頭痛寧口罩的制備和質量控制

董 艷， 潘渭樵， 胡一莉， 柏平華， 吳永江

(1. 浙江大學藥學院，浙江 杭州310058;2. 浙江省湖州市長興縣中醫院，浙江長興313100;3. 浙江省湖州市藥品檢驗所，浙江 湖州313000;4. 浙江省湖州市長興縣衛生局，浙江 長興313100)

偏頭痛是一種臨床常見的慢性神經血管性疾患［1］，超過1/2 的偏頭痛患者的頭痛會影響工作或學習，近1/3 的患者可因頭痛而誤工或者缺課。世界衛生組織(WHO)發布的2001 年世界衛生報告將常見疾病按健康壽命損失年進行排列，偏頭痛位列前20 位，并將嚴重偏頭痛定為最致殘的慢性疾病，類同于癡呆、四肢癱瘓和嚴重精神病［2］。

中醫認為偏頭痛屬于“偏頭風”、“額角上痛”、“頭半邊痛”、“頭角痛”或“厥頭痛”等范疇［3-5］。引起偏頭痛的病因主要有感受外邪和內傷不足，且以內傷為多見。肝陽化風，痰瘀阻竅，氣血虧損，肝腎不足為偏頭痛的主要病理機制［6-7］。中醫理論認為，選擇芳香揮發性中藥刺激鼻部，通過官竅吸收，作用于經絡、血脈及臟腑，可以起到通調全身臟腑氣血的作用，達到治療全身疾病的目的［8］。本研究選擇若干祛風行氣的中藥，制成頭痛寧口罩，并進行質量研究。

1 材料和儀器

1.1 材料 川芎、白芷、當歸、細辛和冰片購自浙江省長興縣中醫院中藥房。經浙江大學中藥研究所吳永江教授鑒定川芎為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort. 的干燥根莖，白芷為傘形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.)Benth. et Hook. f 的干燥根，當歸為傘形科植物當歸Angelica sinensis (Oliv.)Diels 的干燥根，細辛為馬兜鈴科植物北細辛Asarum heterotropoides Fr.Schmidt var. mandshuricum (Maxim.)Kitag. 的干燥根和根莖，冰片為中藥冰片Dryobalanopsaromatica Gwaertn. f.。川芎對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號0918-200004)、阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號0773-9910)。歐前胡素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110756-200110);甲醇為色譜純(北京北化精細化學品有限責任公司)，水為純化水。

1.2 儀器 RT-02A 型靜音粉碎機(北京維博創機械設備有限公司);Leica DM2500 生物顯微鏡;高效液相色譜儀:Agilent 1200 series，包括四元泵(G1311A)帶真空脫氣機(G1322A)，自動進樣器(G1329A)，柱溫箱(G1316A)，紫外檢測器 (G1314A)，Chemstation 色譜工作站 (美國Agilent 公司);電子天平(AR140C，美國OHAUS 儀器有限公司);超聲波清洗器(KUDOS，上海科導超聲儀器有限公司)。

2 方法和結果

2.1 口罩的制備 分別取當歸、川芎、白芷、細辛、冰片適量，使用粉碎機以2 500 r/min 的速度粉碎15 min，收取通過六號篩且不通過七號篩的粉末。分別取當歸粉末40 g、川芎粉末33 g、白芷粉末20 g、細辛粉末6 g、冰片粉末1 g，混合均勻，裝入空白口罩的夾層內，每個口罩的裝量為5.0 g，密閉包裝即得。共制備3 個批次，批號分別為20111212，20120507，20121010。

2.2 鑒別

2.2.1 薄層色譜 取頭痛寧口罩2 個，取出中藥粉末，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醇1 mL 使其溶解，作為供試品溶液。另取缺川芎的中藥粉末、川芎對照品、阿魏酸對照品同法處理，分別點于同一硅膠G 薄層板上，點樣量為10 μL，以環己烷-乙酸乙酯(4 ∶1)為展開劑，在密封的展開缸中展開約1 h，取出，置紫外光燈(365 nm)下檢視。結果如圖1 所示。供試品各斑點分離良好，缺川芎的中藥粉末未出現川芎的特征性斑點。

圖1 薄層色譜鑒別結果

2.2.2 顯微鑒別 取藥物粉末少許，制片，置顯微鏡下觀察，可見當歸的梯紋導管，紡錘形韌皮薄壁細胞，壁略厚，表面有極微細的斜向交錯紋理;可見川芎的導管呈螺紋，淀粉粒呈橢圓形、長圓形，臍點點狀、長逢狀或人字狀;草酸鈣晶體存在于薄壁細胞中，呈類圓形或類簇晶狀;可見川芎的木栓細胞呈深黃棕色，多角形，壁薄，具體如圖2 所示。

圖2 顯微鑒別結果

2.3 檢查

2.3.1 粒度 照《中國藥典》粒度檢查法第二法測定［9］，結果通過六號篩的粉末質量平均為97%，符合要求。

2.3.2 均勻度 取頭痛寧口罩6 個，取出中藥粉末，置光滑紙上，平鋪約5 cm2，將其表面壓平，在明亮處觀察，樣品色澤均勻，無色斑和花紋。

2.3.3 水分測定 取頭痛寧口罩6 個，取出中藥粉末，照《中國藥典》2010 年版水分測定第二法［9］即甲苯法測定頭痛寧中藥包的含水量，測得平均含水量為7%，符合要求。

