不同細胞因子和蛋白與妊娠期高血壓綜合征相關性的臨床研究

郝殿晉，李亞卓，孫 鑫，李洪臣，張秀軍

(1.秦皇島市第一醫院檢驗科，河北秦皇島066000;2.中鐵山橋集團醫院檢驗科，河北山海關066200;3.河北聯合大學生命科學學院，河北唐山063000)

妊娠高血壓綜合征(簡稱妊高征)是妊娠期特有的疾病，發生于妊娠20周后，臨床表現為高血壓、蛋白尿、浮腫，嚴重時出現抽搐、昏迷，甚至母嬰死亡。由于其病因尚不明確，至今仍是圍產醫學研究的重點。分析國內外有關妊高征免疫指標的研究，多為單獨分析某一細胞因子的價值或胎盤中細胞因子的含量，而聯合研究妊高征患者血清細胞因子和蛋白的變化的報道甚少。我們通過測定妊高征患者血清中單核細胞產生的腫瘤壞死因子 α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)、白細胞介素12(interleukin 12，IL-12)和由淋巴細胞和NK細胞產生的白細胞介素4(interleukin 4，IL-4)的表達情況，分析由Th1細胞介導的細胞免疫反應和由Th2細胞介導的體液免疫反應在妊高征患者母體免疫系統中的功能;同時檢測參與體液免疫反應的免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM，參與免疫防御系統的補體C3、C4和參與免疫調節的C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)等在妊高征中的表達。

材料和方法

一、研究對象

選取2011年5月至2012年12月秦皇島市第一醫院住院及門診的妊高征患者114例，年齡22～42歲，孕周 32+～40+周，平均(36.47±2.37)周。所有患者均按《婦產科學》(第7版)妊娠期高血壓疾病診斷與分類標準[1]確診，其中輕度子癇前期39例、重度子癇前期75例。隨機選取同期在醫院就診的正常晚期妊娠婦女93例作為對照，年齡21～40歲，孕周35+～41+周，平均孕周(37.48±1.88)周。所有入選對象均為單胎，初產婦，既往均無心、肝、腎、糖尿病及高血壓病史，排除感染性疾病、過敏性疾病及自身免疫疾病等合并癥，近3個月內未用過激素類藥物，兩組間孕周和年齡比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

二、方法

1.標本采集 所有受檢者于治療前禁食10～12 h，次日清晨抽取空腹靜脈血，分離血清待測。

2.儀器 美國Bio-Rad公司Coda型全自動酶標儀及美國Beckman-Coulter公司IMMAGE免疫分析測定儀。

3.方法 采用雙抗體夾心親和素-生物素復合酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測定 TNF-α、IL-12、IL-4，試劑盒由奧地利 COA 公司提供，IgG、IgA、IgM、補體 C3、補體C4、CRP采用散射比濁法測定。標準品由廠家提供。嚴格按試劑說明書進行操作。

三、統計學方法

結 果

一、各組血清 TNF-α、IL-12、IL-4 水平比較

與正常晚期妊娠組比較，妊高征組TNF-α、IL-12水平明顯升高，IL-4水平明顯降低(P＜0.001)。輕度子癇前期組 TNF-α、IL-4水平與正常晚期妊娠組比較差異無統計學意義(P＞0.05)，而IL-12水平明顯升高(P＜0.05)。輕度子癇前期組TNF-α、IL-12、IL-4水平與重度子癇前期組比較差異均有統計學意義(P均＜0.05)。見表1。

二、各組血清 IgG、IgA、IgM、補體 C3、補體C4、CRP 水平比較

妊高征組IgG、IgM、補體C3和補體C4水平低于正常晚期妊娠組(P＜0.001)，CRP水平高于正常晚期妊娠組(P＜0.001);但IgA兩組間水平差異無統計學意義(P＞0.05)。輕度子癇前期組IgG、IgM、C3、C4、CRP 水平與正常晚期妊娠組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，但兩組間IgA水平差異無統計學意義(P＞0.05)。輕度子癇前期組IgG、C3、C4、CRP水平與重度子癇前期組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，但兩組間IgA、IgM水平差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表1 妊高征組與正常晚期妊娠組血清TNF-α、IL-12、IL-4水平的變化 (±s，pg/mL)

