3種雞免疫抑制性疫病對禽流感疫苗免疫效果的影響

陳玉華，母安雄，王曉陽

（1.浙江省杭州市畜牧獸醫局，浙江杭州 310020；2.富陽市畜牧獸醫局，浙江富陽 311400）

3種雞免疫抑制性疫病對禽流感疫苗免疫效果的影響

陳玉華1，母安雄1，王曉陽2

（1.浙江省杭州市畜牧獸醫局，浙江杭州 310020；2.富陽市畜牧獸醫局，浙江富陽 311400）

以H5N1亞型高致病性禽流感滅活疫苗，對16個規模肉雞養殖場、11個種禽場、6個放養雞場，按7日齡首免0.3 mL，40日齡二免0.5 mL進行注射免疫，同時開展禽網狀內皮增生癥病毒（REV）、白血病病毒（ALV）J亞型和傳染性貧血病毒（CAV）3種免疫抑制病血清學調查。結果發現肉雞場禽流感平均抗體滴度為5.90 log2，REV、ALV?J、CAV血清學陽性率分別為69.8%，20.1%和83.6%；種禽場禽流感平均抗體滴度為6.05 log2，REV、ALV?J、CAV血清學陽性率分別為54.3%，5.7%和82.8%；放養雞場禽流感平均抗體滴度為6.86 log2，REV、ALV?J、CAV血清學陽性率分別為35.7%，3.6%和83.9%，表明3種免疫抑制病對禽流感抗體水平有協同抑制作用。

免疫抑制；血清學；禽流感；免疫

防控高致病性禽流感的一個重要環節是進行疫苗免疫接種，而禽流感疫苗的質量、免疫程序、免疫操作、禽群機體健康狀況等都對禽流感免疫效果有很大的影響。隨著專業化、集約化養殖的不斷發展，禽群中疫病變得越來越不典型，很多的研究表明［1-2］，禽群中往往因隱性感染或者是非典型性疫病的存在而導致免疫后抗體應答低于正常水平，使禽流感免疫接種不能達到預期的免疫效果。禽網狀內皮增生癥病毒（REV）、白血病病毒（ALV）和傳染性貧血病毒（CAV）是雞群中3種常見的免疫抑制性病毒，它們除可能造成各自的特殊病變（如腫瘤、貧血）外，常以亞臨床感染的形式存在于雞群，并造成不同程度的免疫抑制［3-4］，導致生長發育遲緩、繼發細菌感染或嚴重干擾對雞新城疫、禽流感等疫苗的免疫效果［5-6］，而且REV、ALV和CAV還常常通過種蛋導致垂直傳播。因此，了解雞群中3種免疫抑制病的血清學陽性率，明確其對禽流感疫苗免疫效果的影響，具有重要的理論和臨床指導意義。為此，本研究選擇不同類型的養雞場，使用相同的免疫程序、相同的禽流感疫苗對雞群進行禽流感免疫后抗體監測，同時開展3種免疫抑制病的血清學調查，擬在摸清3種免疫抑制病在杭州重點養雞地區的感染狀況（抗體陽性率），評估3種免疫抑制病對雞群禽流感免疫效果的影響。

1 材料與方法

1.1 疫苗

根據前期筆者試驗結果，表明雞群使用不同廠家疫苗進行禽流感免疫之后，都能快速提高H5抗體水平，且高抗體水平持續較長的時間，組間無明顯差異。但南京梅里亞動物保健有限公司的疫苗產生抗體較快，平均禽流感抗體滴度的離散度較小。因此本實驗統一使用南京梅里亞動物保健有限公司的重組禽流感單價滅活疫苗（H5N1亞型，Re?1株），批號為09010986。

1.2 試劑

禽流感病毒H5亞型的標準抗原、陰性和陽性血清均購自中國農科院哈爾濱獸醫研究所，抗原批號為200803，血凝（HA）試驗效價為9 log2，0.1 mol·L-1pH值7.2磷酸鹽緩沖溶液（PBS）和1%雞紅細胞懸液為自制。

雞傳染性貧血、J亞群禽白血病及網狀內皮組織增生病抗體監測試劑盒均購自美國愛德士（IDEXX）公司，生產批號分別為08702?KE137、09268?DE163、09267?KE183，盒內包括已包被好抗原的96孔酶聯反應板，標準陰性、陽性對照血清，酶標二抗，樣品稀釋液，TMB底物溶液，終止液等。

