Bx亞型伴抗-B抗體產生的血型血清學特性分析與輸血策略

王 霞，王湘屏，徐 新

(1.南華大學附屬第二醫院輸血科，湖南 衡陽 421001；2.衡陽市中心血站質管科)

正確鑒定ABO血型對保障臨床輸血治療安全和療效有著極為重要的意義。ABO亞型約占總體人群的0.015％[1]，是ABO血型系統的特殊表現形式。主要是經血型血清學試驗證實ABO抗原性表達弱為主要特征的多種表型，是造成ABO血型鑒定正反定型不一致的重要原因之一。臨床實際工作中，對于ABO亞型的確診和臨床輸血相容性檢測更多地還是依靠血型血清學技術。因此，了解ABO血型系統中各種亞型血型血清學實驗的反應格局，有利于輸血技術人員正確判讀血型鑒定結果?，F將衡陽地區2006～2013年期間發現的Bx亞型伴抗-B產生病例的血型血清學特性與輸血治療方案進行分析報告如下。

1 資料與方法

1.1 樣本來源

2006～2013年本地區送衡陽市中心血站鑒定的，排除其他原因造成正反定型不符的血樣本2 261例。經血型血清學實驗檢測，符合Bx亞型伴抗-B抗體產生反應格局的患者標本共5例。其中，產后大出血3例，年齡23～35歲；復合外傷1例，男性，53歲；消化道出血1例，男性，61歲。其中1例有輸血史，1例輸血史不祥，3例無輸血史。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑、抗-H單克隆抗體(上海血液生物醫藥有限責任公司)。ABO、Rh(D)血型微柱凝膠檢測卡、抗人球蛋白檢測卡(長春博迅生物技術有限責任公司)。4％ABO試劑紅細胞、不規則抗體篩查譜細胞(長春博德生物技術有限責任公司)。

1.2.2 儀器 FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血型血清學專用離心機(長春博研科學儀器有限責任公司)。血型血清學離心機、水浴鍋等。

1.3 血型血清學檢測

1.3.1 微柱凝膠卡式法ABO血型正反定型 參照ABO、Rh(D)血型微柱凝膠檢測卡說明書進行。

1.3.2 紅細胞ABH抗原及ABO血型系統抗體檢測(試管法) 取試管4支，分別標記抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H并加入相應血型試劑各1滴，然后加入患者3％～5％紅細胞懸液1滴；另取3支試管，分別用筆標記A1c、Bc、Oc并加入患者血清各2滴和相應4％ABO試劑紅細胞各1滴；分別置4℃和室溫下反應后，放入離心機以1 000 rpm離心1 min，觀察結果。

1.3.3 不規則抗體篩查 將已標記好的抗人球蛋白檢測卡分別加入被檢者血漿50 μL及0.8％不規則抗體篩查譜細胞各1滴，置37 ℃中孵育15 min，放入血型血清學專用離心機900 rpm，2 min后，1 500 rpm，3 min，離心觀察結果。

1.3.4 直接抗人球蛋白試驗 將患者經3次洗滌后的壓積紅細胞用生理鹽水配置成0.8％的懸液，取50 μL加入抗人球蛋白檢測卡，放入血型血清學專用離心機900 rpm 2 min，1 500 rpm 3 min，離心后觀察結果。

1.3.5 吸收—放散試驗 取2 mL受檢者壓積紅細胞，用生理鹽水充分洗滌3次，棄去上清液。取等體積的抗-A、抗-B血型定型試劑與壓積紅細胞混合，置4 ℃冰箱吸收1 h，分離抗血清。將壓積紅細胞用足量的4 ℃生理鹽水充分洗滌5次，取最后一次洗液2滴分別加入4％ A1c、Bc各1滴，離心觀察，未出現凝集溶血反應。將吸收后的壓積紅細胞加1 mL生理鹽水，于56 ℃水浴中放散10 min后(期間振蕩數次)，3 500 rpm離心1 min；取放散液各2滴，分別加入相應的4 ％ A、B、O型試劑紅細胞懸液1滴，振蕩混勻，1 000 rpm離心1 min，觀察結果。

1.3.6 唾液血型物質凝集—抑制試驗 將單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑和抗-H單克隆抗體進行標化，以凝集強度(2+)為判定標準。取受檢者自然流出唾液5 mL，于3 500 rpm離心3 min，去雜質后煮沸10 min，再3 500 rpm離心5 min，取上清液各1滴分別與標化后的抗-A、抗-B標準血清和抗-H 1滴在室溫下進行中和反應10 min后，加入對應的4％ A、B、O型試劑紅細胞懸液1滴，振蕩混勻，1 000 rpm離心1 min觀察結果。

1.4 輸血治療

對血型鑒定正反定型不一致，經血型血清學實驗檢測，符合Bx亞型伴抗-B抗體產生反應格局的患者，在其進行性大量失血合并失血性休克時，給予O型紅細胞、AB型血漿、AB型血小板配合性血液輸注治療。

2 結 果

2.1 血型血清學試驗

本次研究對衡陽地區2006～2013年期間，2 261例ABO血型鑒定正反定型不符的血樣本，采用微柱凝膠卡式法和試管法進行ABO、Rh(D)血型鑒定。其中ABO血型正反定型不符，正定型為O型；反定型A1c凝集4+，Bc不凝集或凝集±；Rh(D)陽性樣本共5例。不規則抗體篩查試驗陰性。直接抗人球蛋白試驗陰性。遂進行吸收—放散試驗、唾液ABH血型物質測定等血型血清學確認實驗，具體結果見表1。

