鹽酸克倫特羅ELISA法檢測質量控制策略

張 健張 孟趙京紅*

（1 長春市食品化妝品監督所，吉林 長春 130033；2 長春市食品藥品檢驗所，吉林 長春 130012；3 吉林省腫瘤醫院，吉林 長春130012）

鹽酸克倫特羅ELISA法檢測質量控制策略

張 健1張 孟2趙京紅3*

（1 長春市食品化妝品監督所，吉林 長春 130033；2 長春市食品藥品檢驗所，吉林 長春 130012；3 吉林省腫瘤醫院，吉林 長春130012）

目的探討ELISA法檢測鹽酸克倫特羅的質量控制策略。方法通過檢測分析大量樣品檢驗過程及結果，總結鹽酸克倫特羅ELISA法檢測質量控制策略。結果敘述了鹽酸克倫特羅ELISA法檢測整個過程中需要提高、改善的問題，說明了ELISA法檢測質控中需要解決的現實問題及注意事項。結論有效的控制策略及改進措施能提高鹽酸克倫特羅檢測質量，預防漏檢及誤檢等問題的發生，為人民的食品安全做出貢獻。

鹽酸克倫特羅；酶聯免疫吸附試驗；質量控制；策略

鹽酸克倫特羅，俗稱“瘦肉精”，除作為擬腎上腺素類藥物治療疾病以外，其最重要的作用是加快肌肉生長速度，使動物瘦肉含量相對增加，常被應用于養殖業，將其加入飼料后促進畜禽生長發育。然而，鹽酸克倫特羅代謝慢，使用后易殘留在畜禽體內，若人食用此類畜禽，會導致積蓄中毒，嚴重可危機生命。所以，為有效維護人民的健康安全，對該藥高效的檢測方法必不可少。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）具有檢驗速度快、成本低、設備簡單等優點，已廣泛應用于鹽酸克倫特羅的檢測，但若此法操作過程中出現不當，導致結果不準、重復性降低，將嚴重破壞檢驗的準確性[1]。因此，為提高檢測質量，嚴格的控制策略不容忽視。本文就ELISA法檢測鹽酸克倫特羅的質量控制策略總結如下。

1 提高相關人員職業素質[2]

1.1 管理人員。盡管管理人員不直接參與ELISA法檢測試驗，但其所具備的管理能力是提高檢測質量的必要條件。管理人員要根據相關知識建立系統化的質量控制體系，嚴格規定各人員職責以及任務要求，不放過任何薄弱環節，高效管理檢測過程，提高檢測質量。

1.2 樣本采集及檢測人員。檢測需要嚴謹的工作態度，因此所有人員都要接受全面的崗前培訓、效績考核，用以提高相關職業素質，增強對工作的認真程度。一般來講，鹽酸克倫特羅試驗的樣品有血清、肝臟、尿液及畜禽飼料等，這要求樣品采集人員應具備極高的專業素質，對采集目標具有較強的敏感性，能準確選擇樣品，獨立分類采集樣品，操作熟練快速，做到樣品不遺漏、無雜質、樣品間無污染。而樣品檢測人員要熟練掌握ELISA法檢測的過程，嚴格按照規程操作，并且能夠用專業知識解釋檢測結果以及解決在實驗中出現的各類問題，提高檢測準確度。

2 完善樣品采集及制備過程[3，4]

2.1 樣品采集過程。樣品采集室由于畜禽的污染環境質量會相對惡劣，因此要嚴格控制操作過程，避免樣品遭到污染，影響監測結果。同時，要注意天氣影響，氣溫過高時，樣品采集后要立即放于低溫箱中，保存一般不要超過1周，若超過1周要采取冷凍處理，在使用時在溶解，用以避免變質導致結果出現假陽性，干擾監測質量。

2.2 樣品制備過程。尿液在除雜后、離心后可直接用于試驗，而體內組織以及飼料等樣品要粉碎后，做好全面的預處理，對粉碎程度及溶液含量要嚴格控制，同時要徹底離心，防止樣品中有血凝塊、纖維蛋白、血細胞懸浮，影響實驗結果。

3 管理ELISA法檢測室條件以及操作設備

3.1 實驗室條件控制。檢測室良好的操作條件是一切質量控制的前提，只有好的實驗條件才能保證各項檢測順利進行。首先，室內溫度、濕度都能影響檢測結果，一般溫度要控制20～23 ℃，濕度為70%左右，并保證其變化平衡；其次，定期對實驗室內進行消毒，使空氣中各元素含量達標，并要注意Cl-含量，其過高會造成ELISA結果出現假陽性，所以不要使用含Cl-的消毒劑；再次，實驗室操作臺要避免陽光直射，揮發及過高的溫度會對結果造成一定影響，同時陽光可影響抗原、抗體活性，降低檢測準確率；最后，實驗室的水質也要實時監測，去離子水現用現配，確保不含Cl-及其他無關雜質。

3.2 儀器設備管理。一定要確保儀器設備功能良好。ELISA法檢測的儀器主要包括移液器、酶標儀、水浴箱、洗板機等，移液器要定期到相關部門檢定，在實驗室內也要常用蒸餾水稱量法校準，出現異常要及時更換或修理；酶標儀要注重光學維護，防止濾光片發霉；嚴格控制水浴箱溫度，定期進行溫度校準，指示溫度有誤差時，可加用溫度計；洗板機使用時要進行調試，根據不同要求規定相關參數，并保證管道內無氣泡。

