百事樂(lè)膠囊抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究

劉 林， 王宇紅 ， 孟 盼， 莫韋皓， 姜 帆， 韓遠(yuǎn)山

(1. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥藥理(心血管)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙410007;2. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410007;3. 湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南長(zhǎng)沙410007)

抑郁癥是一種常見(jiàn)的情感和精神障礙性疾病，隨著生活節(jié)奏的加快，抑郁癥已成為當(dāng)今社會(huì)的高發(fā)疾病。對(duì)于抑郁癥的治療，目前西醫(yī)多采用5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、單胺氧化酶抑制劑、三環(huán)類(lèi)等合成抗抑郁藥，但合成抗抑郁藥物大多存在抗抑郁譜窄、毒副作用大、易復(fù)發(fā)及依賴(lài)性高等缺點(diǎn)［1-2］。中醫(yī)藥治療抑郁癥立足于整體調(diào)節(jié)，具有療效好、副作用小、安全可靠等許多優(yōu)點(diǎn)。抑郁癥屬于中醫(yī)的郁癥范疇，證候復(fù)雜多變，最常見(jiàn)為肝郁氣滯癥，多由于情志受到刺激而致，其病機(jī)當(dāng)在心氣不足與肝氣不舒兩個(gè)方面，治療藥物多以理氣、安神、開(kāi)竅等為主。百事樂(lè)膠囊(百事樂(lè))為具有獨(dú)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)的中藥復(fù)方制劑，其處方由貫葉連翹等藥味組成，是根據(jù)古代中醫(yī)理論及國(guó)內(nèi)外治療抑郁癥的研究成果為基礎(chǔ)，經(jīng)過(guò)篩選擬定的臨床經(jīng)驗(yàn)方。處方以貫葉連翹為君，姜黃為臣，人參為佐使，共奏解郁安神、理氣疏肝之功效?；诖?，本實(shí)驗(yàn)考察了百事樂(lè)對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁癥動(dòng)物模型的防治作用，為百事樂(lè)膠囊的臨床推廣提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 試藥 百事樂(lè)，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑科提供，10 g 生藥/g，用時(shí)以蒸餾水配制百事樂(lè)膠囊高、中、低劑量，分別為0.8、0.4、0.2 g/kg;利血平注射液，1 mg/mL，廣東邦民制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)081017;鹽酸氟西汀，規(guī)格20 mg/片，Lilly S. A 公司生產(chǎn)，批號(hào)A509291。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR 小鼠，雄性，體質(zhì)量18 ～22 g。由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK (滬)2008-0016。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 ZZ-6 小鼠自主活動(dòng)儀(成都泰盟科技有限公司);AY-120 電子分析天平(日本島津);DT-1000A電子天平(江蘇常熟市意歐儀器儀表有限公司);CW100型溫度換能器(北京新航興業(yè)科貿(mào)有限公司);BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 對(duì)利血平誘導(dǎo)的抑郁癥模型小鼠的影響［3-4］取ICR小鼠75 只，SPF 級(jí)，雄性，體質(zhì)量18 ～22 g，按照體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，具體為:模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(氟西汀0.013 g/kg)，百事樂(lè)高劑量組(0.8 g/kg)、百事樂(lè)中劑量組(0.4 g/kg)、百事樂(lè)低劑量組(0.2 g/kg)，每組15 只，灌胃給藥，給藥體積20 mL/kg，每日1 次，連續(xù)給藥22 d。末次給藥前測(cè)基礎(chǔ)體溫，給藥同時(shí)腹腔注射利血平4 mg/kg，于注射利血平后6、24 h 時(shí)分別測(cè)肛溫1 次，比較各組的體溫值;于注射利血平后1、2、6 h 將動(dòng)物放于支架上觀察各組中眼鹼關(guān)閉的動(dòng)物數(shù)，比較各組間眼鹼閉合等級(jí)的差異程度(眼睛全閉記3 分;眼睛閉3/4 記2 分;眼睛閉1/2 記1 分;眼睛全睜記0 分)，記錄每只動(dòng)物的得分情況。

