西洋參總皂苷酶水解產(chǎn)物成分研究

金建明，李有海，張海倫，梁朝寧，唐雙焱

1北京工商大學(xué)植物資源研究開發(fā)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100048;2云南民族大學(xué)民族藥資源化學(xué)國(guó)家民委-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650500;3中國(guó)科學(xué)院微生物研究所 中國(guó)科學(xué)院微生物生理與代謝工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100101

西洋參(Panax quinquefolium L.)又名花旗參、西洋人參、洋參、美國(guó)人參、廣東人參等，是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材，為五加科人參屬植物，原產(chǎn)北美洲的加拿大南部和美國(guó)北部，現(xiàn)我國(guó)的許多地區(qū)都有引種栽培。其味甘、微苦、性寒，可滋陰降火，益氣生津，其藥用價(jià)值有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)驚、安神促智、增強(qiáng)機(jī)體免疫、抗心律失常、防血管硬塞、保肝、降血脂等功效。對(duì)西洋參的化學(xué)成分已經(jīng)有許多研究報(bào)道，其主要活性成分是人參皂苷。西洋參總皂苷中絕大多數(shù)屬于達(dá)瑪烷四環(huán)三萜類人參皂苷［1，2］。達(dá)瑪烷四環(huán)三萜類人參皂苷根據(jù)苷元6 位碳上是否有羥基分為原人參二醇型皂苷如人參皂苷Rb1、Rb2、Rc 和Rd 等(圖1)和原人參三醇型皂苷如人參皂苷Rg1、Rg2、Re 和F1等。

稀有人參皂苷compound K 也稱人參皂苷CK或人參皂苷C-K，其結(jié)構(gòu)為20(S)-原人參二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(圖1)，屬原人參二醇型皂苷。人參皂苷compound K 在人參屬植物中幾乎不存在，首次由土壤細(xì)菌降解人參皂苷Rbl、Rb2和Rc 后被發(fā)現(xiàn)并鑒定［3］。研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷compound K 是人參等藥材中原人參二醇型皂苷經(jīng)腸道菌降解后產(chǎn)生的在人體內(nèi)發(fā)揮藥效作用的真正代謝活性物［4］。人參皂苷compound K 的生物活性具有多靶點(diǎn)、高活性和低毒性的特點(diǎn)，具有極高的生產(chǎn)價(jià)值和應(yīng)用前景，醫(yī)藥價(jià)值很高［5，6］。目前制備人參皂苷compound K 的方法多采用微生物發(fā)酵法和酶解法。利用酶解法制備人參皂苷compound K 具有反應(yīng)條件溫和、操作簡(jiǎn)便、成本低、產(chǎn)物便于純化等優(yōu)點(diǎn)［5，7］。

圖1 原人參二醇型皂苷結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of protopanaxdiol-type ginsenosides

項(xiàng)目組前期得到了高效催化人參皂苷Rb1產(chǎn)生人參皂苷compound K 的β-糖苷酶。為了研究該β-糖苷酶是否也催化其他原人參二醇型皂苷產(chǎn)生人參皂苷compound K，實(shí)驗(yàn)采用原人參二醇型皂苷含量高的西洋參總皂苷，詳細(xì)分析了西洋參總皂苷經(jīng)該β-糖苷酶完全催化水解后的成分組成，為將來(lái)進(jìn)一步采用西洋參總皂苷等高效制備人參皂苷compound K 奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Bruker Avance 400 MHz 型核磁共振波譜儀;Agilent 6520 LC/MS 質(zhì)譜儀;島津Lc-20A 高效液相色譜儀。柱層析硅膠(60～100 目)和薄層層析硅膠板H(青島海洋化工有限公司);RP-C18 反相層析材料和RP-C18 高效薄層板(Merck 公司);乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純;西洋參總皂苷購(gòu)自南京澤朗醫(yī)藥生物科技有限公司。標(biāo)準(zhǔn)品人參皂苷Rb1(批號(hào)20110526)、Rb2(批號(hào)20120311)、Rc(批號(hào)20120617)和Rd(批號(hào)20120621)購(gòu)自寶雞辰光生物科技有限公司。

