蒙藥多葉棘豆中的黃酮類化學(xué)成分

孟根小，王青虎，郭玉海，奧·烏力吉*

1中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，北京 100193;2內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，通遼 028300

多葉棘豆為豆科植物狐尾藻棘豆［Oxytropis myriophylla (Pall.)DC］的干燥地上部位，蒙藥名為那布其熱哈·烏如吐扎，配伍入蒙藥清感九味丸、七雄丸、七味水銀丸、薩仁嘎日迪等30 余種方劑［1，2］，治療風(fēng)疹、流感、咽喉腫痛以及癰瘡腫毒和多種出血證。雖為臨床常用藥物，但多葉棘豆的研究鮮有報道，化學(xué)成分的研究方面，一些學(xué)者從多葉棘豆中分離提純了黃酮類［3-5］、木酚素類［6］、三萜皂苷［7］和生物堿類［8］，但不夠全面系統(tǒng)。為了進一步研究多葉棘豆的化學(xué)成分，充分闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實驗經(jīng)過系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，分離提純近30 個化合物，其中已鑒定10 個黃酮類化合物，分別為:4，4'-二甲氧基-6'-羥基查爾酮(1)、2'，4'-二羥基-4-甲氧基查爾酮(2)、7，8-二羥基二氫黃酮(3)、4，2'，4' -三羥基查爾酮(4)、2'，4'-二羥基二氫查爾酮(5)、4'-羥基二氫黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、2'，4'-二羥基查爾酮(7)、芹菜素(8)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(9)和3'，7-二羥基-2'，4'-二甲氧基異黃烷(10)。以上化合物中1～9 均為首次從該植物中分離。

1 材料與儀器

核磁共振譜采用Bruker ARX-500 型核磁共振譜儀;分光光度計(UV-2501PC 型，日本島津);半制備高效液相色譜儀(LC6-AD 輸液泵，SPD-10Avp 檢測器，SCL-10Avp 工作站);SHINADZU PRC-ODS 色譜柱(20 mm × 250 mm，15 μm)電 子 天 平(AUW220D 型，日本島津);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE52-2型，上海瀘西分析儀器廠)。硅膠(青島海洋化工廠，200～300 目);Sephadex LH-20(Pharmacia 公司);氘代試劑為Cambridge Isotope Laboratories，InC;柱色譜試劑均為分析純。多葉棘豆于2013年12月由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院提供，并由布和巴特爾教授鑒定為豆科狐尾藻棘豆Oxytropis myriophylla(PALL.)DC.的全草。

2 提取與分離

粉碎多葉棘豆5.0 kg，加95%乙醇50 L，回流提取3 h，濾過。藥渣再用95%乙醇30 L 分兩次提取，濾過，合并濾液。濾液減壓回收乙醇得浸膏680.5 g。浸膏加適量水成懸浮液，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3 次，合并提取液，減壓回收溶劑得石油醚提取物143.0 g，二氯甲烷提取物117.0 g，乙酸乙酯提取物37.3 g 和正丁醇提取物153.5 g。二氯甲烷萃取部分(100 g)加150 g 硅膠(160～200 目)拌樣，充分干燥，上硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-丙酮(100∶0～0∶100)梯度洗脫，250 mL 收集，洗脫液經(jīng)TLC 檢識合并，得6 個流分。流分1(120 mg)經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反復(fù)純化，并TLC 檢識得化合物5(10 mg);流分2(130 mg)以二氯甲烷-丙酮(80∶1)反復(fù)洗脫得黃色和白色兩種物質(zhì)，分別經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶得化合物7(12 mg)和10(5 mg);流分3(100 mg)經(jīng)二氯甲烷-丙酮(60∶1)反復(fù)洗脫，得化合物1(8 mg)和2(7 mg)結(jié)晶。乙酸乙酯萃取部分(20 g)，經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(100∶1、60∶1、40∶1、20∶1)梯度洗脫，得4 個流分。流分2(60 mg)經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反復(fù)洗脫，得化合物8(5 mg);流分3(80 mg)經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反復(fù)洗脫得黃色混合物(25 mg)，再經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以甲醇-水(49∶51)反復(fù)分離制備，得化合物3(7 mg)和4(8 mg)。正丁醇萃取部分(130 g)，經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(100∶1、60∶1、30∶1、10∶1)梯度洗脫，得4 個流分。流分2(100 mg)經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(1∶1)反復(fù)洗脫得化合物9(9 mg)，流分3(90 mg)過濾，經(jīng)半制備高效液相色譜儀，以甲醇-水(32∶68)反復(fù)分離制備，得化合物6(6 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 鮮黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:13.6 (1H，s，2'-OH)，3.98 (6H，s，4，4'-OCH3)，8.14 (1H，d，J=9.0 Hz，H-6')，6.37 (1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3')，6.24 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5')，7.78 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.76(1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.36 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，6.93(1H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)。13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:191.7 (-CO-)，113.1(C-1')，163.5 (C-2')，109.0 (C-3')，166.4(C-4')，103.1 (C-5')，133.2 (C-6')，117.9 (α-C)，144.5(β-C)，126.2 (C-1)，131.6 (C-2，6)，116.3 (C-3，5)，160.8 (C-4)，55.7(OCH3)。據(jù)以上數(shù)據(jù)與文獻［9］對照，鑒定該化合物為4，4'-二甲氧基-2'-羥基查爾酮。