2.2 小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)［5］取ICR 小鼠75 只，SPF 級(jí)，雄性，體質(zhì)量18 ～22 g，按照體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，具體分組給藥同“2.1”項(xiàng)。末次給藥后1 h，動(dòng)物放自主活動(dòng)儀中7 min，記錄后5 min 每分鐘的自主活動(dòng)次數(shù)。

2.3 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)［6］取ICR 小鼠75 只，SPF 級(jí)，雄性，體質(zhì)量18 ～22 g，按照體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，具體分組給藥同“2.1 項(xiàng)”。末次給藥后1 h，記錄5 min 內(nèi)小鼠不動(dòng)時(shí)間。

2.4 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)［7-8］取ICR 小鼠75 只，SPF 級(jí)，雄性，體質(zhì)量18 ～22 g，按照體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，具體分組給藥同“2.1 項(xiàng)”。末次給藥后1 h，將小鼠單個(gè)地垂直放入3 000 mL 燒杯中強(qiáng)迫游泳。將小鼠放入筒中游泳6 min，記錄后4 min 內(nèi)保持不動(dòng)狀態(tài)時(shí)間。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 16.0，數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析及組間t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)利血平誘導(dǎo)的抑郁癥小鼠的影響 結(jié)果見(jiàn)表1，與模型組比較，藥后1、2 h 時(shí)，可明顯降低利血平引起的小鼠眼瞼關(guān)閉程度，在藥后6 h 時(shí)，氟西汀能明顯對(duì)抗利血平引起的小鼠體溫下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05 或P ＜0.01);藥后1、2 h 時(shí)，百事樂(lè)高、中劑量組明顯對(duì)抗利血平引起、小鼠眼瞼關(guān)閉程度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);在給藥后，百事樂(lè)對(duì)利血平引起的小鼠體溫下降有一定的對(duì)抗作用，但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

表1 對(duì)利血平誘導(dǎo)的抑郁癥模型小鼠眼瞼關(guān)閉程度和體溫的影響(±s，n=15)

表1 對(duì)利血平誘導(dǎo)的抑郁癥模型小鼠眼瞼關(guān)閉程度和體溫的影響(±s，n=15)

注:與模型組比較，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1體溫)/℃ 眼瞼關(guān)閉的程度藥后6 h 藥后24 h 藥后1 h 藥后2 h 藥后6 h模型對(duì)照組 - 36.2 ±0.6 36.5 ±0.8 2.73 ±1.19 3.27 ±0.65 3.09±1.04鹽酸氟西汀組 0.013 36.8 ±0.9▲ 36.9 ±1.0 1.27 ±1.16▲ 2.07 ±1.03▲▲ 2.87 ±1.19百事樂(lè)高劑量組 0.8 36.6 ±0.5 36.8 ±0.7 1.43 ±1.21▲ 2.23 ±1.37▲ 2.56 ±1.28百事樂(lè)中劑量組 0.4 36.6 ±0.8 36.8 ±0.6 1.54 ±1.33▲ 2.37 ±1.05▲ 2.93 ±1.03百事樂(lè)低劑量組 0.2 36.5 ±0.7 36.7 ±0.5 2.59 ±1.22 2.88 ±1.30 3.06 ±1.06

3.2 對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 結(jié)果見(jiàn)表2，與模型組比較，鹽酸氟西汀組動(dòng)物活動(dòng)次數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。百事樂(lè)高、中劑量組動(dòng)物活動(dòng)數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05 或P ＜0.01)。提示百事樂(lè)具有增加小鼠自主活動(dòng)數(shù)的作用。

3.3 對(duì)小鼠懸尾的影響 結(jié)果見(jiàn)表2，與模型組比較，氟西汀組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。百事樂(lè)高、中劑量組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05 或P ＜0.01)。提示百事樂(lè)高、中劑量具有減少小鼠絕望行為的作用。