4 選擇合適的ELISA試劑盒

試劑盒的選擇關系到試驗的準確性、靈敏度，所以一定要選擇優質的ELISA試劑盒。可多次操作后選擇穩定性最好的試劑盒進行檢測試驗，并注意觀察試劑盒是否完整，生產批號以及使用期限，注意不要將不同批號產品混用。同時也要保證試劑使用時再取出、取出后立即使用、使用后馬上收好，用以減少試劑中酶絡合物的失活。一些試劑盒可能出現分裝錯誤，在檢測前一定要做好陽性、陰性對照試驗，如若出現異常，要立即重檢。

5 控制ELISA試驗操作過程[5]

ELISA試驗操作過程是整個檢測質量控制的關鍵，是提高試驗質量的核心。該試驗過程一般包括加樣、溫育、洗滌、顯色、結果判定等過程，每一步操作都要注意。

5.1 加樣：用加樣器加樣要將樣品加入ELISA板孔下部，并緩慢吸出，緩慢加入，角度垂直，速度均勻，用以預防氣泡及飛濺，也不要使加樣器接觸板孔壁。同時，要注意吸頭的及時更換，每次加標品都要用新吸頭，使用過的吸頭也要放入指定位置丟棄，不要重復使用，污染樣品。

5.2 溫育：溫度對抗原抗體結合速度影響很大，所以一般用水浴箱使受熱均勻，同時，使用水浴箱也可避免受熱不均導致的邊緣效應。將ELISA板底貼于水面，時間要以水浴溫度上升到指定溫度開始計算。在板孔上方覆蓋貼封紙，防止孔內成分揮發及雜質進入。

5.3 洗滌：分離酶標物及抗原抗體復合物需要洗滌，若洗滌不徹底將導致顯色不明顯，干擾檢測結果，所以要嚴格控制洗滌過程，用以提高檢測質量。首先，要保證不同洗滌劑分開使用，避免混合亂用；其次，洗滌劑用量要適宜，不要不夠，也不要過多，用量少會造成洗滌不完全，用量大會使液體飛濺，導致板間相互干擾；再次，洗板機洗滌要保證吸干孔內液體，若有殘留要人工再清洗；最后，每次洗滌結束后，要用高效的吸水紙將殘留液吸干。

5.4 顯色：在室溫下，試劑盒的顯色時間一般在15～30 min，為使催化反應徹底，要將溫度控制在20～25 ℃、反應20 min以上，同時，要從第1個加顯色液的孔開始計算反應時間。值得注意的是，在顯色前可事先檢測樣品溶液的有效性，若異常，表示樣品變質，無法檢測，要重新實驗。顯色液滴加完后，加終止液使反應結束，其滴加速度要同于顯色液滴加速度。

5.5 結果判定：終止反應后要放置一定時間再判定，穩定檢測結果。同時，必須要將板用吸水紙吸干后再讀數，用以保護光片，提高讀數準確性。在使用酶標儀時要注意濾光片位置及波長的調節，用雙波長測定，并排除容器損害干擾。然后，根據試劑盒上的陽性判定標準對結果進行辨別。

6 加強檢測后的質量控制

檢測結果要與標準進行嚴格比對，技術人員要根據相關經驗排除假陽性的結果，提高最終檢測結論的準確性，并保證實驗結果的重復性及重現性。

7 結 語

ELISA檢測因其敏感性高、檢測成本低、抗原制備容易及結果判定客觀被廣泛應用于生命科學各領域。鹽酸克倫特羅的ELISA檢測[6]是將含有針對于鹽酸克倫特羅抗體的雙抗體種植在微孔板上，通過溫育、洗滌抗體，加入酶標抗原及樣品抗原，使抗原與抗體發生特異性結合，進而判斷有無受檢樣品存在的免疫檢測方法。其結果判定方法為：與酶標抗原結合的抗原抗體復合物處理后顯色，而與鹽酸克倫特羅結合成的抗原抗體復合物處理后不顯色，且顯色深淺與鹽酸克倫特羅含量負相關，再將顏色與標準孔顏色比較用于定性，分光光度計測量吸光度用于定量。然而，在實際操作中，ELISA法檢測若操作不當，易出現各種干擾現象，嚴重影響檢測質量，造成結果錯誤判定，因此，為提高檢測質量，有效的鹽酸克倫特羅ELISA法檢測質量控制策略必不可失。本文介紹的質量控制策略是結合操作及文獻總結出的實際經驗，這表明，ELISA法檢測過程中要注重全局，不放過任何細節，既要求人員工作認真、專業，也要保證各類條件、設備符合標準，以加強鹽酸克倫特羅的實驗室檢驗水平，為社會食品安全做出貢獻。

[1] 吳正銅.酶聯免疫吸附試驗在實驗室應用中的質量控制[J].檢驗醫學與臨床2013,10(9):1147.

[2] 范海麗.酶聯免疫吸附試驗檢測過程中的質量控制[J].解放軍醫藥雜志2011,23(5):51.

[3] 余紅梅,石慧花.“瘦肉精”ELISA檢測過程中常見問題的分析[J].上海畜牧獸醫通訊,2012,3(3):84.

[4]謝淵.酶聯免疫診斷試劑的質量控制[J].中國保健營養,2012,22(6):1562.

[5] 周艷萍.酶聯免疫吸附試驗檢測法的質量控制[J].檢驗醫學與臨床 2009,6(14):1206.

[6] 李華瑋,李巧枝,衛麗,等.ELISA 檢測鹽酸克倫特羅殘留時的問題及控制對策[J].檢驗醫學與臨床,2009,7(6):144.

R9

A

1671-8194（2014）34-0379-02

*通訊作者