廣棗葉總黃酮的急性毒性作用和鎮靜催眠作用的初步觀察△

董永和 邱 敏 張浩楠 楊玉梅

(包頭醫學院，內蒙古包頭 014060)

廣棗為蒙醫常用藥材之一，具有行氣活血、養心、安神之功效，主治氣滯血瘀、胸痹作痛、心悸氣短、心神不寧等［1］。經初步統計，內蒙古蒙成藥標準共收載內服藥101種，含廣棗的制劑就有11種。廣棗的傳統藥用部位是干燥成熟果實，其提取物廣棗總黃酮(Total Flavones of Choerospondias Axillaris Fructus，TFC)具有明顯的抗心律失常作用、耐缺氧和保護心肌缺血作用、抑制血小板聚集和改善血液流變學、并且可以增強小鼠的免疫功能［2－4］。研究發現，在廣棗葉中也含有總黃酮，即廣棗葉總黃酮(Total Flavones of Choerospondias Axillaris Folium，TFCF)。本實驗旨在觀察TFCF的急性毒性作用和對鎮靜催眠作用的影響，為其進一步的研究開發提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 實驗藥品與試劑:TFCF(廣東海洋大學理學院提供，批號20070610)，提取物中總黃酮類化合物的含量≥5.00%(g/g)，臨用時用蒸餾水配成所需濃度。安定(山東省平原制藥廠，批號H37023039)，臨用時研磨后用蒸餾水配成所需濃度。

1.2 實驗動物:昆明種小鼠(體重18～22g)，雌雄各半，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號:SCXK(京)2007—0001。

2 實驗方法

2.1 急性毒性實驗［5－6］:預實驗結果表明，TFCF口服毒性小，無法測出半數致死量。故進行最大給藥量實驗。取小鼠40只，隨機分為對照組和給藥組，每組20只，雌雄各半。在實驗條件下(恒溫恒濕)喂養3d，給藥前禁食不禁水一夜(12h)。給藥組以70%的TFCF混懸液按20ml·kg－1灌胃給藥，1次/8h×3;對照組給予等容量的生理鹽水。給藥后即刻觀察小鼠反應。常規飼養，觀察15d。記錄小鼠體重、外觀、食欲、行為活動、死亡等情況。

2.2 小鼠自發活動的測定［7］:小鼠50只，隨機分為生理鹽水對照組、安定組(0.002g·kg－1)、TFCF 大劑量組(0.4g·Kg－1)、TFCF 中劑量組(0.2g·Kg－1)、TFCF 小劑量組(0.1g·Kg－1)，每組10只，雌雄各半。每只小鼠在程控自主活動箱放置1 min后，記錄其2 min內的活動次數。小鼠灌胃前禁食不禁水16h，以0.2ml·10g－1灌胃，連續灌胃給藥7d，1 次/d，末次給藥后的20、40、60、90、120 min 同法復測每只小鼠2 min內的活動次數。

2.3 戊巴比妥鈉催眠作用［8］

2.3.1 單次給藥實驗:小鼠50只，分組同2.2。各實驗組小鼠第一次給藥1h后腹腔注射閾劑量的戊巴比妥鈉50mg·kg－1(0.1mL·10g－1)，以翻正反射的消失至恢復的時間為指標測定睡眠時間。

2.3.2 連續給藥實驗:小鼠50只，分組同2.2。小鼠灌胃前禁食不禁水16h，連續灌胃給藥7d，1次/d，給藥1h后腹腔注射閾劑量的戊巴比妥鈉 50mg·kg－1(0.1mL·10g－1)，以翻正反射的消失至恢復的時間為指標測定睡眠時間。

2.4 統計方法:實驗結果均以(s)表示，應用SPSS 13.0統計軟件進行處理，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 TFCF急性毒性作用:給藥后小鼠即開始進食，無異常表現。15d內，小鼠活動自如，反應靈敏，毛色光滑，排便及活動均無異常;食量正常，平均每天進食5～7g/只;體重正常增長，與對照組比較無統計學差異(P＞0.05)，見表1;且無1例死亡。實驗結束頸椎脫臼處死小鼠，肉眼觀察心、肝、腦、脾、腎、胃、腸、子宮、睪丸等重要臟器，均無異常改變。實驗結果計算得出小鼠一日的最大給藥量為42g·kg－1。

表1 TFCF對實驗小鼠體重的影響(±s，n=20)

表1 TFCF對實驗小鼠體重的影響(±s，n=20)

組別 體重增長百分率(%)體重(g)給藥前 給藥15d后生理鹽水組19.5 ±3.7 30.5 ±2.0 36.2 TFCF組19.0 ±3.9 29.4 ±2.6 36.0

3.2 TFCF對小鼠自發活動的影響:與自身給藥前比較，TFCF各劑量組小鼠自發活動均顯著下降(P＜0.05或P＜0.01);與同時段生理鹽水對照組比較，TFCF大劑量組和中劑量組小鼠自發活動在不同時間均有下降(P＜0.05或 P ＜0.01)，見表2。