1.2 酶液制備

將β-糖苷酶LacS 突變株接種到LB 培養(yǎng)基中(含100 mmol/L 卡那霉素)，接種量1%，37 ℃、280 rpm 搖床培養(yǎng)12 h 后將種子液轉(zhuǎn)接到600 mL 誘導(dǎo)培養(yǎng)基中(含100 mmol/L 卡那霉素)，接種量1%，30 ℃、280 rpm 搖床培養(yǎng)21 h。培養(yǎng)液10000 rpm 離心10 min，沉淀加入60 mL Mc 緩沖液重懸(0.2 mol/L 磷酸氫二鈉和0.1 mol/L 檸檬酸，pH=5.5)，超聲破細(xì)胞后12000 rpm 離心10 min，取上清液于60 ℃水浴中靜置10 min 后再次12000 rpm 離心10 min，上清液即β-糖苷酶液［8］。

1.3 酶水解反應(yīng)

約60 mL 酶液加入到75 mL 含7.5 g 西洋參總皂苷的Mc 緩沖液中，水浴恒溫70 ℃反應(yīng)過(guò)夜使酶催化水解反應(yīng)完全(19 h)［8］。

1.4 分離提取

135 mL 水解反應(yīng)液用等體積正丁醇萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮干燥后進(jìn)行硅膠柱層析，用二氯甲烷甲醇進(jìn)行梯度洗脫，分為五個(gè)部分(Fr I～Fr V)。各部分再經(jīng)RP-C18 柱層析，采用甲醇水進(jìn)行梯度洗脫純化各化合物。Fr I 部分1.3 g 經(jīng)50%～80%甲醇水梯度洗脫純化得到化合物1(0.807 g);Fr II 部分0.2 g 用50%～60%甲醇水梯度洗脫得到化合物6(0.049 g);Fr III 部分0.6 g 經(jīng)60%～75%甲醇水梯度洗脫得到化合物2(0.311 g);Fr IV 部分0.58 g 用20%～75%甲醇水梯度洗脫得到化合物3(0.152 g)、7(0.070 g)和4(0.046 g)。Fr V 部分1.036 g 用10%～50%甲醇水梯度洗脫得到化合物5(0.481 g)。

1.5 HPLC 檢測(cè)

西洋參總皂苷及其水解產(chǎn)物的HPLC 方法在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上略有修改［9］。西洋參總皂苷及其水解產(chǎn)物配制成3 mg/mL。HPLC 條件如下:色譜柱:Waters symmetry C18色譜柱(4.6 × 250 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)和水(B);二元高壓梯度洗脫:0～2.5 min，20% A;2.5～5 min，20%～25% A;5～10 min，25% A;10～30 min，25%～40% A;30～45 min，40%～70% A;45～60 min，70% A;流速:0.7 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 西洋參水解產(chǎn)物的組分分析

為了研究β-糖苷酶催化總皂苷后水解產(chǎn)物的成分組成及原人參二醇型皂苷生成人參皂苷compound K 的效率，將西洋參總皂苷經(jīng)β-糖苷酶催化水解過(guò)夜(19 h)，水解產(chǎn)物經(jīng)TLC 檢測(cè)初步證明原人參二醇型皂苷Rb1已經(jīng)完全被水解。HPLC 檢測(cè)分析再次確定西洋參總皂苷中的原人參二醇型皂苷人參皂苷Rb1(8)、Rc(9)、Rb2(10)和Rd(11)已經(jīng)完全水解(圖2B)。進(jìn)一步延長(zhǎng)水解反應(yīng)時(shí)間后的水解產(chǎn)物經(jīng)HPLC 檢測(cè)分析皂苷的成分和含量沒(méi)有變化，表明19 h 水解反應(yīng)已經(jīng)完全。水解產(chǎn)物中主要有二個(gè)原人參二醇型皂苷:人參皂苷compound K(1)和人參皂苷Mc(2);四個(gè)原人參三醇型皂苷:人參皂苷Rg1(3)、人參皂苷Rg2(4)、人參皂苷Re(5)和人參皂苷F1(6);以及擬人參皂苷F11(7)。其中人參皂苷compound K 是西洋參總皂苷水解產(chǎn)物中含量最高的成分。

