基因芯片技術分析舒郁膠囊對抑郁癥肝氣郁結證大鼠模型的干預作用

徐凱勇，李自發，高 杰

（山東中醫藥大學1.實驗動物中心、2.基礎醫學院，山東濟南 250355）

中醫認為，抑郁癥基本機制是肝失疏泄，基礎證候是肝氣郁結，基本治療原則是調肝［1］。中藥舒郁膠囊主疏肝解郁、調暢情志，臨床證實療效確切。該復方主成分為柴胡皂苷可調理氣機、疏肝解郁。本研究通過慢性溫和應激（CMS）刺激方法［2］，復制抑郁癥肝氣郁結證大鼠模型，通過基因芯片技術探討舒郁膠囊及其主成分柴胡皂苷的干預作用，篩選藥物作用基因靶點。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 Wistar大鼠60只，體質量120～150 g，♂，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，生產許可證號：SCXK（京）2002－0003。

1.2 藥物 舒郁膠囊（批號：2011L06107）和柴胡皂苷（批號：20110526）由青島陽光海川醫藥科技發展有限公司提供；陽性藥：氟西汀膠囊（批號：H20050463）由禮來蘇州制藥有限公司提供。

1.3 抑郁癥肝氣郁結證大鼠模型復制及給藥 大鼠通過1周適應性喂養后，依據糖水偏好實驗與曠場實驗基線期數據分為5組，每組12只。即正常對照組（生理鹽水，1 ml／200 g）、抑郁癥肝氣郁結證模型組（生理鹽水，1 ml／200 g）、舒郁膠囊組（4.08 mg·kg－1）、柴胡皂苷組（0.72 mg·kg－1）、陽性藥對照組（氟西汀膠囊，2.67 mg·kg－1）；給藥與人當量［3］，每天灌胃1次，連續4周。除正常對照組，其他組均給予CMS刺激4周。

1.4 基因芯片制備 取大鼠腦區海馬組織后；由上海康成生物工程有限公司制備基因芯片：Agilent Rat 4×44K Gene Expression Microarrays。

1.5 數據處理 通過Graphpad Prism 5.0軟件對糖水偏好實驗和曠場實驗數據進行雙因素方差分析。應用GeneSpring GX v11.5.1軟件分析基因芯片數據獲取Ratio（Cy3／Cy5）比值，Volcano Plot方法篩選差異表達基因（Ratio值＞1.5）；并進行Pathway分析和GO分析。

2 結果

給藥發現，舒郁膠囊組、陽性藥對照組及柴胡皂苷組與模型組相比，曠場實驗得分均明顯升高（P＜0.05）；但給藥組間差異均無顯著性（P＞0.05）。舒郁膠囊組、陽性藥對照組與模型組相比，糖水偏好值均明顯升高（P＜0.05）；但兩給藥組間差異無顯著性（P＞0.05）。

基因芯片結果顯示，模型組與正常對照組相比，其差異表達基因為280個；舒郁膠囊組、陽性藥對照組及柴胡皂苷組與模型組相比，差異表達基因分別為248、2 208和643個。另外，舒郁膠囊、氟西汀膠囊、柴胡皂苷，改變GO分析中分子功能分別為55、190、110個，細胞組成分別為 43、169、122個，生物過程分別為235、928、699個；改變Pathway通路分別為 6、33、18個。

3 討論

本研究行為學測定結果中，3種藥針對抑郁癥肝氣郁結證的療效，氟西汀＞舒郁膠囊＞柴胡皂苷。前期，舒郁膠囊作為臨床療效確切的治療該證的中藥復方，未發現有臨床不良反應，而其主成分柴胡皂苷卻有肝臟毒性［4］。另外，舒郁膠囊在GO分析和Pathway分析中都顯示出最低數量的基因功能改變，氟西汀膠囊對其改變最大，柴胡皂苷次之；說明舒郁膠囊對機體基因功能改變小，以致對機體生理生化及代謝過程影響小，與其未發現有臨床不良反應相互印證。因此，舒郁膠囊較益于治療抑郁癥肝氣郁結證，且其作用機制可能與其精確改變基因表達及功能相關。

參考文獻：

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［3］Xu SY，Bian R L，Chen X.Experiment methodology of pharmacology［M］.Beijing，People′s Medical Publishing House，2002：203.

［4］Huang Y Y，Huang W，Sun R.Research development on pharmacological effects and hepatotoxicity of bupleurum saikosaponin［J］.Chin J Exp Tradit Med Formul，2011，17（17）：298－301.