1.3 試驗分組和樣品采集

1.3.1 分組

在杭州市7個區、縣（市）選擇16個規模肉雞場、11個種禽場、6個放養雞場各選一批雞按相同的免疫程序、相同的免疫劑量進行禽流感疫苗免疫。即均采用南京梅里亞公司生產的重組禽流感疫苗，在雞群14日齡時頸部注射0.3 mL進行首免，40日齡時頸部注射0.5 mL進行二免。

1.3.2 樣品采集

血清樣品的采集方法及處理。對上述各試驗組雞群二免后35 d，每個場分別隨機抽取10～15份血樣，分離血清，編號，置-20℃冰箱保存，統一進行H5亞型禽流感HI抗體和雞傳染性貧血、J亞群禽白血病、網狀內皮組織增生癥病毒ELISA抗體檢測。

1.4 實驗室操作

1.4.1 PBS溶液的配置

稱取0.316 g磷酸二氫鈉、1.096 g磷酸氫二鈉和8.5 g的氯化鈉，加入1 000 mL的純凈水，用氫氧化鈉溶液調整pH值至7.2，120℃高壓滅菌30 min后，4℃保存備用。

1.4.2 雞紅細胞懸液的配置

翅靜脈采集經實驗室檢驗無禽流感H5亞型抗體的3只公雞血樣，加入抗凝管中，輕輕搖勻，分別倒入15mL的螺紋管中，加入PBS溶液，2 000 r· min-1離心5 min，棄去上清液，重復離心洗滌4次，配置成1%的紅細胞懸液（即1體積紅細胞加入99體積的PBS溶液），4℃保存備用。

1.4.3 禽流感HI抗體效價測定

按照《高致病性禽流感診斷技術》（GB／T 18936—2003）的血凝抑制試驗（HI）檢測評定禽只HI抗體水平操作方法進行。用96孔微量反應板進行微量血凝抑制（Hemagglutination Inhibition，HI）試驗，試驗用抗原為4 HAU稀釋的診斷抗原，以完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀釋倍數作為HI滴度，并按常規方法設置陰性和陽性對照。

1.4.4 檢測

雞傳染性貧血、J亞群禽白血病及網狀內皮組織增生病抗體檢測雞傳染性貧血、J亞群禽白血病及網狀內皮組織增生病抗體檢測嚴格按試劑盒內操作說明書進行檢測。

2 結果

2.1 J亞群禽白血病（ALV）檢測

從表1-4可以看出，在所檢33個養殖場中有12個養殖場檢出J亞型白血病抗體陽性，且只有2個場抗體陽性率在50%以上。所檢320份血清中，有40份血清學抗體檢測陽性，陽性率為12.5%，其中規模肉雞場、種雞場、放養雞場抗體陽性率分別為20.1%，5.7%和3.6%。

表1 肉雞場ALV?J、CAV和REV感染狀態的血清學調查及禽流感抗體檢測結果

2.2 網狀內皮組織增生病（REV）檢測

從表1-4可以看出，在所檢33個養殖場中僅有3個養殖場未檢出網狀內皮增生病抗體陽性，且有11個養殖場為100%陽性。所檢320份血清中，有188份血清學抗體檢測陽性，陽性率為58.8%，其中規模肉雞場、種雞場、放養雞場抗體陽性率分別為69.8%，54.3%和35.7%。從圖1可以看出，在不考慮CAV、ALV?J亞型感染的情況下，禽流感抗體水平隨著REV抗體陽性率增高而降低。

表2 種禽場ALV?J、CAV和REV感染狀態的血清學調查及禽流感抗體檢測結果

表3 放養雞場ALV?J、CAV和REV感染狀態的血清學調查及禽流感抗體檢測結果

表4 肉雞場、種雞常、放養雞場ALV?J、CAV和REV感染狀態的血清學調查及禽流感抗體檢測結果

圖1 REV抗體陽性率與禽流感免疫水平曲線

2.3 雞傳染性貧血（CAV）檢測

從表1-4可以看出，在所檢33個養殖場中僅2個養殖場未檢出雞傳染性貧血陽性，且有11個養殖場為100%陽性，其余養殖場抗體陽性率基本在60%以上。所檢320份血清中，有267份血清學抗體檢測陽性，陽性率為83.4%，其中規模肉雞場、種雞場、放養雞場抗體陽性率分別為83.7%，82.9%和83.9%。