圖2 西洋參總皂苷水解前(A)和水解后(B)以及人參皂苷compound K(C)的HPLC 色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of total ginsenoside extract of P.quinquefolium before (A)and after (B)hydrolysis as well as ginsenoside compound K standard (C)

2.2 水解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色粉末，易溶于甲醇。HR-ESI-MS m/z 645.4342 ［M+Na］+(calcd for C36H62NaO8，645.4337);1H NMR (400 MHz，pyridine-d5)δH:5.19 (1H，d，J=7.6 Hz，Glc-H-1)，1.63 (3H，s，H-21)，1.60 (6H，s，H-26，27)，1.23 (3H，s，H-28)，1.00 (3H，s，H-29)，1.00 (3H，s，H-30)，0.95 (3H，s，H-18)，0.89 (3H，s，H-19);13C NMR δC:39.4 (C-1)，28.3 (C-2)，78.1 (C-3)，39.6 (C-4)，56.4 (C-5)，18.8 (C-6)，35.2 (C-7)，40.1 (C-8)，50.3 (C-9)，37.4 (C-10)，30.8 (C-11)，70.2 (C-12)，49.7(C-13)，51.5 (C-14)，31.0 (C-15)，26.7 (C-16)，51.7 (C-17)，16.4 (C-18)，16.1 (C-19)，83.3 (C-20)，22.4 (C-21)，36.2 (C-22)，23.3 (C-23)，126.0 (C-24)，131.0 (C-25)，25.8 (C-26)，17.8(C-27)，28.7 (C-28)，16.4 (C-29)，17.4 (C-30)，98.3 (C-20-Glc-1)，75.2 (C-20-Glc-2)，79.3 (C-20-Glc-3)，71.6 (C-20-Glc-4)，78.3 (C-20-Glc-5)，62.9 (C-20-Glc-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致［10］，故化合物1 鑒定為人參皂苷compound K，即20(S)-原人參二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2 白色粉末，易溶于甲醇。1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH:5.67 (1H，s，Araf-H-1)，5.14 (1H，d，J=6.0Hz，Glc-H-1)，1.67 (3H，s，H-27)，1.63 (6H，s，H-21，26)，1.23 (3H，s，H-28)，1.04 (3H，s，H-29)，1.00 (3H，s，H-30)，0.94 (3H，s，H-18)，0.89 (3H，s，H-19);13C NMR δC:39.6 (C-1)，28.3 (C-2)，78.1 (C-3)，39.6 (C-4)，56.4 (C-5)，18.8 (C-6)，35.2 (C-7)，40.1 (C-8)，50.3 (C-9)，37.4 (C-10)，30.8 (C-11)，70.3 (C-12)，49.5(C-13)，51.2 (C-14)，30.9 (C-15)，26.7 (C-16)，51.7 (C-17)，16.4 (C-18)，16.1 (C-19)，83.4 (C-20)，22.4 (C-21)，36.2 (C-22)，23.2 (C-23)，126.1 (C-24)，131.1 (C-25)，25.8 (C-26)，17.9(C-27)，28.7 (C-28)，16.4 (C-29)，17.4 (C-30)，98.1 (C-20-Glc-1)，75.1 (C-20-Glc-2)，79.3 (C-20-Glc-3)，72.2 (C-20-Glc-4)，76.6 (C-20-Glc-5)，68.5 (C-20-Glc-6)，110.2 (C-Ara-1)，83.4 (C-Ara-2)，78.9 (C-Ara-3)，86.1 (C-Ara-4)，62.7 (C-Ara-5)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致［11］，故化合物2 鑒定為人參皂苷Mc，即20(S)-原人參二醇-20-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(圖1)。

