蒽酮-硫酸法測定蒙藥蕁麻多糖的含量

蔡 芳 趙 陽 董珉翔 白音夫*

(1.內蒙古自治區中醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010020;

2.內蒙古醫科大學2010級研究生，內蒙古 呼和浩特 010110)

蕁麻為被子植物門蕁麻科(Urticaceae)蕁麻屬(Urtica Linn.)1年生或多年生草本植物。莖高60～200cm，葉對生，雌雄同株或異株。蒙名哈拉海(意為“有刺”)，是蒙古族習用的藥食同源植物，味辛、苦、濕、澀，營養豐富［1］。莖葉上的蜇毛有毒性(過敏反應)，它的毒性使皮膚接觸后立刻引起刺激性皮炎，如瘙癢、嚴重燒傷、紅腫等。枯死經霜或經人工處理后為優質飼料。其含有黃酮類、有機酸類、蛋白質、揮發油、萜類、木脂素、多糖等化學成分［2］。目前該藥材暫無質量標準。本文對蕁麻有效成分多糖進行含量測定，該法可為蕁麻藥材提供質量標準測定方法。

1 試驗材料

葡萄糖、蒽酮、硫酸均為AR(市售)。210型可見紫外分光光度計(日本島津)。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的配制、顯色劑的配制及蒽酮-硫酸法最大吸收波長的選擇:取葡萄糖約6mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用水溶解稀釋至刻度，即為葡萄糖對照品溶液(60μg·mL-1)。蒽酮溶于硫酸中，配制成0.5%濃度。棕色瓶保存。精密吸取0.6mL對照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，加入0.5%的蒽酮硫酸溶液4mL，混勻，同法制的陰性溶液，振搖10min，置沸水浴中15min，然后置冷水中冷卻30min，同法制得陰性對照溶液，在可見紫外分光光度計200～800nm范圍內測定吸收度，結果最大吸收波長λmax=615nm。

2.2 線性化范圍試驗:精密吸取 0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL葡萄糖對照品溶液，加蒸餾水至 2.0mL，加入 0.5%的蒽酮溶液4mL，混勻，振搖10min，置沸水浴中15min，然后置冷水中冷卻30min，在可見紫外分光光度計615nm，處測定吸收度。經回歸處理回歸方程如下A=-0.1120+0.0005x ，r=0.999。在 12.0 ～72.0μg·mL-1范圍內葡萄糖量與吸收度成一條不通過原點的直線，供試品溶液測定可采用外標兩點法定量。

2.3 供試品溶液的制備:取蕁麻粉末(80目，105℃干燥3h，)約2g，精密稱定，加水 100 mL，回流提取 3 次，每次30min。合并提取液，濃縮至50mL，加95%乙醇至含量85%，攪拌30min，放置24h，過濾，殘渣用85%的乙醇洗滌，然后用丙酮洗滌，自然干燥后用水溶解轉移至100mL量瓶內，用水稀釋至刻度，即得供試品溶液。精密吸取0.25mL供試品溶液，加水至2 mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，測定吸收度。

2.4 精密度試驗:精密吸取0.6mL葡萄糖對照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測定吸收度5 次，吸收度分別為 0.272，0.274，0.277，0.275，0.277，RSD=0.77%。

2.6 重復性試驗:取自然干燥的同批蕁麻6份，每份2.5g，按2.3項下操作、測定。測定多糖平均結果6.6g%，RSD=2.9%.

2.7 穩定性試驗:精密吸取0.6mL葡萄糖對照品溶液，加蒸餾水至2.0mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測定吸收度，每隔20min測定1次。結果，RSD=1.53%，在2h內穩定。

2.8 加樣回收率的測定:取蕁麻粉末(80目，105℃干燥2h，)約1.0g，6份，精密稱定，其中一份不加葡萄糖對照品，作為隨行對照，其余5份分別加入精密稱定的葡萄糖對照品50mg，余下操作按“2.3供試品溶液制備”方法處理，得到5份加樣回收率供試品溶液。精密吸取0.25mL各加樣回收率供試品溶液，按上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測定吸收度。平均回收率=109.22，RSD=3.54%.

2.9 供試品溶液的制備及含量測定:取不同產地蕁麻粉末(80 目，105℃干燥 3h，)約 2.5g，精密稱定，加水100 mL，回流提取3次，每次30min。合并提取液，濃縮至50mL，加95%乙醇至含量85%，攪拌30min，放置24h，過濾，殘渣用85%的乙醇洗滌，然后用丙酮洗滌，自然干燥后用水溶解轉移至100mL量瓶內，用水稀釋至刻度，即得供試品溶液。精密吸取0.25mL供試品溶液，加水至2 mL，照上述蒽酮-硫酸法顯色，按上法測定吸收度，根據外標法計算不同產地蕁麻中多糖含量，內蒙古大青山、蠻汗山、南天門、四子王旗多糖含量分別為6.21%、6.76%、4.34%、6.22%%，平均含量為5.9%。

3 討論

硫酸-蒽酮法是測定多糖含量的較為常用的方法，其原理為多糖類在濃硫酸作用下先水解為單糖分子，并迅速脫水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物再與蒽酮結合成有色化合物以比色法在適當波長測定多糖含量。本文采用加水回流提取多糖，提取液加乙醇至85%沉淀，沉淀物用85%乙醇、丙酮洗滌，自然干燥，樣品為白色粉末，用蒽酮-硫酸顯色法測定多糖含量。測定結果，不同產地蕁麻多糖平均含量為5.9%。

［1］內蒙古衛生廳.內蒙古中草藥［M］.內蒙古人民出版社，1972;470-472

［2］李寧，張慶林.蕁麻屬植物的化學成分和藥理作用研究進展［J］.中國新藥雜志，2007，16(21):1746-1750