2.3.4 裝量差異 取頭痛寧口罩10 個，分別精密稱定每個口罩的質量，然后除去內容物，內壁用刷子刷凈殘余粉末，再分別精密稱定空白口罩的質量，求出每袋的裝量與平均裝量，平均裝量與標示量相比較，不得少于標示量，每袋的質量與標示量相比較，超出質量差異限度±7%的不得多于2 袋，并不得有1 袋超出限度的1 倍。結果平均裝量差異為4.44%，有一份口罩的裝量差異超過7%，但是不超過限度的一倍，均符合要求。

2.3.5 微生物限度 取頭痛寧口罩3 個，取出中藥粉末，稱取10 g，加pH 7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 mL，用勻漿儀混勻，作為1 ∶10 的供試液，要求每克的細菌數不得超過100 cfu;霉菌和酵母菌數每克的細菌數不得超過10 cfu;且不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌。結果每1 g 的細菌數為90 cfu;霉菌和酵母菌數每1g 的細菌數為6 cfu;未檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌，微生物限度符合要求。

2.4 樣品中成分測定

2.4.1 色譜條件 Zorbax C18色譜柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相為甲醇-水(80 ∶20);檢測波長300 nm;體積流量1.0 mL/min;柱溫25 ℃;進樣量10 μL。

2.4.2 溶液的配制

2.4.2.1 對照品貯備液 精密稱取在五氧化二磷干燥24 h的歐前胡素對照品22.50 mg，置100 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4.2.2 供試品溶液 取頭痛寧口罩中中藥粉末2.0 g，置50 mL 量瓶中，加入80%甲醇45 mL，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)45 min，取出，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，溶液經微孔濾膜(0.45 μm)濾過，棄去初濾液，取續濾液即得。

2.4.2.3 陰性樣品溶液 取無白芷的中藥粉末2.0 g，置50 mL 量瓶中，加入80% 甲醇45 mL，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)45 min，取出，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，溶液經微孔濾膜(0.45 μm)濾過，棄去初濾液，取續濾液即得。

2.4.3 專屬性試驗 按“2.1”項下色譜條件，分別精密吸取缺白芷的陰性樣品溶液、供試品溶液和對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄圖譜。供試品色譜圖中在與對照品色譜峰相應的位置上有一相同保留時間的色譜峰，而陰性樣品溶液在此保留時間處無色譜峰。表明在此色譜條件下，其他成分對歐前胡素的測定結果不存在干擾，如圖3 所示。

圖3 歐前胡素對照品(A)、陰性對照溶液(B)和供試品溶液(C)HPLC 色譜圖

2.4.4 標準曲線 分別精密吸取對照品貯備液1.0、2.0、4.0、8.0、20.0、40.0 mL 于100 mL 量瓶中，加甲醇定容后，各取10 μL 注入液相色譜儀中，測定色譜峰面積。以歐前胡素質量濃度(C)為橫坐標，色譜峰面積(A)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程A =64.474C -20.012，r=0.999 9。結果表明，歐前胡素在2.25 ～90 mg/L 范圍內線性關系良好。

2.4.5 精密度試驗 取同一份供試品溶液10 μL，重復進樣6 次，記錄峰面積，計算精密度，結果RSD=0.07%。

2.4.6 重復性試驗 取同批次(20120507)樣品6 份，照上述方法測定，計算重復性，結果RSD=0.77%。

2.4.7 穩定性試驗 取批次 (20120507)樣品，照“2.4.2”項方法制成供試品溶液，在0、3、6、12、24、36 h 分別進樣，測定色譜峰面積，考察供試品的穩定性。結果RSD = 1.32%，n = 6，說明供試品在36 h 內是穩定的。

2.4.8 加樣回收率試驗 取已知含有量的同批次(20120507)樣品適量共9 份(相當于歐前胡素0.34 mg)，精密稱定，分別精密加入歐前胡素對照品貯備液 (225 mg/L)1、1.5、2 mL，配制成低、中、高3 種質量濃度系列，每一種質量濃度配制3 份，按供試品溶液制備方法配制，照樣品含量測定方法操作，每份進樣2 次，以平均峰面積計算歐前胡素，計算平均回收率。結果見表1。

2.4.9 樣品測定 精密稱取3 批次口罩中樣品粉末適量，按照“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液，測定各色譜峰面積，按照標準曲線計算含量，結果見表2。

3 討論

當歸辛溫性動，其活血通絡止痛之效尤著， 《本草綱目》有“治頭痛、心腹諸痛”的記載;《丹溪心法·頭痛》云:“頭痛須用川芎，如不愈各加引經藥，太陽川芎，陽明白芷，少陰細辛”。川芎辛溫走竄，能上行頭目，具活血搜風止痛之效，亦可助當歸活血通絡，祛風止痛［10］。冰片則具有開竅醒神、清熱散毒的功效。故選擇當歸、川芎、白芷、細辛、冰片五味藥材制備頭痛寧口罩。

表1 歐前胡素加樣回收率試驗

表2 自制頭痛寧口罩中歐前胡素測定結果

頭痛寧口罩中有效成分歐前胡素在甲醇、乙醇中都有較好的溶解度［11］，所以本實驗考察了甲醇、乙醇、水以及2 種有機溶劑與水不同比例的混合液的提取回收率，經過比較發現80% 甲醇的提取回收率最高，故最終選擇80%甲醇作為提取溶劑。

自制頭痛寧口罩中有效成分歐前胡素在甲醇、乙醇中分別選用功率300 W，頻率50 kHz，超聲提取15、30、45 min，按照樣品前處理方法處理后，測定歐前胡素，結果發現提取時間45 min 時歐前胡素的提取效率較高，因此采用超聲提取時間45 min。

文獻［12-13］報道選用甲醇和0.1%磷酸水溶液為流動相可獲得較好的色譜峰形，本實驗通過調整甲醇與水的比例，確定甲醇-水(80 ∶20)為流動相，獲得了滿意的分離效果，保留時間適中。

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