中成藥及保健食品中違法添加諾氟沙星快速篩查方法的研究

2014-01-13 09:20:26丘淦才郭智聰

中成藥 2014年8期

關鍵詞：方法

丘淦才，潘宇，郭智聰

(佛山市食品藥品檢驗所，廣東佛山528000)

前列腺增生和前列腺炎是男性前列腺的常見疾病。前列腺疾病需要長期治療、難以治愈、容易反復。治療前列腺疾病的有抗菌藥，也有中成藥，其中抗菌藥起效迅速，但長期服用有較嚴重的副作用［1］。另外市場上還有一些聲稱有助于前列腺疾病治療的保健食品。為了迎合部分前列腺疾病患者既想快速起效，又想副作用小的心理，一些不良廠商在中成藥或保健食品中擅自添加諾氟沙星等喹諾酮類抗菌藥，患者往往在不知情的情況下，服用所謂的保健食品，同時又服用抗菌藥，對患者產生危害，特別是肝、腎功能不全的患者，其危害性很大［2］。

洪美華等［3］采用薄層色譜法建立了中成藥和保健食品中違法添加氟喹諾酮類抗菌藥的快速篩查方法。目前尚沒有中成藥及保健食品中添加喹諾酮類抗菌藥的理化快速方法的報道。

1 快速篩查方法的研究

1.1 快速篩查方法取本品1 ～2 粒(片)，置試管中，加三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)1 mL，強力振搖10 s，過濾，加1 mL 0.01 mol/L 鹽酸溶液至濾液中，振搖10 s，靜置分層，吸取上層液體置另一試管中，滴2 ～3 滴硫酸鐵銨溶液，振搖，陽性樣品立即顯橙黃色，陰性樣品不變色，檢測結果見圖1。圖1 中左側為陰性樣品，右側為陽性樣品。

1.2 提取試劑的選擇諾氟沙星在水中極微溶解，在乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷等能用于萃取的溶劑中幾乎不溶，在鹽酸溶液中易溶。大部分中成藥、保健食品中含水溶性色素，如果用水或0.01 mol/L 鹽酸溶液提取，則水溶性色素容易對顯色反應造成嚴重干擾。用乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷等作為提取溶劑則可避免水溶性色素對顯色反應的干擾。但諾氟沙星在乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷等有機溶劑中極微溶解，其溶解的諾氟沙星只能與顯色劑起微弱的顏色變化，也容易受到干擾。為了避免水溶性色素對顯色反應的干擾和完全的溶解樣品中的諾氟沙星，本法采用三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)為提取試劑［4］。經試驗，10 mg 的諾氟沙星能在1mL 的三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)中完全溶解，并且三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)能和萃取試劑完全的分層，提取液也很容易過濾。

圖1 樣品檢測結果

1.3 萃取試劑的選擇因諾氟沙星易溶于0.01 mol/L 鹽酸溶液，用0.01 mol/L 鹽酸溶液作萃取劑，能基本將溶解在三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)的諾氟沙星萃取至水層(上層液體)，且上層液體幾乎無色，避免了萃取液本底顏色對顯色反應的干擾。

1.4 硫酸鐵銨顯色液的配制方法稱取硫酸鐵銨(AR)2.000 0 g 溶于2.5 mL 濃HNO3中，用水溶液稀釋到250 mL［5］。

2 HPLC-DAD 確證方法

2.1 波長的選擇取諾氟沙星對照品，用0.01 mol/L 鹽酸溶液制成含約15 μg/mL 的溶液，在波長210 ～350 nm 處進行掃描，結果λmax=278.2 nm。因而取278 nm 作為本方法的檢測波長［6］。

2.2 色譜條件和系統適應性參考有關文獻，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，檢測器為DAD，以0.01 mol/L 四丁基溴化銨溶液(準確稱取3.22 g 四丁基溴化銨，溶解于1 000 mL水中，用磷酸調節pH 值至3.0 ± 0.1)-乙腈(94 ∶6)為流動相，體積流量1 mL/min，檢測波長為278 nm，進樣量為20 μL。理論板數以諾氟沙星計不低于3 000，諾氟沙星峰與其他色譜峰的分離度大于1.5［7-8］。

2.3 對照品溶液的制備取諾氟沙星對照品約10 mg，用0.01 mol/L 鹽酸溶液制成約50 μg/mL 的溶液。

2.4 供試品溶液的制備取本品1 粒或1 片(片劑先磨碎)，置20 mL 量瓶中，加0.01 mol/L 鹽酸溶液適量，超聲20 min 使溶解后，放冷，再用0.01 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度。濾過。

2.5 測定法取對照品溶液及供試品溶液各20 μL，注入HPLC-DAD，記錄色譜圖及光譜圖。

若供試品色譜圖中有與諾氟沙星對照品色譜圖保留時間一致的色譜峰，且該色譜峰的紫外光譜圖與諾氟沙星對照品的紫外光譜圖一致，則初步確證供試品中含有諾氟沙星。HPLC-DAD 圖譜見圖2 ～5。