GC 法同時(shí)測(cè)定金喉健噴霧劑中4 種有效成分

楊 瓊， 柳立偉， 乙 引， 李 霞， 楊 林， 伍 慶*

(1. 貴州省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站，貴州 貴陽(yáng)550081;2. 貴州師范大學(xué)，貴州 貴陽(yáng)550001;3. 貴州宏宇藥業(yè)有限公司，貴州 貴陽(yáng)550018)

金喉健噴霧劑是由艾納香油、大果木姜子油、 薄荷腦、甘草酸單銨鹽組成的苗藥，具有祛風(fēng)解毒、消腫止痛、清咽利喉等功效，臨床用于治療風(fēng)熱所致咽痛、咽干、咽喉紅腫、牙齦腫痛、口腔潰瘍等癥，效果較好［1-5］。1，8-桉葉素為大果木姜子油的主要成分［6］，藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明其具有抗菌、殺蟲(chóng)、祛濕解毒作用，并具有良好的透皮滲透作用［7-9］;艾納香油和大果木姜子油中均含有的樟腦，具有除濕殺蟲(chóng)、溫散止痛、開(kāi)竅辟穢之功效，主治疥癬瘙癢、跌打傷痛、牙痛等癥［10-12］，綜上所述1，8-桉葉素和樟腦的主治功效均與本方的主治功能相符，為該制劑有效成分。目前對(duì)于金喉健噴霧劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究較少，現(xiàn)行企業(yè)部頒標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定項(xiàng)下，主要對(duì)其中的薄荷腦和龍腦的量進(jìn)行測(cè)定，本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)［13-14］，建立了氣相色譜法同時(shí)測(cè)定金喉健噴霧劑中1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦4 種有效成分的分析方法，該法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可靠準(zhǔn)確度高，為更好地控制金喉健噴霧劑的質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HP-6890 氣相色譜儀，氫火焰離子檢測(cè)器(美國(guó)Agilent 公司)，Agilent Chemstation 色譜工作站;XS-105 電子天平(梅特勒-托利多)，移液器(規(guī)格分別為100 ～1 000 μL、20 ～200 μL;eppendorf 公司)。

1.2 試藥 1，8-桉葉素(批號(hào)110788-200705)、樟腦(批號(hào)110747-200507)、薄荷腦(批號(hào)0728-200005)、龍腦(批號(hào)110881-201107)對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;萘(分析純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司);無(wú)水乙醇(色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)。金喉健噴霧劑 (批 號(hào) 分 別 為 111203、111016、121005、121107;規(guī)格為10 mL/瓶;均由貴州宏宇藥業(yè)有限公司提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 HP-INNOWAX 毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);進(jìn)樣口溫度250 ℃;載氣為氮?dú)?體積流量1.0 mL/min;進(jìn)樣量1 μL;分流比20 ∶1;升度程序，80 ℃保持2 min，以5 ℃/min 升至120 ℃保持15 min，再以30 ℃/min升至240 ℃保持2 min;FID 檢測(cè)器溫度250 ℃;氫氣體積流量30 mL/min，空氣流量300 mL/min，尾吹氣流量30 mL/min。

2.2 溶液配制

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制 精密稱取萘250 mg，置于100 mL 量瓶中，用無(wú)水乙醇定容，搖勻，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 分別取1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇溶解制成 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 1.84、1.20、6.24、8.00 mg/mL的對(duì)照品貯備液。取0.25 mL 1，8-桉葉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液、0.20 mL 樟腦標(biāo)準(zhǔn)貯備液、0.75 mL 薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)貯備液、0.50 mL 龍腦標(biāo)準(zhǔn)貯備液于5 mL量瓶中，再加入1.0 mL 內(nèi)標(biāo)溶液，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度分別為0.092 0、0.048 0、0.936、0.800 mg/mL 的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 精密移取金喉健噴霧劑0.60 mL 于1 mL 量瓶中，加入0.20 mL 內(nèi)標(biāo)液，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按金喉健噴霧劑的組成處方及生產(chǎn)工藝制成不含大果木姜子油和艾納香油的陰性樣品和不含大果木姜子油、艾納香油和薄荷腦的陰性樣品。按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制得相應(yīng)樣品溶液。