3.4 對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳的影響 結(jié)果見(jiàn)表2，與模型組比較，氟西汀組、百事樂(lè)高、中劑量組游泳不動(dòng)時(shí)間均縮短，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，提示百事樂(lè)具有減少小鼠獲得性絕望行為的作用。

表2 對(duì)獲得性絕望模型小鼠自主活動(dòng)的影響(±s，n=15)

表2 對(duì)獲得性絕望模型小鼠自主活動(dòng)的影響(±s，n=15)

注:與模型組比較，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1) 自主活動(dòng)數(shù) 懸尾不動(dòng)時(shí)間/s 游泳不動(dòng)時(shí)間/s模型對(duì)照組123.13 ±12.10 78.0 ±19.4 81.3 ±14.5鹽酸氟西汀組 0.013 91.92 ±13.51▲▲ 48.8 ±24.5▲▲ 47.9 ±19.6▲百事樂(lè)高劑量組 0.8 90.38 ±18.28▲▲ 49.8 ±34.6▲▲ 50.9 ±30.8▲百事樂(lè)中劑量組 0.4 98.63 ±16.58▲ 60.3 ±36.6▲ 65.3 ±24.7▲百事樂(lè)低劑量組-0.2 103.40 ±19.32 72.3 ±47.3 72.8 ±26.4

4 討論

抑郁動(dòng)物模型對(duì)抗抑郁藥的研究和開(kāi)發(fā)具有至關(guān)重要的作用，本實(shí)驗(yàn)所采用的利血平實(shí)驗(yàn)被廣泛用于抗抑郁藥物的篩選和評(píng)價(jià)［9］。對(duì)利血平誘導(dǎo)的小鼠抑郁模型，存在動(dòng)物上下眼瞼下垂及體溫下降的癥狀［10］。本實(shí)驗(yàn)以上瞼下垂和體溫下降為考察指標(biāo)，百事樂(lè)高、中、低劑量組均具有降低模型小鼠上瞼下垂的作用，且同時(shí)對(duì)利血平引起的體溫下降有一定的改善作用。

小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)屬于行為絕望實(shí)驗(yàn)，該狀態(tài)與人類(lèi)的抑郁癥發(fā)病有相似的病理學(xué)基礎(chǔ)，故而此兩種模型可作為研究抑郁癥的主要模型［11］。該模型對(duì)抗抑郁藥有較高的選擇性和特異性，藥理作用時(shí)程與臨床相吻合，動(dòng)物的行為表現(xiàn)頗似抑郁癥病人的某些特征，用于抑郁癥和抗抑郁藥的研究是比較理想的模型［2］。百事樂(lè)高、中劑量組均具有明顯的增加模型小鼠自主活動(dòng)數(shù)、縮短模型小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間及游泳不動(dòng)時(shí)間的作用，說(shuō)明百事樂(lè)膠囊具有一定的抗抑郁活性。兩種模型的結(jié)果均提示百事樂(lè)膠囊有良好的改善抑郁癥癥狀的效果。

中醫(yī)認(rèn)為“郁癥未有不傷肝者”，因此抑郁癥的治療多用疏肝健脾方法［12］。方中姜黃味苦、辛，性溫;歸脾、肝經(jīng);功能破血行氣。主血瘀氣滯諸證，主要成分姜黃素具有抗抑郁作用，其作用發(fā)揮與單胺神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)。貫葉連翹味苦、澀，性平;歸肝經(jīng);具有清心明目、調(diào)經(jīng)活血、止血生肌、解毒消炎的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明:貫葉連翹具有抗抑郁、抗病毒、抗菌、鎮(zhèn)痛等作用;人參甘微苦、溫;歸肺、脾心、腎經(jīng);功能大補(bǔ)元?dú)?，固脫生津，安神，用為佐使，佐君藥之升，而防諸藥之耗傷氣津。方中各藥調(diào)和藥性，通過(guò)多種有效成分的合理、有機(jī)的組合，多途徑地作用于機(jī)體，促使其最大限度的發(fā)揮抗抑郁功效。

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