蒙醫灸療對PCPA致失眠模型小鼠血清5－羥色胺和多巴胺的影響△

烏云格日樂 阿古拉

(1.北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029);2.內蒙古醫科大學蒙醫藥學院，內蒙古 呼和浩特 010110)

蒙醫灸療對PCPA致失眠模型小鼠血清5－羥色胺和多巴胺的影響△

烏云格日樂1、2阿古拉2

(1.北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029);2.內蒙古醫科大學蒙醫藥學院，內蒙古 呼和浩特 010110)

目的:研究蒙醫灸療對對氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠模型小鼠的神經遞質5－羥色胺(5－HT)及多巴胺(DA)含量的影響，分析蒙醫灸療對失眠癥的作用。方法:將40只清潔級健康昆明小鼠按體重分為對照組、模型組、灸療組和安定組;除對照組外其余3組小鼠腹腔注射PCPA致失眠模型，造模成功后，灸療組小鼠給予施灸因素，安定組給予舒樂安定片混懸液灌胃，模型組給予抓取固定、生理鹽水灌胃，共治療15d;采用酶聯免疫法測定血清5－HT和DA的值。結果:①血清5－HT:模型組與對照組比較明顯降低，有顯著性差異(P＜0.01)，灸療組、安定組與模型組比較有明顯增高(P＜0.01)，灸療組與安定組間比較無顯著性差異(P＞0.05);②血清DA:模型組與對照組對照明顯降低，有顯著性差異(P＜0.01)，灸療組、安定組與模型組比較有明顯增高(P＜0.01)，灸療組與安定組間比較無顯著性差異(P＞0.05);結論:蒙醫灸療“頂會穴”、“赫依穴”可逆轉由PCPA引起的失眠，改善血清5－HT和DA的含量，為蒙醫灸療法治療失眠癥提供實驗依據。

蒙醫灸療;失眠;5－羥色胺;多巴胺

1 實驗材料

1.1 動物:清潔級健康昆明小鼠40只，體重20±2g，雄性，由內蒙古大學動物中心提供，合格證號為SCXK(蒙)2002－0001。

1.2 主要試劑及器材:舒樂安定片(江蘇常州第二制藥廠，批號920828)、戊巴比妥鈉(上海化學試劑有限公司，批號SCRC69020181)、PCPA(美國 sigma公司，批號LOT#SHBC0245V)、5－HT試劑盒(美國 sigma公司，批號E03H0106 BG)、DPA試劑盒(美國 sigma公司，批號E03D0007 BG)、自貼艾灸管(南陽臥龍漢醫艾絨廠，批號YZB/豫0031－2003);電子天平(天津天馬藝有限公司，批號ELECTRONICSCACET5000)、全自動多功能酶標儀(MULTISKAN MK3，Thermo，USA)、電 熱 恒溫 培 養 箱(DH4000A，天津泰斯特)。

2 方法與結果

2.1 動物分組、造模及治療方法:將40只小鼠按體重隨機分為4組，對照組10只，模型組10只，灸療組10只，安定組10只。每組小鼠分放于2個籠中，以大鼠顆粒飼料、自由飲水喂養。除對照組外，其余3組小鼠腹腔注射 PCPA混懸液300 mg/kg，每隔24h1次，共注射2次。對照組小鼠腹腔注射同體積的生理鹽水溶液［4］［5］。2天后，造模小鼠出現毛發變黃，易驚覺，記憶減退，食量減少，體重變輕等改變，表示造模成功。之后開始治療，對照組:不做任何處理;模型組:同灸療組一樣抓取，固定，同安定組一樣體積生理鹽水灌胃;灸療組:取穴參照文獻［1］［6］，制定小鼠“頂會穴”(在頂骨正中處)和“赫依穴”(在第7頸椎與第1胸椎間，背部正中)。每次取1穴，交替使用，灸療1d休2d。用自貼艾灸管在所取的小鼠穴位上直接灸，時間15min，共治療15d;安定組:舒樂安定片混懸液0.2mg/10g灌胃，1次/d，共治療15d。