2.4 3種免疫抑制病與禽流感免疫抗體水平的相關性

從表4可以看出，CAV抗體陽性率在肉雞場、放養雞場、種雞場的感染率都在80%左右，組間差異不顯著。ALV?J、REV抗體陽性率在肉雞場、放養雞場和種雞場差異非常大，暫時不考慮CAV抗體陽性率對禽流感免疫效果的影響，ALV?J、REV抗體陽性率最高的肉雞場禽流感平均免疫抗體滴度最低為5.9 log2，其次為放養雞場6.86 log2和種雞場6.08 log2。

2.5 3種免疫抑制病混合感染率

從表5可以看出，所檢33個養殖場中有12個場存在3種免疫抑制病共同感染，3種免疫抑制病的混合感染率為36.4%。其中ALV＋REV和ALV＋CAV 2種抑制病混合感染率相當高，分別為12個場（36.4%）和10個場（30.3%），33個養殖場中28個養殖場存在這2種免疫抑制病的混合感染，混合感染率達87.9%。

表5 免疫抑制病混合感染情況及禽流感平均抗體滴度

2.6 禽流感抗體檢測情況

從表1-3可以看出禽流感免疫抗體滴度平均水平分別為肉雞場5.90 log2，放養雞場6.08 log2、種雞場6.86 log2。感染單種免疫抑制病的禽流感抗體水平為9.67 log2和7.87 log2，混合感染二種免疫抑制病的禽流感抗體水平為4.2 log2和5.95 log2，混合3種免疫抑制病的雞場禽流感抗體水平為4.2 log2。從圖2可以看出，肉雞場16其REV、ALV?J、CAV3種免疫抑制病的抗體陽性率最高，分別為100%，90%和80%，其禽流感抗體水平是所有場點中最低的，僅為2.1 log2，其他養殖場隨著3種免疫抑制病抗體陽性率的降低，禽流感抗體水平略有升高。對數據進行了禽流感（HIV）抗體效價與雞群和ALV、REV、CAV抗體陽性率等因素進行了相關分析，結果表明，HIV與ALV抗體陽性率（r＝-0.799，P＜0.01），REV抗體陽性率（r＝-0.599，P＜0.01）呈極顯著相關，而與雞場的種類（P＞0.05）和CAV抗體陽性率（P＞0.05）無顯著相關。

圖2 ALV?J＋REV＋CAV混合感染情況下禽流感抗體水平

2.7 單獨感染一種免疫抑制病雞場的禽流感抗體水平

從表6可以看出，只感染REV一種免疫抑制病的2個場，REV抗體陽性率為22.2%時，禽流感平均抗體滴度為9.4 log2，REV抗體陽性率為25.0%室，禽流感平均抗體滴度為9.37 log2。

表6 單獨感染REV場的禽流感平均抗體滴度

從表7可以看出，只感染CAV 1種免疫抑制病的3個場，CAV抗體陽性率都為100%，禽流感平均抗體滴度分別為8.00 log2、7.70 log2和6.56 log2。

表7 單獨感染CAV場的禽流感平均抗體滴度

3 分析和討論

雞群中存在多種病毒性免疫抑制性疾病已被大家所公認，但是對這些病毒感染在雞群中的危害性缺乏系統的流行病學研究，特別是免疫抑制病對雞群的禽流感、新城疫等疫苗的免疫到底存在怎樣的免疫抑制缺乏相關文獻資料。本研究旨在用血清學方法調查不同雞群中ALV、REV、CAV的感染現狀，并通過測定禽流感HI抗體水平來闡明其不同感染率對禽流感免疫效果的影響。

本試驗檢測結果表明，在生產飼養中免疫抑制病在雞群中的感染率非常普遍，3種常見雞免疫抑制病感染率從高到低分別為CAV（84.3%）、REV（58.6%）、ALV（12.5%），且多為雙重或多重感染，3種免疫抑制病的混合感染率達36.4%。

