TBX2基因在結腸癌患者癌組織中的表達及其臨床意義

陳佰清 葉 鋒 朱 杰 宋笑玲 李意平

(杭州市余杭區中醫院肛腸科，浙江 杭州 311106)

結腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，近年來其發病率出現了增高的趨勢〔1〕。T-box2(TBX2)是T-Box基因家族成員之一，其編碼蛋白TBX2是一個指導胚胎、組織器官軸向發育的重要轉錄因子，屬于發育調控相關轉錄因子基因。有研究〔2〕發現TBX2在多種腫瘤組織中表達上調，可視為新的腫瘤標志物，其促進腫瘤發生發展的作用日益受到關注。本研究旨在研究結腸癌患者TBX2蛋白的表達與結腸癌臨床病理特征的關系。

1 材料與方法

1.1標本來源 選取2008～2012年浙江大學醫學院附屬第一醫院病理科的存檔標本100例，其中40例為正常結腸黏膜〔結腸腺瘤旁確診為正常的結腸黏膜組織，平均年齡(54.1±3.7)歲〕，60例為結腸癌〔平均年齡(55.2±4.8)歲〕，全部病例在術前均未接受放療及化療，臨床及病理資料完整。根據國際抗癌聯盟修訂TNM分期法，其中0～Ⅰ期32例、Ⅱ～Ⅳ期28例；有淋巴結轉移21例，無淋巴結轉移39例；組織學分型：24例未侵及漿膜和36例侵及漿膜。

1.2TBX2蛋白在正常結腸黏膜和結腸癌組織的檢測 采用ELISA法檢測，ELISA試劑盒購于南京建成生物有限公司，操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.3TBX2蛋白在正常結腸黏膜和結腸癌組織表達灰度值的檢測 采用免疫組織化學法檢測，鼠抗人TBX2單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒和二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒均購于福州邁新生物技術有限公司。常規石蠟切片，4 μm，60℃烤箱烘片4 h，然后脫蠟至梯度酒精至水洗，采用檸檬酸抗原修復液煮沸1 min進行抗原修復，抗體稀釋液濃度均為1∶100，其余步驟嚴格按照說明書進行，DAB顯色后，用蘇木精復染，封片。采用Motic Images Advanced 3.2圖像分析儀分析，灰度值越大基因表達越低，灰度值越小基因表達越高。

1.4TBX2基因在正常結腸黏膜和結腸癌組織陽性率的檢測 陽性表達位于細胞質，呈棕黃色顆粒樣物質。在200倍鏡下觀察全片，按陽性細胞所占百分比及著色程度進行結果判定。按陽性細胞比例判定：陽性細胞≤10%計1分，10%～50%計2分，>50%計3分。按染色程度判定：陰性為0分，淡黃色為1分，中度黃色2分，棕黃色3分。按陽性細胞得分×染色程度計總分，總分<3為陰性，≥3為陽性。

2 結 果

2.1TBX2蛋白在正常結腸黏膜和結腸癌中含量的比較 與正常結腸黏膜〔(2.30±0.16)pg/ml〕比較，TBX2蛋白在結腸癌中的含量〔(7.83±1.05)pg/ml〕顯著升高(P<0.01)。

2.2TBX2蛋白在正常結腸黏膜和結腸癌中免疫組化灰度值的比較 TBX2的陽性表達定位于細胞質，呈棕黃色；與正常結腸黏膜灰度值(135.29±3.17)比較，TBX2蛋白灰度值在結腸癌中(95.62±2.51)顯著降低(P<0.01)。

2.3TBX2基因在正常結腸黏膜和結腸癌中陽性表達率的比較 TBX2基因在正常結腸黏膜陽性表達率為25.00%(10例)，與結腸癌(85.00%，51例)比較有統計學差異(P<0.01)。

2.4TBX2與臨床病理特征的關系 TBX2的陽性表達率在結腸癌組織隨組織病理分級的升高而升高〔0～Ⅰ期為14例(43.75%)、Ⅱ～Ⅳ期為21例(75.00%)〕(P<0.01)，有淋巴結轉移的〔17例(80.95%)〕高于無淋巴結轉移〔14例(35.89%)〕(P<0.01)，浸及漿膜組〔28例(77.78%)〕高于未浸及漿膜組〔8例(33.33%)〕(P<0.01)。

3 討 論

TBX2在多種腫瘤中高表達，并且與細胞惡性轉化、腫瘤細胞增殖以及細胞凋亡等有關〔3〕，TBX2能直接參與細胞周期進程中DNA的復制及腫瘤化療藥物耐藥性的產生，其編碼蛋白TBX2主要通過其C末端的轉錄抑制結構域發揮轉錄抑制作用〔4〕。英國學者Bilican等〔5〕提出TBX2基因失效可使癌細胞休眠。一般而言，人體能使那些已經發生突變的細胞處于一種休眠狀態，阻止其分裂和生長。但如果這種突變是癌變，人體的這種功能會受到抑制，從而導致癌細胞快速擴散。研究人員在對致命的惡性黑色素瘤的研究〔6〕中發現，在破壞人體抑制細胞分裂功能的過程中，TBX2基因一旦失效，黑色素瘤細胞便失去分裂能力。本實驗結果表明TBX2基因是與腫瘤發生發展相關的基因，這為腫瘤轉移的分子機制提供了新的線索，同時為早期診斷及早期治療腫瘤提供了靶基因。

4 參考文獻

1張偉健,車小群,鐘 倩,等.Survivin與Bax蛋白在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌中的表達及臨床意義〔J〕.中國醫藥指南，2011；9(3)：11-2.

2陳 平,田德安,劉 梅,等.TBX2蛋白在胰腺癌組織和細胞中的表達及其意義〔J〕.臨床內科雜志,2007；24(5):341-3.

3宋一村,王曉菲,包虹旭,等.MDM2基因和TBX2在子宮內膜樣腺癌中的表達及臨床意義〔J〕.現代生物醫學進展,2012；12(31):6127-30.

4Rowley M，Grothey E，Couch FJ.The role of TBX2and Tbx3 in mammary development and tumorigenesis〔J〕.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2004；9(2)：109-18.

5Bilican B，Goding CR.Cell cycle regulation of the T-box transcription factor TBX2〔J〕.Exp Cell Res，2006；312(33)：2358-66.

6Vacce KW,Carreira S,Brosch G，etal.TBX2is overexpressed and plays an important role in maintaining proliferation and suppression of senescence in melanomas〔J〕.Cancer Res,2005；65(16)：2260-8.