ELISA檢測HIV抗體室內質控血清的制備與應用分析

摘要：目的 探討分析ELISA檢測HIV抗體室內質控血清的制備與臨床應用。方法 應用ELISA對我血庫收集的血液標本32000份進行HIV抗體檢測；同時選擇正常人群血清與試劑盒內HIV陽性血清混合稀釋，混合恰當比例，冷藏保存使用；同時將自制的質控血清保存1～12個月，對其均勻性、精確性及穩定性進行評價。結果 ELISA法檢測結果顯示陽性115例，陽性率為0.36%，實際上HIV抗體為陽性共120例，漏診率為0.016%；研究結果顯示正常人群的血清與試劑盒內HIV陽性血清以10：1的比例進行混合最為恰當；對自制的質控血清為期1～12個月的觀察，發現其均勻性、S/CO值、準確性12個月的差異不顯著（P<0.05），無統計學意義。結論 ELISA在HIV抗體的檢測中具有較高的準確度，且檢測結果 能夠在短時間內反映，值得臨床推廣應用；同時發現自制質控血清經濟方便，且具有穩定性高的優點，具有較大的應用前景。

關鍵詞：ELISA；HIV抗體；質控血清 HIV指人類免疫缺陷病毒，HIV病毒對人體的免疫系統造成破壞進而削弱機體的免疫抵抗力，造成健康人群患上獲得性免疫缺陷綜合征，感染HIV的途徑主要包括血液傳染、性交、母嬰傳播。現階段，臨床上對于艾滋病的治療尚無顯著進展，患者大都以死亡告終，其對人類的身體健康和生命安全產生極大的威脅，引起了國內外醫學的高度重視[1]。目前，艾滋病主要以早發現及早控制為主，ELISA法在HIV抗體的檢測中作用顯著，然而有諸多因素會導致其檢測結果出現偏差，故進行室內控制十分有必要，本文旨在探討分析ELISA檢測HIV抗體室內質控血清的制備與臨床應用，具體信息如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 由上海紀寧實業有限公司提供的人抗人類免疫缺陷病毒抗體（HIV）酶聯免疫試劑盒；由北京萬泰生物藥業有限公司提供的HIV抗體試劑盒，批準文號：國藥準字S20030001；由衛生部臨檢中心提供的臨界值質控血清，批號為NCCL 070049；由深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司提供的酶標儀。

1.2 方法 選擇抗-HIV ELISA法對所有標本進行檢測，一孔或兩孔判斷為陽性；將HIV抗體試劑盒的陽性血清通過診斷試劑進行檢測，同時將陽性血清通過包含10%小牛血清PBS緩沖液稀釋，每支裝0.5ml于零下20℃的環境下保存待檢，操作嚴格執行無菌操作，且嚴格遵循操作說明進行。

1.3 統計學分析 采用SPSS13.0統計學軟件，計數資料采用x2檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

應用ELISA法對HIV抗體檢測結果顯示陽性115例，陽性率為0.36%（115/32000），但實際上HIV抗體為陽性的共120例，漏診率為0.016%（5/32000）；研究結果顯示正常人群的血清與試劑盒內HIV陽性血清以10：1的比例進行混合最為恰當；對自制的質控血清為期1～12個月的觀察，發現其均勻性、S/CO值、準確性12個月的差異不顯著（P>0.05），無統計學意義，見表1。

3 討論

自從1981年在美國發現首例由人類免疫缺陷病毒（HIV）引起的艾滋病以來，人類一直在與其進行著不懈的斗爭。各類檢測方法及檢測手段都在不斷改進和更新。目前，在HIV初篩實驗中使用的第三代酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑，不僅包被的抗原高度純化，且采用重組和多肽相結合的技術。雙抗原夾心法的應用使HIV抗體需兩次選擇，大大提高了敏感性，使漏檢率明顯下降。但該檢測方法對檢測人員的操作技術及試驗條件要求較高，易出現假陽性等。因此，開展實驗室質量控制是保證實驗室分析結果準確性的必要基礎，也是保證實驗間有可比性的關鍵。

隨著艾滋病流行形勢的日趨嚴峻，新發現的感染者數量不斷增加，艾滋病檢測也顯得越來越重要。目前國內檢測HIV抗體的方法主要是酶聯免疫法（ELISA）。2004年版的《全國艾滋病檢測技術規范》要求采用ELISA法時必須要包含內部和外部對照質控血清，其中外部對照質控血清是為了監控檢測的重復性和穩定性以及試劑盒批間或孔間差異，通常為弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off值）的2～3倍為宜。

HIV病毒主要侵入機體的T淋巴細胞[2]，與細胞結合而存在于血液之中，HIV抗體分布于患者的血液、精液、陰道分泌物、唾液、尿液之中，然而在血液、精液、陰道分泌物中濃度最高。近些年，感染HIV病毒的患者逐年上升，影響患者的身心健康、對生命安全產生威脅[3]，現階段仍無有效的治療方法，主要停留在預防控制階段，因此及時的診斷并加以控制十分關鍵[4]。

臨床上對HIV抗體的檢測需要通過建立HIV抗體檢測質量系統，有其特殊性，因此做好實驗室的質量管理從而確保檢測結果的準確可靠[5]。衛生部門的規章制度明確規定臨床上對HIV抗體的檢測需包含外部與內部質控血清兩部分，主要是由于處于臨界值上下的弱陽性外部對照質控血清，使得反應強度改變較易察看；然而為了保證HIV抗體檢查結果的可靠準確，在應用ELISA法檢測過程中需要有弱陽性對照質控血清，但是在臨床檢測中，醫院由于較難獲取HIV陽性抗體標本而需要通過自制質控血清。本文主要對ELISA檢測HIV抗體室內質控血清的制備與應用分析[6]，研究發現顯示正常人群的血清與試劑盒內HIV陽性血清以10：1的比例作為自制質控血清的濃度最為合適，且于對自制的質控血清進行1～12個月的評估，結果顯示其均勻性、S/CO值、準確性12個月無顯著變化，表明自制質控血清較為穩定，能夠作為HIV抗體室內質控血清，但是其存在揮發的可能性，因此質控血清使用次數需<7次，分裝合理。

綜上所述，ELISA在HIV抗體的檢測中具有較高的準確度，且檢測結果能夠在短時間內反映，值得臨床推廣應用；同時發現自制質控血清經濟方便，且具有穩定性高的優點，具有較大的應用前景。

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編輯/許言；制備與應用