不同檢驗方法檢驗陰道念珠菌病的效果比較

【摘要】目的研究陰道念珠菌病運用三種不同檢驗方法的臨床效果。方法我院選擇2010年4月——2012年4月間到醫院進行婦科檢查的婦女，采集其陰道分泌物，分別應用凝集法、顯色法以及PCR技術對檢驗結果進行鑒定。結果三種方法中運用PCR方法檢出率最高，達到96.0%，其次為快速凝集法，最后為顯色法，PCR方法的檢出率顯著高于其他兩種方法，差異顯著，有統計學意義（P<0.05）。同時還要根據PCR電泳圖譜來驗證檢驗方法的準確性及檢出率。結論PCR的操作簡便，不需要運用很好的設備及實驗材料，與過去的培養鑒定方法相比，前者更為迅速，具有更加廣闊的發展前景。

【關鍵詞】陰道念珠菌；不同檢驗方法；臨床效果；對比分析

陰道念珠菌為一種條件性致病真菌，可以在陰道的任意部位粘附存活，感染念珠菌后多出現陰道相關疾病，例如陰道白斑、陰道念珠菌病等等。現今，主要運用培養、鏡檢以及形態來診斷陰道念珠菌感染所引起的疾病[1]。最近幾年，由于分子生物學技術不斷的應用于臨床，并得到了大力的發展，在對真菌性疾病進行診斷時也逐漸開始應用一些分子生物學技術，例如：基因探針雜交技術及PCR技術等。本文對三種檢驗陰道念珠菌的方法進行研究，分別比較PCR、顯色法、快速凝集法的檢測結果。

1資料與方法

1.1一般資料我院選擇2010年4月——2012年4月間到醫院就診的300例陰道炎婦女，運用棉拭子采集其陰道分泌物。標準菌株為白念珠菌（ATCC 60193）、熱帶念珠菌（ATCC 201380）、克柔念珠菌（ATCC14243）。所有菌株均是由中國微生物菌種保藏管理委員會醫學真菌中心提供的，應用時專用新鮮配制的沙堡固體培養基，恒溫27℃進行孵育。患者臨床主要表現為：白帶增多，其內含有凝乳狀及豆渣樣粘稠物，也可表現為稀薄，但是含有一些白色的片狀物，外陰及陰道會出現瘙癢癥狀，同時伴有燒灼感。

1.2檢驗方法

1.2.1凝集法根據念珠菌快速凝集測定試劑盒中的操作步驟進行操作，如標本中存在念珠菌，可通過肉眼觀察到紫色的凝集顆粒，這時可以將其判斷為陽性；如果標本中沒有念珠菌，肉眼就看不到紫色的凝集顆粒，這時可將其判斷為陰性。

1.2.2顯色法將所取得的臨床樣本接種在科瑪嘉念珠菌顯色培養基上進行培養，出現陽性的樣本挑取出來，將菌落移種在科瑪嘉培養基上進行培養，通過在科瑪嘉培養基上進行3次傳代后，進行分離和純化[2]。科瑪嘉培養基對照結果顯示綠色的為白色念珠菌，藍灰色的為熱帶念珠菌，紫色的為光滑念珠菌，粉色的為克柔絲念珠菌。

1.2.3PCR法將科瑪嘉顯色培養平板純培養的單菌落接種子挑選出來，放在3ml沙堡弱培養液中，在恒定37℃的情況下震蕩培養48小時，之后運用核算提取試劑盒將DNA提取出來，以此作為PCR的模版，設計真菌保守區核糖體基因和ITS2基因區內引物，引物1及引物2的序列分別為：5-GCATCGATGAAGAACGCAGC-3；5-TCCTCCGCIAATTGATATCC-3[3]。50ulPCR反應體系中含有10PCR、5μl緩沖液，200μmol/L的dNTP，0.1μmol/L的引物，5μl的模板DNA及2uL Taq DNA聚合酶。循環條件：在恒溫95℃情況下預變性5min，恒溫94℃情況下預變性30s，恒溫60℃情況下退火30s，72℃延伸60s，連續進行30個循環，最后一個循環在72℃時延伸7min。

1.3統計學方法進行統計學分析時采用SPSS18.0系統軟件，運用X2表示三組檢驗陽性率，差異有統計學意義（P<0.05）。

2結果

檢驗陽性率：在對陰道念珠菌進行檢測時，三種不同檢驗方法中運用PCR方法檢出率最高，達到96.0%，其次為快速凝集法，最后為顯色法，PCR方法的檢出率顯著高于其他兩種方法，差異顯著，有統計學意義（P<0.05）。同時還要根據PCR電泳圖譜來驗證檢驗方法的準確性及檢出率。本文所采集的陰道分泌物進行真菌通同引物進行擴增。擴增片段的長度為：熱帶念球菌、白色念珠菌和克萊念珠苗均大約為500bp，光滑念珠菌大約為900bp，結果表明30個樣本中有28例檢測出有真菌存在。

3討論

陰道念珠菌在婦科中較為常見，當女性機體的免疫功能下降時就會出現陰道酸堿失衡，引起陰道炎。這給女性的身心健康帶來一定的影響，大部分患者是由于白色念珠菌感染。

最近幾年，臨床上越來越多的應用侵入性診斷治療手段，例如化療、手術干預、放療以及聯合治療等等，同時大量的超廣譜抗生素及各種免疫抑制劑等應用于臨床，自身免疫力較低的患者臨床上發生念珠菌感染的幾率相對較高[4]。過去對病原菌的鑒定和培養需要較長的時間，特異性不強，很難滿足現今臨床上的需要，例如凝集法和顯色法[5]。隨著分子生物學技術的不斷發展，PCR技術被越來越廣泛的應用于臨床上對病原菌的鑒定和檢測。

本文的研究表明，在對陰道念珠菌進行檢測時，三種不同檢驗方法中運用PCR方法檢出率最高，達到96.0%，其次為快速凝集法，最后為顯色法，PCR方法的檢出率顯著高于其他兩種方法，差異顯著，有統計學意義（P<0.05）。同時還要根據PCR電泳圖譜來驗證檢驗方法的準確性及檢出率。

綜上所述，PCR的操作簡便，不需要運用很好的設備及實驗材料，與過去的培養鑒定方法相比，前者更為迅速，具有更加廣闊的發展前景。

參考文獻

[1]陳衛群，周方紅.四種不同檢驗方法對陰道念珠菌的檢驗結果對比分析[J].當代醫學，2011（10）：61-62.

[2]程向方，王雷.陰道念珠菌4種常用檢驗方法的比較及應用[J].中國實驗診斷學，2011（08）：843-844.

[3]靳穎，張愛民，曹占良.臨床分離172株真菌的分布與耐藥性分析[J].武警醫學院學報，2007（03）：729-730.

[4]郭鳳麗，葉聯華，周友全，楊春慧.腫瘤患者臨床分離真菌的分布及耐藥性分析[J].檢驗醫學與臨床，2011（01）：674-675.

[5]劉金芳，宋先鋒.385例女性陰道分泌物常規檢查和支原體培養結果聯合觀察[J].中國民康醫學，2011（03）：56-57.