定為巴氏桿菌。

【關鍵詞】巴氏桿菌；多殺性巴氏桿菌；病原；生化試驗；分離鑒定；藥敏試驗

1 巴氏桿菌屬概述

巴氏桿菌[1]屬（Pasteurella）分類地位未定的1屬，為無芽孢，不運動，兼性厭氧，菌體兩端常染色濃重的革蘭氏染色陰性小桿菌[2]，因1880年巴斯德氏首先自病雞分離到本屬中的多殺巴氏桿菌而得名。[3]該屬已確定的種有多殺巴氏桿菌、嗜肺巴氏桿菌、溶血巴氏桿菌、尿巴氏桿菌和鴨疫巴氏桿菌等。屬中的多殺巴氏桿菌危害畜、禽最嚴重，主要引起動物發生出血性敗血癥。從發病動物體液或組織中培養分離到的菌落基本有兩型：一為在過45°折光，低倍顯微鏡下，呈現鮮明的藍綠色而帶金光，邊緣有狹窄的紅黃色帶的Fg菌落型，相當于血清型乙型；另一為在45°折光下，低倍顯微鏡下，菌落呈現橘紅色、邊緣稍帶狹窄的黃綠光的FO菌落型，相當于血清型甲型 [4]。在中國，牛、豬、驢和馬的多殺巴氏桿菌病絕大多數為Fg型菌所致，家禽流行性巴氏桿菌病都是FO型菌所致[5]。多殺巴氏桿菌菌體抗原有12個型，莢膜抗原有5個型，前者以阿拉伯數字表示，后者以英文大寫字母表示，如1：A，2；A，1：B等，已知組成的菌型有16個。本菌血清型與宿主的分布有一定關系，其細胞壁含有明顯的內毒素活性，但未發現外毒素。本菌可引起家禽霍亂的暴發性流行，牛的出血性敗血病、原發性或繼發性肺炎等，國外免疫用的菌苗以加不同佐劑的滅活菌為主，也使用禽霍亂弱毒活菌，中國已于1959年使用弱毒活苗[6]。

2 多殺性巴氏桿菌及其危害

多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida， Pro）是一種重要的病原菌，對多種動物和人均有致病性，可以導致豬肺疫、禽霍亂、牛羊兔出血性敗血癥等危害嚴重的畜禽傳染病。多殺性巴氏桿菌正常存在于多種健康動物的肺和咽喉部黏膜，當動物處于應激狀態、機體抵抗力低下時，細菌侵入體內，大量繁殖并致病，發生內源性傳染。此菌類在同種或不同種動物間可相互傳染，蟬和蚤被認為是自體傳播的媒介昆蟲 [7]。本病的廣泛性及其傳染性，使得它在養禽業中造成的危害僅次于新城疫。

3 生化試驗原理

各種微生物細胞所含的酶系統不完全相同，這決定其在代謝類型上存在差異，對糖、蛋白質等營養物質的分解能力也不一致，因而其代謝產物也有差異，即使針對同一營養物質的代謝途徑和代謝產物也會不同。因此通過生化反應方法，根據微生物對糖，蛋白質等基質的利用情況及其不同的代謝產物的生化特性可以作為鑒定細菌的重要依據之一。

3.1 糖類分解試驗

細菌分解糖的能力與該菌是否含有分解某種糖的酶密切相關，是受遺傳基因所決定的，是細菌的重要表型特征，有助于鑒定細菌，含糖培養基中加入指示劑，若細菌分解則產酸或產酸產氣，使培養基顏色變化，從而判斷細菌是否分解某種糖或其他碳水化合物。細菌發酵糖類可以產生各種酸（乳酸、乙酸等）和氣體（甲烷、氫氣、二氧化碳），酸和氣的產生與否可根據培養后試管中指示劑的顏色變化和小套管中有無氣泡判定，指示劑酸性復紅在堿性環境呈黃色，酸性環境呈紅色。

3.2 石蕊牛乳試驗

石蕊是一種PH指示劑，當pH值降至4.5時酸性顯紅色，PH值接近中性時，未接種的培養基為紫藍色故稱紫乳。石蕊也是一種氧化還原劑，可以還原為白色，所以石蕊牛乳（紫乳）是用來測定被檢細菌幾種代謝性質的一種鑒別培養基。將被檢細菌接種于紫乳，置37℃溫箱培養，觀察結果。若細菌分解乳糖產酸，指示劑變色（石蕊為紅色，溴甲酚紫為黃色）。若產酸產氣，使牛乳酸凝，氣體使凝塊中有裂隙；若為紫色，表示乳糖未分解；若為藍色表示乳糖雖未發酵，但細菌分解培養基中所出現的氮源物質而產堿所致；若指示劑還原則為無色，常出現在酸凝塊出現后。

4 研究目的和意義

禽巴氏桿菌病（禽霍亂）一年四季都有散發，以春秋節較多，在我國各地均有發生，是目前危害養禽業的重要細菌性傳染病之一。如何正確診斷以及合理用藥治療禽巴氏桿菌病是目前廣大學者十分關注的問題。在廣西梧州送檢的一批6月齡病雞中出現呼吸急促、鼻和口中流出混有泡沫的黏液、劇烈腹瀉、糞便灰黃色或灰綠色等癥狀，發病雞群產蛋量下降30%左右，剖檢病雞可見鼻腔內有黏液，胸腔、腹腔、氣囊上有干枯樣滲出物，肝腫大、質脆、呈棕黃色、表面有許多小米粒大小的灰白色壞死點，心冠脂肪有很多出血點，心包內積有淡黃色液體，我們懷疑雞群患有雞霍亂，但用增效磺胺治療效果不理想，于是我們進行了病原的分離鑒定，涂片鏡檢發現典型兩極著色的巴氏桿菌，繼而結合生化試驗結果對其進行鑒定；由于不同的多殺性巴氏桿菌菌株對藥物的敏感性不同，有時甚至出現耐藥性，特別是在長期使用相同的藥物的情況下，因此進行藥敏試驗，以了解該菌對各種抗生素的敏感程度。高度敏感的藥物推薦為首選臨床用藥，減少使用中度敏感或耐藥的抗生素，防止產生耐藥性。動物試驗驗證了其致病力和毒力大小，對臨床診斷禽多殺性巴氏桿菌有較高的參考價值.

參考文獻

[1]（美）Y.M.Saif.禽病學[M].第11版.北京：中國農業出版社，2005.

[2]卡爾尼克B W. 禽病學[M].第10版.北京：北京農業大學出版社， 1999.

[3]陸承平.獸醫微生物學[M].第2版.北京：中國農業出版社，2001.

[4]甘孟侯.中國禽病學[M].北京：中國農業出版社，l999.

[5]曹軍平.禽霍亂疫苗研究進展[J].湖北畜牧獸醫， 1997，3：24-25.

[6]吳增堅，吳連清.禽霍亂實驗流行病學研究初報[J].南京農業大學學報.1997，（3）：147-148.

[7]姚春火.獸醫微生物學實驗指導[M].北京：中國農業出版社，2001.