化合物2 鮮黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:13.5 (1H，s，2'-OH)，10.1 (1H，s，4'-OH)，3.91 (3H，s，4-OCH3)，8.15 (1H，d，J=9.0 Hz，H-6')，6.35 (1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3')，6.21 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5')，7.75 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.73 (1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.34 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，6.91(1H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)。13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:192.0 (-CO-)，113.6 (C-1')，163.1 (C-2')，108.1(C-3')，166.3 (C-4')，103.4 (C-5')，133.1 (C-6')，118.3 (α-C)，144.1 (β-C)，126.0 (C-1)，131.3 (C-2，6)，116.5 (C-3，5)，161.4 (C-4)，56.9(OCH3)。據(jù)以上數(shù)據(jù)與文獻［10］對照，鑒定該化合物為2'，4'-二羥基-4-甲氧基查爾酮。

化合物3 淡黃色結(jié)晶(甲醇)，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR (500 MHz，MeOD)δ:7.40 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6')，7.32 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，7.27 (1H，d，J=8.5 Hz，H-4')，5.80 (1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，5.79 (1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6)，5.36 (1H，dd，J=13.0，3.0 Hz，H-2)，2.99 (1H，dd，J=16.5，13.0 Hz，H-3α)，2.65(1H，dd，J=16.5，2.5 Hz，H-3β);13C NMR (126 MHz，MeOD)δ:197.1 (C-4)，168.2 (C-7)，165.5(C-8)，164.7(C-9)，140.5 (C-1')，129.7 (C-3'，5')，129.6 (C-4')，127.4(C-2'，6')，103.2 (C-10)，97.4(C-6)，96.4(C-5)，80.4(C-2)，44.2(C-3)。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻［11］對照，鑒定該化合物為7，8-二羥基二氫黃酮。

化合物4 鮮黃色結(jié)晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:13.1 (1H，s，2'-OH)，10.1 (1H，s，4'-OH)，9.78 (1H，s，4-OH)，，8.11 (1H，d，J=9.0 Hz，H-6')，7.70 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.73(1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.30 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，6.91(1H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)，6.33(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-3')，6.22 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5');13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:192.0 (-CO-)，114.2 (C-1')，161.8 (C-2')，108.7(C-3')，163.1 (C-4')，103.7 (C-5')，133.0 (C-6')，117.8 (α-C)，144.7 (β-C)，126.2 (C-1)，131.8 (C-2，6)，116.1 (C-3，5)，159.8 (C-4)。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻［12］對照，鑒定該化合物為4，2'，4' -三羥基查爾酮。

化合物5 白色粉末(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:12.74 (1H，s，2'-OH)，7.63(1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，7.30 (2H，m，H-3，5)，7.23(3H，m，H-2，4，6)，6.35 (1H，d，J=2.4 Hz，H-3')，6.37(1H，dd，J=5.0，2.4 Hz，H-5')，3.24 (2H，t，J=10.0，5.0 Hz，α-H)，3.05 (2H，t，J=10.0，5.0 Hz，β-H);13C NMR(126 MHz，CDCl3)δ:203.6(CO)，165.2(C-4')，162.5(C-2')，140.8(C-1)，132.2(C-6')，128.6(C-3，5)，128.4(C-2，6)，126.3(C-4)，113.9(C-1')，107.7(C-5')，103.6 (C-3')，39.70 (α-C)，30.3 (β-C)。據(jù)以上數(shù)據(jù)并與文獻［13］對照，鑒定該化合物為2'，4'-二羥基二氫查爾酮。