化合物3 白色粉末，易溶于甲醇。1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH:5.17 (1H，d，J=8.0Hz，20-Glc-H-1)，5.02 (1H，d，J=8.0Hz，6-Glc-H-1)，2.07 (3H，s，H-21)，1.61 (3H，s，H-26)，1.60 (6H，s，H-27，29)，1.52 (3H，s，H-28)，1.16 (3H，s，H-18)，1.04 (3H，s，H-19)，0.81 (3H，s，H-30);13C NMR δC:39.7 (C-1)，27.9 (C-2)，78.8 (C-3)，40.4(C-4)，61.4 (C-5)，75.5 (C-6)，45.1 (C-7)，41.1(C-8)，50.0 (C-9)，39.4 (C-10)，30.7 (C-11)，70.2 (C-12)，49.2 (C-13)，51.6 (C-14)，31.0 (C-15)，26.6 (C-16)，51.4 (C-17)，17.6 (C-18)，17.8(C-19)，83.3 (C-20)，22.2 (C-21)，36.1 (C-22)，23.2 (C-23)，126.0 (C-24)，131.0 (C-25)，25.8(C-26)，17.6 (C-27)，31.8 (C-28)，16.4 (C-29)，17.2 (C-30)，98.3 (C-20-Glc-1)，75.6 (C-20-Glc-2)，79.3 (C-20-Glc-3)，71.6 (C-20-Glc-4)，78.1(C-20-Glc-5)，62.9 (C-20-Glc-6)，106.0 (C-6-Glc-1)，75.5 (C-6-Glc-2)，80.2 (C-6-Glc-3)，71.9 (C-6-Glc-4)，79.7 (C-6-Glc-5)，63.1 (C-6-Glc-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致［12］，故化合物3 鑒定為人參皂苷Rg1，即6-O-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人參三醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4 白色粉末，易溶于甲醇。1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH:6.49 (1H，s，Rha-H-1)，5.26 (1H，d，J=6.4Hz，Glc-H-1)，2.12 (3H，s，H-28)，1.79 (3H，d，J=6.0，Rha-H-6)，1.68 (3H，s，H-26)，1.63(3H，s，H-27)，1.39(3H，s，H-30)，1.35(3H，s，H-21)，1.19 (3H，s，H-19)，0.96 (3H，s，H-18)，0.93 (3H，s，H-29);13C NMR δC:39.6 (C-1)，27.7 (C-2)，78.3 (C-3)，40.0 (C-4)，60.8 (C-5)，74.3 (C-6)，46.0 (C-7)，41.2 (C-8)，49.6 (C-9)，41.1 (C-10)，32.0 (C-11)，71.0 (C-12)，48.1 (C-13)，51.6 (C-14)，31.2 (C-15)，26.8 (C-16)，54.6(C-17)，17.6 (C-18)，17.6 (C-19)，72.9 (C-20)，27.0 (C-21)，35.7 (C-22)，22.9 (C-23)，126.3 (C-24)，130.7 (C-25)，25.8 (C-26)，16.9 (C-27)，32.1 (C-28)，17.1 (C-29)，17.1 (C-30)，101.8 (C-6-Glc-1)，79.4 (C-6-Glc-2)，78.5 (C-6-Glc-3)，72.5(C-6-Glc-4)，78.3 (C-6-Glc-5)，63.0 (C-6-Glc-6)，101.9 (C-Rha-1)，72.2 (C-Rha-2)，72.4 (C-Rha-3)，74.1 (C-Rha-4)，69.4 (C-Rha-5)，18.7 (C-Rha-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致［13］，故化合物4 鑒定為人參皂苷Rg2，即20(S)-原人參三醇-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物5 白色粉末，易溶于甲醇。1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH:6.47 (1H，s，Rha-H-1)，5.24 (1H，d，J=6.4Hz，6-Glc-H-1)，5.15 (1H，d，J=8.0 Hz，20-Glc-H-1)，2.09 (3H，s，H-21)，1.76(3H，d，J=6.0Hz，Rha-H-6)，1.60 (6H，s，H-26，27)，1.58 (3H，s，H-29)，1.35 (3H，s，H-28)，1.16(3H，s，H-18)，0.96 (3H，s，H-19)，0.94 (3H，s，H-30);13C NMR δC:39.6 (C-1)，27.7 (C-2)，78.6(C-3)，39.4 (C-4)，60.8 (C-5)，74.6 (C-6)，46.0(C-7)，41.2 (C-8)，49.7 (C-9)，40.0 (C-10)，30.7(C-11)，70.2 (C-12)，49.0 (C-13)，51.4 (C-14)，30.9 (C-15)，26.6 (C-16)，51.7 (C-17)，17.3 (C-18)，17.2 (C-19)，83.3 (C-20)，22.3 (C-21)，36.0(C-22)，23.3 (C-23)，126.0 (C-24)，130.9 (C-25)，25.8 (C-26)，17.6 (C-27)，32.2 (C-28)，17.5(C-29)，17.8 (C-30)，98.2 (C-20-Glc-1)，75.1 (C-20-Glc-2)，79.1 (C-20-Glc-3)，71.5 (C-20-Glc-4)，78.2 (C-20-Glc-5)，62.9 (C-20-Glc-6)，101.9 (C-6-Glc-1)，79.4 (C-6-Glc-2)，78.4 (C-6-Glc-3)，72.5(C-6-Glc-4)，78.3 (C-6-Glc-5)，63.1 (C-6-Glc-6)，101.8 (C-Rha-1)，72.3 (C-Rha-2)，72.4 (C-Rha-3)，74.1 (C-Rha-4)，69.4 (C-Rha-5)，18.7 (C-Rha-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致［14］，故化合物5 鑒定為人參皂苷Re，即20-O-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人參三醇-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6 白色粉末，易溶于甲醇。1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH:5.21 (1H，d，J=6.8 Hz，Glc-H-1)，2.00 (3H，s，H-21)，1.60 (9H，s，H-26，27，29)，1.47 (3H，s，H-28)，1.10 (3H，s，H-18)，1.02 (3H，s，H-19)，0.98 (3H，S，H-30);13C NMR δC:39.6 (C-1)，28.1 (C-2)，78.3 (C-3)，40.3(C-4)，61.7 (C-5)，67.7 (C-6)，47.5 (C-7)，41.2(C-8)，49.9 (C-9)，39.4 (C-10)，30.9 (C-11)，70.2 (C-12)，49.1 (C-13)，51.4 (C-14)，30.8 (C-15)，26.6 (C-16)，51.6 (C-17)，17.6 (C-18)，17.5(C-19)，83.3 (C-20)，22.3 (C-21)，36.1 (C-22)，23.2 (C-23)，126.0 (C-24)，131.0 (C-25)，25.8(C-26)，17.8 (C-27)，32.0 (C-28)，16.5 (C-29)，17.4 (C-30)，98.3 (C-20-Glc-1)，75.1 (C-20-Glc-2)，78.5 (C-20-Glc-3)，71.5 (C-20-Glc-4)，79.3(C-20-Glc-5)，62.9 (C-20-Glc-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致［15］，故化合物6 鑒定為人參皂苷F1，即20(S)-原人參三醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7 白色粉末，易溶于甲醇。1H NMR(400 MHz，pyridine-d5)δH:6.48 (1H，s，Rha-H-1)，5.25 (1H，d，J=6.8 Hz，Glc-H-1)，2.10 (3H，s，H-28)，1.78 (3H，d，J=6.4 Hz，Rha-H-6)，1.46 (3H，s，H-27)，1.33 (3H，s，H-29)，1.26 (3H，s，H-21)，1.25 (3H，s，H-26)，1.21 (3H，s，H-18)，0.95 (3H，s，H-19)，0.90 (3H，s，H-30);13C NMR δC:39.5 (C-1)，27.7 (C-2)，78.3 (C-3)，40.0 (C-4)，60.8 (C-5)，74.3 (C-6)，46.0 (C-7)，41.2 (C-8)，49.6 (C-9)，41.1 (C-10)，32.0 (C-11)，71.0 (C-12)，48.1(C-13)，51.6 (C-14)，31.2 (C-15)，26.8 (C-16)，54.6 (C-17)，17.6 (C-18)，17.6 (C-19)，86.7 (C-20)，27.0 (C-21)，32.8 (C-22)，28.8 (C-23)，85.6(C-24)，70.3 (C-25)，27.2 (C-26)，27.6 (C-27)，32.4 (C-28)，18.2 (C-29)，16.9 (C-30)，101.8 (C-6-Glc-1)，79.4 (C-6-Glc-2)，78.6 (C-6-Glc-3)，72.6(C-6-Glc-4)，78.4 (C-6-Glc-5)，63.1 (C-6-Glc-6)，101.9 (C-Rha-1)，72.3 (C-Rha-2)，72.4 (C-Rha-3)，74.2 (C-Rha-4)，69.4 (C-Rha-5)，18.7 (C-Rha-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致［16］，故化合物7 鑒定為擬人參皂苷F11，即達(dá)瑪-3β，6α，12β，25-四羥基-(20S，24R)-環(huán)氧-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