2.2 標本收集及檢測方法:每組小鼠觀察進食量/日、體重、精神、活動動作、毛發及檢測血清5－HT和 DA含量。治療第15d，各組小鼠禁食12h，斷頭取血。血液4℃放置90min，3500r/min、10min離心，取血清，－20℃冰箱保存，待測。血清用酶聯免疫分析法(ELISA)，按照試劑盒說明的操作程序測定血清5－HT和DA含量。

2.3 統計學處理:采用SPSS 17.0統計軟件進行分析處理，各項指標結果采用(±s)表示，組間做t檢驗分析，P＜0.05有統計學意義。

2.4 結 果

表1 小鼠血清5－HT、DA含量比較表(±s，ng/mL)

表1 小鼠血清5－HT、DA含量比較表(±s，ng/mL)

* 模型組與對照組比較P＜0.01，灸療組、安定組與模型組比較P＜0.01;＊＊灸療組與安定組間比較P＞0.05。

組別 動物數 5－HT(ng/mL) DA(ng/mL)正常組＊＊10 16.25 ±1.29 12.07 ±1.19模型組 10 7.13 ±2.30* 4.34 ±0.72*灸療組 9 14.07 ±2.20* 12.78 ±1.76*安定組 9 16.06±2.81＊＊ 11.65±0.88

3 討論

PCPA是通過抑制色氨酸輕化酶來降低5－HT的合成，不造成神經元的器質性損害，是常用的失眠模型［4－7］。本實驗采用腹腔注射PCPA制造失眠小鼠模型，觀察蒙醫灸療法治療失眠的作用。造模后，與對照組比較，給予PCPA小鼠出現明顯的失眠特征，毛發變黃、易驚覺、活動頻繁、記憶減退、興奮性增高，攻擊性增強，晝夜節律紊亂，食量減少，體重變輕等。

5－HT作為神經遞質，主要分布于松果體和下丘腦，可能參與痛覺、睡眠和體溫等生理功能的調節，PCPA是5－HT合成抑制劑，造成睡眠晝夜節律消失，達到完全失眠。腦內5－HT濃度的升高，會使機體產生疲勞感和睡意。DA神經元胞體主要集中于中腦，通過腦內DA能神經系統發揮作用，主要在覺醒狀態中起著極其重要的作用［8］［9］。但研究發現，失眠患者血清DA的含量，明顯低于對照組［10］，表明失眠后血清DA含量降低。本實驗結果顯示，對失眠模型小鼠"頂會穴"和"赫依穴"施灸治療后，灸療組5－HT和DA的含量與模型組比較都有顯著提高(P＜0.01)，與舒樂安定組比較都無顯著差異(P＞0.05)，表明蒙醫灸療法具有很好的治療失眠作用，可能通過提高血清5－HT和DA的含量而起到改善睡眠作用，其復雜機制還有待于進一步研究。

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R291.2

A

1006－6810(2014)04－0049－02失眠是現代社會最常見的疾病之一，由于社會節奏的加快和工作壓力的不斷增大，失眠的人數越來越多，失眠成為困擾人們生活的嚴重疾病。蒙醫灸療法是通過在人體體表的特定穴位給以溫熱刺激，達到預防和治療疾病目的的一種峻療法［1］。蒙醫灸療法治療失眠有其獨特的功效，且無毒副作用，能避免藥物依賴性，在蒙醫臨床治療失眠方面較常用的療法［2］［3］。為探討蒙醫灸療法對失眠的治療作用及其機理，我們觀察了蒙醫灸療對失眠小鼠的血清5－HT、DA含量的影響。

*通訊作者:阿古拉，教授，博士生導師。

△資助項目:國家自然科學基金研究項目(No:81260571)。

2014年2月10日收稿