赤芝中的一個新的酚性二聚體

苗金花，晏永明，王心龍，程永現(xiàn)*

1河南中醫(yī)學(xué)院，鄭州 450046;2 中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650201

靈芝為多孔菌科高等真菌赤芝或紫芝的干燥子實(shí)體［1］，自古被稱為仙草，是我國最為名貴的中藥材之一。中醫(yī)認(rèn)為靈芝有扶正固本、補(bǔ)氣安神之功效［2］。現(xiàn)代藥理則表明靈芝具有增強(qiáng)人體免疫、調(diào)節(jié)血糖、控制血壓、輔助腫瘤放化療、保肝護(hù)肝、促進(jìn)睡眠等功效［3］。本實(shí)驗(yàn)對赤芝的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到6個化合物，包括1個新的酚性二聚體。

1 儀器和材料

VGAUTO Spec-3000 及Finnigan MAT 90 質(zhì)譜儀;Bruker AM-400 及Avance III 600 MHz 核磁共振儀(TMS 作為內(nèi)標(biāo)，δ 為ppm，J 為Hz)。硅膠(80～100 目和200～300 目)(青島海洋化工廠);40～63 μm RP-18(日本Daiso);45～75 μm MCI gel CHP 20P(日本三菱公司產(chǎn)品);25～100 μm Sephadex LH-20(Pharmacia 公司)。

赤芝于2012 年7 月購自中國吉林省北芝菌業(yè)科技開發(fā)有限公司，樣品經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所楊祝良研究員鑒定，憑證標(biāo)本(CHYX-0579)保存于中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

取赤芝的干燥全體80 kg，粉碎后用95%的乙醇回流提取(2 × 360 L × 2 h)，濃縮得總提物。總提物用水適當(dāng)稀釋(體積約為25 L)，然后用乙酸乙酯萃取3 次(3 × 25 L)，得到乙酸乙酯部分1.1 kg。經(jīng)硅膠色譜柱進(jìn)行分離，以氯仿-甲醇(100∶1～1∶1)梯度洗脫，得到7個組分(F1～F7)。F6(24 g)經(jīng)MCI gel CHP 20P 柱，以甲醇-水(30%～80%)梯度洗脫，得到6個組分(F6a-F6f)。F6b(680 mg)經(jīng)Sephadex LH-20 柱(MeOH)，再經(jīng)RP-18 柱，以甲醇-水(50%～70%)洗脫，得到化合物1(5 mg)。F6c(1.7 g)經(jīng)Sephadex LH-20(MeOH)，硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(6∶1)洗脫，然后經(jīng)RP-18 柱，以甲醇-水(30%～40%)洗脫，得化合物2(8 mg)、3(24 mg)。F6d(2.4 g)經(jīng)MCI gel CHP 20P 柱，以甲醇-水(10%～70%)梯度洗脫，再經(jīng)RP-18 柱，以甲醇-水(40%～80%)洗脫，Sephadex LH-20 柱(MeOH)，得化合物4(6 mg)、5(17 mg)、6(10 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 淡黃色固體，由13C NMR、DEPT 譜及高分辨質(zhì)譜［HR-ESI-MS:m/z 235.0599［M +H］+(calcd for C12H11O5，235.0606)］確定其分子式為C12H10O5，計算其不飽和度為8。分析1H NMR 譜發(fā)現(xiàn)烯區(qū)或芳香區(qū)有2個質(zhì)子(δH6.86，d，J=8.7 Hz，H-7;δH6.91，d，J=8.7 Hz，H-8)，裂峰均為d峰，且偶合常數(shù)同為8.7 Hz，表明芳香區(qū)存在鄰位質(zhì)子偶合，中場區(qū)的信號(δH5.08，dd，J=6.8，4.8 Hz，H-4)為連氧的次甲基，除此之外，高場區(qū)還有4個裂峰為多重峰的質(zhì)子信號存在。1H-1H COSY 譜顯示H-7/H-8，H-2/H-3/H-4 相關(guān)，表明C-2-C-3-C-4相連的結(jié)構(gòu)片段，且化合物1 中存在1，2，3，4-四取代苯 環(huán)。HMBC 譜 顯 示 H-2 與 C-1、C-1a (δC117.7)、C-4 相關(guān)，H-3 與C-1、C-4a(δC171.9)、C-4相關(guān)，以及H-4 與C-1a、C-4a 相關(guān)，可以確定C-1a-C-1-C-2-C-3-C-4-C-4a 片段的存在，這樣形成1個六元環(huán)。除了苯環(huán)，1個酮基，一對雙鍵(C-1a 與C-4a)和1個六元環(huán)，結(jié)構(gòu)中還應(yīng)存在1個環(huán)，考慮到C-1a、C-4a、C-5a 與C-9a 的碳化學(xué)位移，唯一的可能性是C-4a 與C-5a 通過一個氧橋相連。至此化合物1 的平面結(jié)構(gòu)可以得到確定。結(jié)構(gòu)中含有1個手性中心，由于測得的比旋光值為0，因此，我們推測該化合物應(yīng)是以外消旋體形式存在，最終經(jīng)手性柱分析，確定了化合物1 是一對外消旋體。仔細(xì)分析可以發(fā)現(xiàn)，該化合物應(yīng)是一個二聚體。化合物1 是新化合物，命名為ganolucidin。［α］20D 0 (c 0.20，MeOH)，ESI-MS:m/z 233［M-H］-，HR-ESI-MS:m/z 235.0599 ［M+H］+(calcd for C12H11O5，235.0606);1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:6.91 (1H，d，J=8.7 Hz，H-8)，6.86 (1H，d，J=8.7 Hz，H-7)，5.08 (1H，dd，J=6.8，4.8 Hz，H-4)，2.83 (1H，m，H-2a)，2.67 (1H，m，H-2b)，2.51 (1H，m，H-3a)，2.23(1H，m，H-3b);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:199.2 (C-1)171.9 (C-4a)，150.4 (C-6)，141.7(C-9)，138.6 (C-5a)，117.7 (C-1a)，116.5 (C-7)，113.2 (C-9a)，103.1 (C-8)，62.9 (C-4)，34.7 (C-2)，33.2 (C-3)。