表1 妊高征組與正常晚期妊娠組血清TNF-α、IL-12、IL-4水平的變化 (±s，pg/mL)

注:與正常晚期妊娠組比較，*P ＜0.05、＊＊P ＜0.001;與輕度子癇前期組比較，△P ＜0.05、△△P ＜0.001

IL-12 IL-4正常晚期妊娠組組別 例數 TNF-α 93 51.02 ±15.76 17.85 ±5.12 16.78 ±5.05妊高征組 114 75.01±24.39＊＊ 36.32±14.85＊＊ 11.32±4.02＊＊輕度子癇前期組 39 62.04 ±16.96 22.89 ±6.15* 13.89 ±4.57重度子癇前期組 75 81.76±25.20△ 43.31±13.12△△ 9.99±2.99△

表2 各組血清IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP含量的變化 (±s)

表2 各組血清IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP含量的變化 (±s)

注:與正常晚期妊娠組比較，*P ＜0.05、＊＊P ＜0.001;與輕度子癇前期組比較，△P ＜0.05、△△P ＜0.001

組別 例數 IgG(g/L) IgA(g/L) IgM(g/L) C3(g/L) C4(g/L) CRP(mg/dL)正常晚期妊娠組 93 10.83 ±3.14 3.96 ±1.03 2.42 ±0.61 1.26 ±0.30 0.33 ±0.07 0.45 ±0.15妊高征組 114 6.55 ±2.20＊＊ 3.52 ±0.98 1.56 ±0.52＊＊ 0.91 ±0.26＊＊ 0.19 ±0.08＊＊ 0.85 ±0.30＊＊輕度子癇前期組 39 7.87 ±2.73＊＊ 3.67 ±0.97 1.81 ±0.59＊＊ 1.03 ±0.27* 0.26 ±0.08* 0.62 ±0.20*重度子癇前期組 75 5.87 ±1.53△ 3.43 ±0.99 1.44 ±0.45 0.85 ±0.23△ 0.15 ±0.05△ 0.96 ±0.28△△

三、CRP與IL-12、TNF-α的直線相關分析

妊高征組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組、正常晚期妊娠組血清CRP與IL-12、TNF-α呈正相關關系(P＜0.05)。見表3。

表3 各組CRP與IL-12、TNF-α的相關性分析 [r值(P值)]

四、TNF-α與補體C3、C4的直線相關分析

妊高征組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組、正常晚期妊娠組血清TNF-α與補體C3、C4呈負相關(P＜0.05)。見表4。

表4 各組TNF-α與補體C3、C4的相關性分析 [r值(P值)]

討 論

TNF-α是一種重要的免疫調節細胞因子，能誘導血管內皮細胞產生其它炎癥介質，是炎癥細胞因子網絡的啟動因子。在正常妊娠時TNF-α維持在較低水平。適當的TNF-α可調節機體的免疫及代謝功能，而過量則導致病理改變。IL-12也是一種前炎癥細胞因子，其誘導免疫平衡向Thl方向極化使細胞免疫反應增強。IL-4是典型的由Th2細胞產生的細胞因子，在正常妊娠的維持中起重要作用[2]。

本研究結果顯示妊高征孕婦血清TNF-α、IL-12水平明顯高于正常晚期妊娠孕婦，IL-4水平明顯低于正常晚期妊娠孕婦，且隨著妊高征病情的加重，其變化程度越明顯。有研究顯示，TNF-α主要是通過損傷血管內皮細胞參與妊高征的發病[3]。1996 年，Wang等[4]通過測定胎盤中 TNF-α水平，首先發現其明顯高于正常孕婦。Serin等[5]采用前瞻性病例對照研究，認為當TNF-α＞10.13 pg/mL時，孕婦發生妊高征的可能性比較大。本研究IL-4的結果與李春香等[6]的報道相似，與孫瑜等[7]的報道不同。造成研究結果不同的原因可能系各項研究的樣本數不同，選取妊高征患者的病情程度輕重不一所致。