從檢測情況看，除CAV在種禽場、放養雞場和肉雞場的感染情況無明顯差異外，REV和ALV的抗體陽性率是肉雞場＞種禽場＞放養雞場，經P檢驗，P＜0.05相互間差異顯著。這可能與雞群的養殖環境、放養場飼養密度較低，種禽場飼養條件好于肉雞場，以及種群來源的差異有關。同時不同于其他文獻資料顯示REV感染率在種禽場最高，可能是試驗中所采集血樣在不同雞場間日齡相當，而REV感染率一般隨著雞群的日齡不斷增加而不斷升高，所以本次調查種禽場REV感染率低于肉雞場。

從前面檢測結果可以看出，禽流感H5HI抗體滴度雖沒有與REV抗體陽性率成完全反比關系，但禽流感H5HI抗體滴度基本隨著REV抗體陽性率的增高而降低，說明REV病毒對禽流感疫苗免疫效果存在明顯的免疫抑制作用，且在感染兩種或兩種以上免疫抑制病情況下，其禽流感免疫抗體水平與免疫抑制病抗體陽性率呈反比關系。通過對ALV、REV、CAV抗體陽性率等因素進行的相關分析，也充分說明HIV與ALV抗體陽性率、REV抗體陽性率呈極顯著相關。

雖然在考慮協同作用時的方差分析結果表示，各個試驗因素的協同作用對HIV的影響均不顯著（P＞0.05），這可能由于受采樣數量的影響。但感染ALV?J＋CAV＋REV的雞場其抗體陽性率相對最高的場點，其禽流感抗體水平僅為2.10 log2，表示3種免疫抑制病的抗體陽性率越高，其禽流感免疫抗體水平越低，初步表明這3種病毒感染雞時能夠起協同作用加重雞體的免疫抑制。李延鵬等［7］通過CAV與REV共感染SPF雞對疫苗免疫反應的抑制作用試驗證實，CAV單獨感染的抑制作用沒有REV顯著，但在共感染的情況下CAV能夠加重REV對SPF雞的免疫抑制。王建新等［4］也證實J亞群禽白血病病毒（ALV?J）與REV共感染1日齡肉雞時能夠加重對肉雞的免疫抑制。基于目前CAV、REV和ALV共同感染的普遍性［8-10］，3種免疫抑制病的共同感染或這3種免疫抑制病與其他病毒的多重感染對雞疫苗免疫反應的影響尤為值得關注。當然因試驗過程中未考慮種群差異、其他免疫性抑制疾病、藥物使用等因素，對數據的積累也有待進一步擴大，免疫抑制病對禽流感免疫效果的影響還需深入研究和探討。

免疫抑制病的存在，極大地增加了禽病的發生率和治療難度，特別是其對疫苗免疫的抑制作用，給養禽業的主要疾病如ND、禽流感的免疫效果帶來了極大影響，給疾病的防治增加了很大困難，給養殖業帶來了巨大的經濟損失。防治免疫抑制病，提高禽流感綜合免疫效果，還需從科學免疫、加強綜合管理措施等方面入手。

首先應加大對免疫抑制病的防治工作，對有疫苗免疫的免疫抑制病盡可能進行疫苗免疫，對尚無有效疫苗免疫的免疫抑制病，可適當給予藥物預防，同時養殖場戶要加強其血清檢測，盡早淘汰陽性雞。另外養殖場要從綜合管理入手，做好其他疾病的免疫、日常消毒，減少應激，增加雞群營養水平，提高雞群的綜合保護力。

［1］ 李延鵬，崔治中，姜世金，等.CAV與REV共感染SPF雞對疫苗免疫反應的抑制作用中國獸醫學報［J］，2008，28（11）：1243-1246.

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（責任編輯：張 存）

S 831 < class="emphasis_bold">文獻標志碼：A

A

0528?9017（2014）01?0121?05

文獻著錄格式：陳玉華，母安雄，王曉陽.3種雞免疫抑制性疫病對禽流感疫苗免疫效果的影響［J］.浙江農業科學，2014（1）：121-125.

2013?11?12

陳玉華（1979-），女，浙江長興人，獸醫師。從事動物疫病實驗工作。E?mail：cyhzju＠163.com。