X染色質(zhì)標本制作方法的改進

廣西中醫(yī)藥大學生物教研室， 廣西 南寧 530001

X染色質(zhì)標本制作方法的改進

李景云劉紹良

廣西中醫(yī)藥大學生物教研室， 廣西 南寧 530001

為提高制作X染色質(zhì)標本的質(zhì)量，對原有的方法進行了改進。新方法將口腔黏膜細胞直接涮入固定液中，以滴片法制片，自來水流水沖洗玻片，用甲苯胺藍染色，取得了良好的實驗效果。

X染色質(zhì)，制作方法，改進

X染色質(zhì)是女性間期細胞核膜內(nèi)側(cè)邊緣輪廓清楚的濃染小體，大小約為1μm，一般呈平凸、圓形、扁平或三角形[1]。制作X染色質(zhì)標本相對于染色體的制備來說更簡單易行，在鑒定性別及染色體數(shù)目異常疾病的診斷中發(fā)揮著重要作用。根據(jù)標本制作的效果，針對傳統(tǒng)制片方法中存在的一些問題，對實驗方法進行了一些改進，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 固定的新方法

讓受檢者漱口后刮取口腔黏膜細胞數(shù)次，將刮取物直接涮入裝有固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)的離心管內(nèi)，固定15min。原方法將刮取物先涮入生理鹽水中，離心去上清液后再添加固定液固定，導致細胞丟失較多，離心次數(shù)多較費時。改進后的方法可以減少離心次數(shù)，減少細胞丟失，結(jié)果更準確。

2 制片的新方法

用滴片的方法取代原來的涂片法。直接涂片法[2]可以保留較多細胞，但存在涂抹不均勻，細胞重疊聚集或過度分散，并且涂抹物中雜質(zhì)多，影響X染色質(zhì)的準確鑒別。離心后的細胞懸液滴片，雜質(zhì)少，滴片時易于控制細胞密度，實驗效果好。

3 沖洗的新方法

玻片置于自來水下流水沖洗，將玻片上的鹽酸徹底沖洗干凈，以免影響染色；染色后的玻片也置于自來水流水沖掉片上多余的染液。原來的方法是置于蒸餾水中涮洗，如果制作大量的標本，多次反復使用同一染缸中的蒸餾水，易造成涮洗不干凈，標本間相互干擾大。改用自來水流水沖洗，各標本獨立清洗，避免彼此影響。自來水價格較蒸餾水低，也可節(jié)約成本。

4 染色的新方法

以甲苯胺藍代替硫堇染色。以0.2%甲苯胺藍作為染液，染色10min，染色效果好。甲苯胺藍染液配制方法簡單，硫堇染液配制步驟繁瑣；甲苯胺藍染色效果易于控制，硫堇染液易殘留在玻片上，不易沖洗干凈，造成背景較臟[3]。

用改進后的方法制備X染色質(zhì)，細胞分布均勻，背景中的雜質(zhì)少，細胞核著色清晰，X染色質(zhì)陽性率高，實驗效果好，為X染色質(zhì)的進一步研究提供了基礎(chǔ)。

[1]王修海等. 醫(yī)學遺傳學實驗指導[M].科學出版社，2001:32.

[2]李石旺，盧新華，許名宗. 人類X染色質(zhì)標本制備實驗方法的改進[J].解剖學雜志，2005,28(2)：240-241.

[3]紀靜.兩種染色方法對X染色質(zhì)顯示效果的比較[J].青島大學醫(yī)學院學報，2003,39(3):354-355.

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