3 討論

HPLC 檢測(cè)分析結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)用的西洋參總皂苷中人參皂苷Rb1是含量最高的原人參二醇型皂苷成分，其次是人參皂苷Rd、Rc 和Rb2(圖2A)。文獻(xiàn)也報(bào)道在西洋參總皂苷中，人參皂苷Rb1、Rd、Rc和Rb2是其主要原人參二醇型皂苷成分，且人參皂苷Rb1是其中含量最高的原人參二醇型皂苷［1，2，9，17］。研究已表明人參皂苷compound K 可由原人參二醇型皂苷Rb1、Rb2、Rc 和Rd 等通過(guò)酶水解而產(chǎn)生［5，7］。從西洋參總皂苷的水解產(chǎn)物中分離得到的原人參二醇型皂苷除人參皂苷compound K 外，另外得到人參皂苷Mc，但沒(méi)有分離到原人參二醇型皂苷Rb1、Rb2、Rc 或Rd。HPLC 檢測(cè)分析也證明水解產(chǎn)物中只存在原人參二醇型皂苷compound K 和Mc，而不存在主要原人參二醇型皂苷Rb1、Rb2、Rc和Rd(圖2B)。HPLC 檢測(cè)分析證明西洋參總皂苷中并不存在人參皂苷compound K 和Mc(圖2A)，這表明人參皂苷Rb1、Rb2、Rc 和Rd 已經(jīng)完全被該β-糖苷酶催化水解，而人參皂苷Mc 不能進(jìn)一步被催化水解產(chǎn)生人參皂苷compound K 或這種催化活性很低。

原人參二醇型皂苷的糖基連接在C-3 或C-20的羥基上。原人參二醇型皂苷Rb1、Rb2、Rc 和Rd在C-3 的羥基上連接有糖基，而水解產(chǎn)物人參皂苷compound K 和Mc 在C-3 的羥基上都沒(méi)有糖基，因此推斷該β-糖苷酶能將西洋參中原人參二醇型皂苷的C-3 的羥基的糖基全部水解。

人參皂苷Rc 和Rb2的分子量相同而且結(jié)構(gòu)也很相似，區(qū)別在于連接在苷元C-20 的糖基不同:人參皂苷Rc 是一個(gè)呋喃阿拉伯糖基連接在C-20 的葡萄糖基的6 位羥基上，而人參皂苷Rb2是一個(gè)吡喃阿拉伯糖基連接在C-20 的葡萄糖基的6 位羥基上(圖1)。人參皂苷Rc 經(jīng)該β-糖苷酶水解可產(chǎn)生人參皂苷Mc，如進(jìn)一步水解可產(chǎn)生人參皂苷compound K;人參皂苷Rb2經(jīng)該β-糖苷酶水解可產(chǎn)生人參皂苷compound K，但不可能產(chǎn)生人參皂苷Mc。由于從水解產(chǎn)物中只分離到人參皂苷compound K和Mc，表明該β-糖苷酶能水解C-20 的葡萄糖基上的吡喃阿拉伯糖基，但不能水解C-20 的葡萄糖基上的呋喃阿拉伯糖基或水解呋喃阿拉伯糖基的活性很低。

1 Su J(蘇健)，Li YH(李海舟)，Yang CR(楊崇仁).Studies on saponin constituents in roots of Panax quinquefolium.China J Chin Mater Med(中國(guó)中藥雜志)，2003，28:830-833.