表1 血型血清學試驗結果

2.2 輸血策略和療效

2 261例血樣本經血型血清學實驗檢測，發現符合Bx亞型伴抗-B抗體產生反應格局的患者標本共5例。根據臨床輸血指征，分別給予4～11單位O型紅細胞、300～2 100 mL AB型血漿和0～30單位AB型血小板配合性血液輸注治療，并在輸注血液制品后，進行血紅蛋白、血小板、膽紅素和凝血功能等相關指標監測。各項檢測指標顯示，患者輸血后血紅蛋白、血小板、纖維蛋白原均較輸血前有所提高，血清膽紅素未出現升高，凝血功能明顯改善，出血癥狀得到控制。

3 討 論

血型鑒定受到諸多因素干擾，包括疾病影響、臨床治療和生理因素、實驗技術等原因[2]。ABO抗原的血型或變異型很多，常導致血型鑒定正反定型不一致，也給血型確認工作帶來較大的困難。ABO亞型是指以遺傳為基礎，具有明確的血清學特點，將ABO血型系統進行進一步細分的ABO血型。因年齡、疾病、妊娠等不可遺傳的因素造成的血型改變不能認為是亞型；同樣，那些雖有基因改變，但并不影響血清學特點的ABO血型也不能稱為亞型[3]。根據抗原性表達強弱，在A抗原中主要為A1和A2，其他亞型不多見，B亞型一般分為B2、B3、BX、Bm、Bel。許志遠等[4]研究結果顯示北京地區中國人群中B亞型高于A亞型，其中，ABO亞型中B亞型伴抗-B產生的比率為15.1％。本地區ABO亞型分布情況還有待于進一步研究。

大多數ABO亞型均帶有不規則的ABO抗體，這些抗體通常很弱，并且多為冷抗體，很容易漏檢，可能被錯誤定型。作為受血者，如果將亞型誤定為正常血型，同時又未能檢出這些抗體，很容易導致輸血反應[5]。因此，臨床上血型鑒定出現正反定型不符或凝集強度不一致的現象時，應迅速查明原因。在排除試劑質量、技術、藥物和人為因素后，正定型應加做抗-H、抗-A1、抗-AB血清,反定型應加做O細胞、A1細胞，同時進行吸收—放散試驗，檢測紅細胞弱A和弱B抗原,并進行凝集—抑制試驗檢測唾液中的血型物質。

ABO血型亞型的常規分型鑒定，是基于以紅細胞表面抗原表位的多少及活性的強弱，以及該紅細胞對相應抗體的吸收放散能力大小為理論依據的血型血清學方法。通常根據以下原則區分紅細胞ABO亞型：(1)紅細胞與抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB的凝集強度；(2)紅細胞上H物質活性的強弱；(3)血清中是否存在抗-A1；(4)分泌型機體的唾液中ABH物質[6]。Bx亞型血清學共同特點是：Bx紅細胞與抗-B呈弱凝集反應，有時甚至可不凝；與抗-AB凝集反應增強，有時強于抗-B；H抗原表達強度近似O型紅細胞；血清中常有不規則抗-B；分泌型個體的唾液中有時可缺乏B物質，僅有H物質。

本次分析的5例患者，鹽水試管法正定型受檢者紅細胞與抗-A、抗-B不凝集；與抗-AB反應時，4例出現弱凝集，1例不凝集；與抗-H凝集4+；反定型與A1c凝集4+，Bc不凝集。唾液ABH血型物質測定存在血型物質H，血型血清學表現基本符合Bx亞型伴抗-B抗體產生血清學格局。4℃增強試驗結果似乎是正反定型一致，但實際是B抗原減弱，同時產生低反應活性抗-B，

容易使血型誤定為O型，同時也為輸血制造了困難。

由于患者存在進行性大出血，并出現失血性休克，而ABO亞型血型鑒定時需要做的補充實驗項目較多，洗滌紅細胞成分的時間較長。依據《臨床輸血技術規范》第十條規定的Rh(D)陰性和其他稀有血型輸血原則，應采用自身輸血、同型輸血或配合性輸血。在衡陽市中心血站的指導下，對患者予以配合輸注O型紅細胞、AB型血漿、AB型機采血小板治療，未出現輸血不良反應。輸血后，進行血常規、血清膽紅素和凝血功能復檢，患者血紅蛋白、血小板、凝血功能板等相關指標實際升高值與輸注血量理論提升值基本吻合，膽紅素值未出現升高，凝血功能得到明顯改善，無輸血不良反應，治療效果良好，痊愈出院。據此，在緊急情況下，對Bx亞型伴抗-B抗體產生患者采取應急方式，進行配合性輸血治療為搶救患者生命爭取時間是可行的,這也符合臨床搶救原則。

[1]邵超鵬，莊乃寶.血型變異型與臨床輸血[J].中國輸血雜志，2009，22(7)：591.

[2]蘭炯采，中橋，陳靜嫻.輸血免疫血液學實驗技術[M].北京：人民衛生出版社，2011:132-133.

[3]向東.ABO亞型的檢測[J].中國輸血雜志，2010，23(8):577.

[4]許志遠，王濤.北京地區獻血人群ABO亞型研究[J].北京醫學，2013，35(8)：712.

[5]向東，劉熙.上海地區中國人群中ABO亞型的研究[J].中國輸血雜志,2006,19(1):25-26.

[6]李志強.簡明臨床輸血理論與實踐[M].上海：上海世界圖書出版公司，2010:253.