圖1 化合物1 的主要HMBC 和COSY 相關(guān)Fig.1 Key HMBC and COSY correlations of 1

化合物2 白色粉末，1H NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.15 (1H，d，J=3.0 Hz，H-6)，6.89(1H，dd，J=8.9，3.0 Hz，H-4)，6.71 (1H，d，J=8.9 Hz，H-3)，4.32 (2H，q，J=7.1 Hz，5-OCH2CH3)，1.32 (3H，t，J=7.1 Hz，5-OCH2CH3);13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ:171.3 (COOH)，156.1 (C-5)，150.7 (C-2)，124.9 (C-4)，119.0 (C-3)，115.3(C-6)，113.4 (C-1)，62.5 (5-OCH2CH3)，14.5 (5-OCH2CH3)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［4］中的2-羥基-5-甲氧基苯甲酸對照，大部分信號一致，區(qū)別在于化合物2中5-位的取代為乙氧基，這一變化可有1H NMR 和13C NMR 中明顯看出，故確定化合物2 為2-羥基-5-乙氧基苯甲酸。該化合物作為合成原料曾經(jīng)被報道，但作為天然產(chǎn)物尚屬于首次被分離。

化合物3 白色粉末，ESI-MS:m/z 175 ［MH］-，1H NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.37 (1H，d，J=9.0 Hz，H-8)，7.30 (1H，d，J=3.0 Hz，H-5)，7.15(1H，dd，J=9.0，3.0 Hz，H-7)，6.11 (1H，s，H-3)，2.35 (3H，s，2-CH3);13C NMR (100 MHz，CD3OD)δ:180.6 (C-4)，169.3 (C-2)，156.5 (C-6)，152.1(C-9)，125.0 (C-10)，124.5 (C-7)，120.5 (C-8)，109.8 (C-3)，108.7 (C-5)，20.5 (2-CH3)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［5］基本一致，故確定化合物3 為2-甲基-6-羥基色原酮。

化合物4 黃色粉末，1H NMR (400 MHz，acetone-d6)δ:11.71 (1H，s，2-OH)，7.28 (1H，d，J=2.9 Hz，H-6)，7.07 (1H，dd，J=8.8，2.9 Hz，H-4)，6.79 (1H，d，J=8.8 Hz，H-3)，2.60 (3H，s，H-8);13C NMR (100 MHz，acetone-d6)δ:205.5 (C-7)，156.4 (C-2)，150.1 (C-5)，125.6 (C-4)，120.2 (C-1)，119.3 (C-6)，116.3 (C-3)，26.9 (C-8)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［6］基本一致，故確定化合物4 為2，5-二羥基苯乙酮。

化合物5 白色粉末，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:10.33 (1H，s，OH)，7.26 (1H，d，J=3.0 Hz，H-6)，7.01 (1H，dd，J=9.2，3.0 Hz，H-4)，6.88(1H，d，J=9.2 Hz，H-3)，3.94 (3H，s，OCH3);13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:170.1 (C=O)，155.8(C-2)，147.7 (C-5)，124.0 (C-4)，118.5 (C-6)，114.7 (C-3)，112.1 (C-1)，52.4 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［7］基本一致，故確定化合物5 為2，5-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物6 白色粉末，ESI-MS:m/z 161 ［MH］-，1H NMR (400 MHz，CDCl3)δ:8.13 (1H，d，J=5.9 Hz，H-2)，7.48 (1H，d，J=9.1 Hz，H-5)，7.41(1H，d，J=3.0 Hz，H-8)，7.26 (1H，dd，J=9.1，3.0 Hz，H-6)，6.31 (1H，d，J=5.9 Hz，H-3);13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:180.0 (C-4)，158.2 (C-2)，156.7 (C-6)，152.2 (C-9)，126.4 (C-10)，124.8(C-7)，120.9 (C-8)，112.1 (C-3)，108.7(C-5)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［8］基本一致，故確定化合物6 為6-羥基色原酮。

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