2 Wang L(王蕾)，Wang YP(王英平)，Xu SQ(許世泉)，et al.A review on studies of the components and pharmacological activity of Panax quinquefolium L.Spec Wild Econ Anim Plant Res(特產(chǎn)研究)，2007，3:73-77.

3 Yoshika I，Sugawara T，Imai K，et al.Soil bacterial hydrolysis:leading to genuine aglycone.V.on ginsenosides-Rb1，Rb2and Re of the ginseng root saponins.Chem Pharm Bull，1972，20:2418-2421.

4 Hasegawa H.Proof of the mysterious efficacy of ginseng basic and clinical trials metabolic activation of ginsenoside deglycosylation by in testinal bacteria and esterification with fatty acid.J Pharmacol Sci，2004，95:153-157.

5 Zhou W(周偉)，Zhou P(周珮).Advances in the study of ginsenoside compound K.Acta Pharm Sin(藥學(xué)學(xué)報(bào))，2007，42:917-923.

6 Li XP(李相鵬)，Wang P(王鵬)，Li YX(李英霞).Progress in pharmacological actions of ginsenoside compound K，an activemetabolite of protopanaxadiol type saponins.Chin J Pharmacol Toxicol，2011，25:97-101.

7 Li X(李學(xué))，Zang P(臧埔)，Zhang LX(張連學(xué))，et al.Research progress on ginsenoside CK production by microbial transformation.Food Sci(食品科學(xué))，2012，33:323-327.

8 Liang CN(梁朝寧)，Xiong DD(熊丹丹)，Tang SY(唐雙焱).A screening method for mutations produce high yield of rare ginsenosides from major ginsenosides.CN201310246807.9，2013-6-20.

9 Meng Q(孟瓊)，Qian ZM(錢正明)，Chen ZY(陳治宇)，et al.HPLC characteristics of Panax quinquefolium.Chin J Pharm Anal(藥物分析雜志)，2010，30:791-795.

10 Haruyo K，Shuichi S，Yoshiteru I，et al.Studies on the saponins of ginseng IV.on the structure and enzymatic hydrolysis of ginsenoside-Ra1.Chem Pharm Bull，1982，30:2393-2398.

11 Bae EA，Choo MK，Park EK，et al.Metabolism of ginsenoside Rc by human intestinal bacteria and its related antiallergic activity.Biol Pharm Bull，2002，25:743-747.

12 Shoji Y，Kiyoko K，Osamu T.Study on dammarane-type saponins of roots，leaves，flower-buds and fruits of Panax ginseng C.A.Meyer.Chem Pharm Bull，1979，27:88-92.

13 Yang XW(楊秀偉).Complete assignment of1H and13C NMR chemical shifts of 20(R)-ginsenoside Rg2and 20(S)-ginsenoside Rg2.Chin J Magn Reson(波譜學(xué)雜志)，2000，17:9-15.

14 Zeng J(曾江)，Cui XM(崔秀明)，Zhou JM(周家明)，et al.Studies on chemical constituents from rhizomes of Panax notogingseng.J Chin Medi Mater(中藥材)，2007，30:1388-1391.

15 Song JP(宋建平)，Zeng J(曾江)，Cui XM(催秀明)，et al.Studies on chemical constituents from rhizomes of Panax notoginseng(Ⅱ).J Yunnan Univ(云南大學(xué)學(xué)報(bào))，2007，29:287-290.

16 Tanaka O，Yahara S.Dammarane saponins of leaves of Panax pseudo-ginseng subsp.Himalaicus.Phytochem，1978，17:1353-1358.

17 Zhai WM(翟為民)，Yuan YS(袁永生)，Zhou YX(周玉新)，et al.HPLC fingerprints identification of Panax ginseng C.A.Mey.，P.quinquefolium L.and P.notoginseng(Burk.F.H.Chen).China J Chin Mater Med(中國(guó)中藥雜志)，2001，26:481-482.