化合物6 淡黃色粉末(甲醇)，易溶于甲醇和乙醇，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)為陽性，提示該化合物為黃酮苷。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.51(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，6.39 (1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6)，6.16 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.33 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6')，6.71 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，5.36 (1H，dd，J=13.0，3.0 Hz，H-2)，3.01 (1H，dd，J=16.5，13.0 Hz，H-3α)，2.49 (1H，dd，J=16.5，3.0 Hz，H-3β);13C NMR(126 MHz，DMSO-d6)δ:79.3 (C-2)，43.9 (C-3)，190.4 (C-4)，128.5 (C-5)，112.0 (C-6)，165.1(C-7)，103.3 (C-8)，162.8 (C-9)，111.0 (C-10)，130.8 (C-1')，127.1 (C-2'，6')，113.4 (C-3'，5')，159.1 (C-4')。糖的碳信號δ:100.1 (C-1'')，75.1(C-2'')，76.8 (C-3'')，70.2 (C-4'')，77.4 (C-5'')及61.8 (C-6'')，提示該糖是葡萄糖，并且在1H NMR 譜中給出了端基質(zhì)子信號δ 5.01 (1H，d，J=6.5 Hz)，顯示為β 糖苷鍵。在HMBC 譜中端基質(zhì)子信號δ 5.01 (1H，d，J=6.5 Hz)與165.1 (C-7)相關(guān)，說明葡萄糖連接在7 位。其數(shù)據(jù)與文獻［14］基本一致，故鑒定該化合物為4'-羥基二氫黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7 黃色粉末(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR (500MHz，CDCl3)δ:13.36(1H，s，2'-OH)，7.57 (1H，d，J=15.5 Hz，α-H)，7.89 (1H，d，J=15.5 Hz，β-H)，7.68 (2H，m，H-3，5)，7.45 (3H，m，H-2，4，6)，7.84 (1H，d，J=8.4 Hz，H-6')，6.45 (1H，dd，J=8.4，2.4Hz，H-5')，6.43 (1H，d，J=2.4 Hz，H-3');13C NMR(126 MHz，CDCl3)δ:192.0(CO)，166.5(C-2')，162.7(C-4')，144.7(β-C)，134.7(C-1)，132.1 (C-6')，130.8 (C-4)，129.0 (C-2，6)，128.6(C-3，5)，120.3(α-C)，114.6 (C-1')，107.8(C-5')，103.8(C-3')。其數(shù)據(jù)與文獻［13］基本一致，故鑒定該化合物為2'，4'-二羥基查爾酮。

化合物8 黃色結(jié)晶(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，推測為黃酮類化合物。在1H NMR (500 MHz，DMSO-d6):δ 6.77 (1H，s，H-3)，6.18 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.46 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.90(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，6')，6.93 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，12.90 (1H，s，5-OH)。其數(shù)據(jù)與文獻［15］中譜學(xué)數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為芹菜素。

化合物9 淡黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)為陽性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR (500 MHz，DMSO-d6)δ:12.96(1H，s，5-OH)，6.85(1H，s，H-3)，6.46(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.87 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.95 (2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6')，6.95 (2H，d，J=9.0 Hz，H-3'，5')，5.17(1H，d，J=9.0 Hz，H-1'')，3.29(3H，m，J=9.0 Hz，H-2''，3''，5'')，3.81(1H，d，J=9.0 Hz，H-4'');13C NMR (126 MHz，MSO-d6)δ:164.2(C-2)，102.9(C-3)，181.9(C-4)，161.3(C-5)，99.3(C-6)，162.5(C-7)，94.6(C-8)，156.8(C-9)，105.3(C-10)，120.7(C-1')，128.5(C-2'，6')，161.0(C-4')，115.9(C-3'，5')，99.3(C-1'')，71.5(C-2'')，72.8(C-3'')，74.7(C-4'')，76.0(C-5'')，170.5(6''-COOH)。其數(shù)據(jù)與文獻［16］中譜學(xué)數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。

化合物10 白色粉末(甲醇)，易溶于甲醇和乙醇。1H NMR (500 MHz，CDCl3)δ 6.96(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.80(1H，d，J=8.7 Hz，H-6')，6.47(1H，d，J=8.7 Hz，H-5')，6.40(1H，dd，J=11.8，2.4 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，4.35(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)，4.07(1H，t，J=10.0 Hz，H-2)，3.95(3H，s，OCH3)，3.87(3H，s，OCH3)，3.55(1H，m，H-3)，3.03 (1H，dd，J=16.1，10.3 Hz，H-4)，3.01 (1H，ddd，J=16.1，12.1，1.7 Hz，H-4);13C NMR (126 MHz，CDCl3)δ 155.2(C-7)，154.9(C-9)，151.1(C-4')，147.5(C-3')，135.4(C-2')，130.4(C-5)，121.8(C-6')，120.3(C-1')，114.8(C-10)，107.9(C-6)，103.7(C-5')，103.2(C-8)，69.7(C-2)，61.0(OCH3)，55.8(OCH3)，32.1(C-3)，30.2(C-4)。其數(shù)據(jù)與文獻［17］基本一致，故鑒定為3'，7-二羥基-2'，4'-二甲氧基異黃烷。

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