HPLC法測定抗感解毒泡騰片中黃芩苷的含量

【摘要】目的建立高效液相色譜法測定抗感解毒泡騰片中黃芩苷的含量。方法采用反相高效液相色譜法，選用Hypersil GoLD Dim250（mm）×4.6色譜柱，流動相為甲醇-水-磷酸（42：58：0.3），流速為0.8mL.min-1，柱溫25℃，檢測波長為276nm。結果表明黃芩苷在0.1044-0.9396μg·mL-1范圍內呈良好線性，r=1.0000，方法平均回收率為98.93%，RSD=0.32%。結論該方法操作簡便、快速，重現性好，結果準確，適用于該藥的質量控制。

【關鍵詞】抗感解毒泡騰片；黃芩苷；HPLC；含量測定

本處方中，黃芩為該處方中君藥，為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清熱燥濕，瀉火解毒之功效。與本品的功能主治密切相關，為有效控制藥品質量，使其發揮最大療效，我們采用反相高效液相色譜法測定黃芩中黃芩苷的含量來作為質量控制指標。因此，以黃芩苷作為指標性成分，控制該制劑的內在質量，具有合理性[1]。

我們參考《中國藥典》2010版一部及國家藥品標準WS-056（Z-056）-2001（Z）中黃芩的含量測定方法，對黃芩中其有效成分黃芩苷的含量進行了測定，方法易于操作，結果準確，重現性良好[1-3]。

1儀器與試藥

美國安捷倫Agilent1200RRLC高效液相色譜儀，日本島津LC-2010AHT型高效液相色譜儀。日本島津UV-2450紫外-可見分光光度計，超聲波清洗器。黃芩苷對照品批號：110857-200406，類別：供含量測定用。甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：DimensionsC18（250mm×4.6mm；5μm）色譜柱；流動相：甲醇-水-磷酸（42：58：0.3）；流速：0.8mL.min-1，柱溫25℃；檢測波長為276nm；進樣量：10μl理論板數按黃芩苷峰計算應不低于4000。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取減壓干燥至恒重的黃芩苷對照品適量，加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取本品的10片，研細，精密稱取0.65g，置100ml容量瓶中，加50%甲醇適量，超聲30分鐘，放冷，稀釋至刻度，搖勻，取上清液，用微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3陰性對照溶液的制備為進一步考察試驗的合理性，按處方比例制成不含黃芩的陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

以正文所述方法進行測定。結果表明，陰性樣品色譜在與黃芩苷相應的保留時間附近無干擾峰檢出，從而證明本方法是合理可行的。

2.3系統適用性試驗分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10μl，注入液相色譜儀中，記錄色譜，在相同的色譜條件下，樣品中黃芩苷峰與各相鄰成分峰能有較好的分離效果，陰性對照溶液無干擾。

2.4線性關系的考察精密稱取黃芩苷對照品適量，加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9μl的系列濃度，按上述色譜條件測定峰面積，以對照品溶液進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標作標準曲線，得回歸方程：Y=3618.3+2128518.678X，r=1.00000。結果表明黃芩苷在0.1044-0.9396μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.5精密度試驗精密吸取對照品溶液10μl，按上述條件重復進樣6次，峰面積RSD為0.18%，結果表明，所用的儀器具良好的精密性。

2.6穩定性試驗取同一供試品溶液，按上述色譜條件于0，2，4，8，12h分別進樣10μl，測定色譜峰面積，RSD為0.20%，說明供試品溶液在12h內穩定。

2.7重復性試驗取同一批號（201300901）抗感解毒泡騰片樣品6份，依法制備供試品溶液，測定黃芩苷的平均含量為19.96mg/片，RSD為0.22%，結果表明本法具有良好的重復性。

2.8回收率試驗精密稱取已知含量的供試品0.5g（批號：20130901含量20.0mg/片）5份，分別精密加入一定量的對照品溶液（52.2μg/ml）50ml，照含量測定方法測定，計算回收率，結果見表1。

3討論

3.1提取方法篩選我們參考國家藥品標準WS-056（Z-056）-2001（Z）中黃芩的含量測定方法，經多次試驗驗證，此提取方法穩定，重現性較好，回收率高，所以采用[3]。

3.2檢測波長選擇取黃芩苷對照品溶液進行紫外掃描，經UV-260紫外分光光度計在200-400nm范圍內掃描，黃芩苷在278±2nm處，有最大吸收峰，故選擇276nm為本實驗的測定波長[2-3]。

3.3柱效考察按含量測定方法得黃芩苷對照品色譜圖，理論板數N=9907，在此條件下，供試品可以得到很好的分離，我們參考國家藥品標準WS-056（Z-056）-2001（Z）黃芩的含量測定方法，確定其理論板數按黃芩苷計算，不得低于2000[3]。

參考文獻

[1]中國藥典[S].一部.2010.

[2]中華人民共和國國家藥品監督局標準：WS3-B-2895-98抗感解毒顆粒.

[3]中華人民共和國國家藥品監督局標準：WS-056（Z-056）-2001（Z），抗感解毒膠囊.