免疫球蛋白是一類具有抗體功能且多樣性的蛋白質，是參與體液免疫反應的主要反應物質。補體系統是非特異性免疫中極為重要的組成部分之一。當受到激活，補體成分便按一定順序呈現連續酶促反應，參與機體的防御功能和機體的自穩狀態。CRP作為炎性反應的標志物，在急性創傷和感染時濃度升高。本研究顯示妊高征患者體內循環IgG及IgM下降，IgG水平與病情的嚴重程度呈正相關，證實了妊高征患者血清IgG水平低有自身產生不足的原因。本研究結果與林其德等[8]的研究結果相同。Petrucco 等[9]認為妊高征患者腎小球中IgM型免疫復合物沉積的多少與疾病的嚴重程度呈正相關，患者血清IgM水平可作為一個估計病情和預后的實驗室指標，但本研究結果不支持這一結論。本研究顯示發現妊高征組補體C3、C4均明顯低于正常晚期妊娠組，且在輕度子癇前期便已出現下降。張俊等[10]的研究結果也發現晚孕組補體C3、C4高于妊高征組。CRP參與妊高征致病機制主要為CRP和體內細胞毒性物質引起血管內皮細胞損傷，引發內皮細胞功能障礙[11]。有證據顯示炎癥細胞因子改變了內皮含氮氧化酶的表達[12]，急性內皮一氧化氮產物阻塞引起反射性的血管收縮導致高血壓。同時血管內皮細胞損傷導致內皮源性血管舒張因子減少，也可致血壓升高。另一方面，慢性一氧化氮合成物的抑制，引起新內膜形成，導致腎臟受損，產生蛋白尿。本研究顯示妊高征組CRP均明顯高于正常晚期妊娠組，且隨著妊高征病情嚴重程度的增加而增加。由此可以推測CRP水平與妊高征病情輕重程度有著密切的聯系。Kilic-Okman等[13]的研究結果與本研究相同，妊高征患者CRP水平顯著高于正常妊娠孕婦，且與體重指數無相關性。

IL-12有促進TNF-α的作用。TNF-α可誘導內皮細胞黏附分子表達增加，激活中性粒細胞，釋放顆粒，出現炎癥反應，CRP隨之增高。最終促使妊高征的發生，加重病情。本研究結果顯示CRP與IL-12、TNF-α呈正相關。

補體活化的產物C3a可激活巨噬細胞、嗜中性粒細胞等，后者釋放TNF-α等血管活性物質。妊高征與補體活化有十分密切的關系，補體產物的增加必然消耗補體。本研究結果顯示妊高征各期TNF-α與補體 C3、C4均呈負相關。Haeger等[14]發現，在先兆子癇患者分娩時，血漿 C3a、C5a、SC5b-9水平升高的同時，伴隨白細胞介素6(interleukin 6，IL-6)和TNF-α的升高以及嗜中性粒細胞、巨噬細胞活動增加。這些物質的增高均可導致血管內皮細胞受損，從而引起妊高征的一系列病理變化。本研究結果與Haeger等[15]的研究結果相近。

從妊高征的發病過程可以看出，免疫功能的改變可能與病變的發生及程度有關。TNF-α引起妊高征的主要原因是血管內皮損傷，全身小動脈痙攣，導致血壓增高，腎血管痙攣又可以導致腎臟細胞間隙增大，蛋白漏出，出現蛋白尿，并伴有炎癥反應，CRP隨之增高。IL-12有促進TNF-α的作用。IL-4水平降低，使IL-4對妊娠的免疫保護被破壞。補體活化后激活凝血系統，使凝血功能發生改變。它們之間相互聯系，并互相影響，共同作用于機體，使妊高征患者出現了高血壓、蛋白尿、浮腫、凝血功能及肝臟功能異常等諸多的臨床表現。妊高征患者血清 IL-12、IL-4、IgG、C3、C4和CRP可反映妊高征的嚴重程度，可作為判斷病情的指標。

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