2.3 方法專屬性考察 取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)試，記錄色譜圖，結(jié)果1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦的理論塔板數(shù)均不低于100 000，與相鄰成分達(dá)到基線分離，且陰性對(duì)照品無(wú)干擾。對(duì)照品、樣品與陰性樣品的色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取1，8-桉葉素對(duì)照貯備液0.10、0.25、0.50、0.60、1.0 mL 于5 個(gè)5 mL量瓶中，再分別加入樟腦對(duì)照貯備液0.10、0.20、0.40、0.80、1.00 mL，薄荷腦對(duì)照貯備液溶液2.00、1.50、1.00、0.75、0.40 mL，龍腦對(duì)照貯備液0.10、0.25、0.50、1.00、1.25 mL，最后分別精密加入1 mL 內(nèi)標(biāo)使用液，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別量取5 個(gè)線性質(zhì)量濃度的溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以待測(cè)物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦對(duì)萘峰面積比值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明各組分在各自進(jìn)樣范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Calibration curve and linear range

圖1 GC 色譜圖Fig.1 GC chromatograms

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品混合溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣分析6 次，1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦的RSD (n =6)分別為0.8%、0.5%、1.5%、1.5%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，分別于配制后0、2、5、8、24 h，于“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦的RSD(n=5)分別為0.5%、0.7%、0.9%、1.4%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批(批號(hào)111203)金喉健噴霧劑樣品按“2.2.3”項(xiàng)的方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行分析。1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦的RSD (n =6)分別為1.5%、2.4%、2.7%，2.8%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率考察 精密吸取樣品0.30 mL 金喉健噴霧劑樣品(批號(hào)111016)共9 份，置于燒杯中，分別精密加入“2.2.2”項(xiàng)下1，8-桉葉素對(duì)照貯備液45、55、65 μL，樟腦對(duì)照貯備液42、56、64 μL，薄 荷 腦 對(duì) 照 貯 備 液 165、210、250 μL，龍腦對(duì)照貯備液40、50、60 μL，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每一質(zhì)量濃度平行制備3 份，按照“2.1”項(xiàng)下色譜方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery tests

2.9 樣品測(cè)定 金喉健噴霧劑樣品按照“2.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，每批次平行制備3 份，在“2.1”項(xiàng)色譜方法下按照內(nèi)標(biāo)法測(cè)定1，8-桉葉素、樟腦、薄荷腦、龍腦，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品檢測(cè)結(jié)果(mg·mL -1，n=3)Tab.3 Results of the sample determination (mg·mL -1，n=3)

3 討論

關(guān)于色譜柱的選擇的考察。本實(shí)驗(yàn)考察了HP-5、DB-FFAP、HP-INNOWAX 3 種毛細(xì)管色譜柱，經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)試表明HP-INNOWAX (聚乙二醇固定液)峰型、分離效果、響應(yīng)值均優(yōu)于其他兩種色譜柱，且該色譜柱對(duì)樣品中水具有耐受性，對(duì)此類含水量較高的噴霧劑可以直接進(jìn)樣，減少前處理的操作步驟。

關(guān)于內(nèi)標(biāo)物的選擇。該藥物可氣化成分復(fù)雜，采用外標(biāo)法測(cè)量誤差較大。本實(shí)驗(yàn)考察了水楊酸甲酯、萘、鄰苯二甲酸二甲酯作為內(nèi)標(biāo)物，其中水楊酸甲酯有干擾，鄰苯二甲酸二甲酯與樣品分離效果較差，萘與待測(cè)物分離效果較好，且與待測(cè)物出峰位置較近，可以作為內(nèi)標(biāo)物以有效防止系統(tǒng)誤差。

該方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確度高，為金喉健噴霧劑的質(zhì)量全面控制提供了一個(gè)有效方法。

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