表2 TFCF對小鼠自發活動的影響(±s，n=10)

表2 TFCF對小鼠自發活動的影響(±s，n=10)

注:與同時段生理鹽水對照組同時刻比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;同組別給藥前后比較，#P ＜0.05、##P ＜0.01

組別小鼠自發活動次數(次/2min)0min 10min 20min 40min 60min 120min生理鹽水組 7.9 ±0.9 7.6 ±2.7 8.0 ±2.2 8.8 ±1.9 8.2 ±1.8 8.0 ±1.5安定組 7.9 ±0.9 2.3 ±1.5＊＊## 2.1 ±2.0＊＊## 1.3 ±1.0＊＊## 0.5 ±0.7＊＊## 0.8 ±0.6＊＊##TFCF 大劑量組 7.7 ±1.3 3.1 ±0.7＊＊## 3.1 ±0.9＊＊## 2.0 ±0.7＊＊## 1.6 ±0.8*## 1.8 ±1.2*##TFCF 中劑量組 8.0 ±1.2 4.3 ±1.8＊＊## 3.4 ±1.5*## 3.4 ±1.6＊＊## 3.4 ±1.4＊＊## 2.9 ±1.4*##TFCF 小劑量組 8.2 ±1.0 5.6 ±1.5## 5.3 ±0.8## 5.6 ±1.7## 6.1 ±1.0## 6.8 ±1.5#

3.3 TFCF對小鼠戊巴比妥鈉睡眠時間的影響

單次給藥和連續給藥實驗結果顯示，與生理鹽水對照組比較，各劑量組TFCF對小鼠戊巴比妥鈉入睡潛伏時間均有顯著降低(P＜0.05或P＜0.01);而對小鼠戊巴比妥鈉睡眠持續時間，TFCF只有大、中劑量組才能延長小鼠戊巴比妥鈉的睡眠持續時間(P ＜0.05或P ＜0.01)，見表3。

表3 TFCF對小鼠睡眠時間的影響(±s，n=10)

表3 TFCF對小鼠睡眠時間的影響(±s，n=10)

注:與同組生理鹽水對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

組別單次給藥(min) 連續給藥(min)入睡潛伏時間 睡眠持續時間 入睡潛伏時間 睡眠持續時間生理鹽水組20.8 ±4.0 188.5 ±83.3 17.4 ±1.7 95.7 ±36.7安定組 6.6 ±1.0＊＊ 307.5 ±39.1＊＊ 5.9 ±1.0＊＊ 155.5 ±30.6＊＊TFCF 大劑量組9.6 ±1.8＊＊ 273.8 ±51.7* 9.9 ±2.1＊＊ 142.3 ±45.4*TFCF 中劑量組10.5 ±2.4＊＊ 249.8 ±26.9*11.8 ±5.5＊＊ 140.5 ±37.8*TFCF 小劑量組 14.2 ±9.6* 244.8 ±49.4 12.9 ±5.5*104.9 ±78.4

4 討論

受藥物濃度和給藥體積的限制，對小鼠一次灌胃給藥無法測出半數致死量。經最大給藥量測定，小鼠每日口服的最大給藥量為42g·kg－1，提示TFCF口服給藥急性毒性很低，但長期毒性作用有待于進一步研究。本次鎮靜實驗結果表明，在自發活動實驗中，TFCF各組均能抑制小鼠自發活動次數;在單次給藥和連續給藥的實驗中，TFCF均能縮短小鼠睡眠潛伏時間;只有大、中劑量組的TFCF才能延長小鼠睡眠持續時間。提示廣棗葉總黃酮有鎮靜作用，但并無疊加性。

此前，不論是國家藥典還是內蒙古成藥標準收載的廣棗及廣棗制劑，都是指廣棗的干燥成熟果實，即廣棗藥材，而廣棗葉長期以來是棄之不用的。本實驗結果表明，TFCF毒性較小，且具有不同程度的鎮靜和催眠作用。廣棗葉是否具有其它藥理作用還有待于進一步研究。廣棗葉產量充足，如果能合理開發應用，變廢為寶，必然會提高廣棗的綜合藥用價值。

［1］張琪，楊玉梅，劉鳳鳴，等.廣棗總黃酮對大鼠缺血性心肌組織蛋白質表達的影響［J］.中國藥理學通報，2006;22(11):1344－8.

［2］楊玉梅，覃建民，徐繼輝，等.廣棗總黃酮對大鼠心室肌細胞ICa、Ito和細胞［Ca2+］i的影響［J］.中國藥理學通報，2004;20(7):784－8.

［3］王玉珍，任建梅，王若愚，等.廣棗總黃酮對小鼠免疫功能的影響［J］.中國藥理學通報，1991;7(3):214－7.

［4］周新民，詹樾，江亞平，等.廣棗一鉀停搏液對心肌保護作用的研究［J］.湖南醫科大學學報，1994;19(5):398－400.

［5］賈鷹玨，李國輝，張平.黃連及黃連解毒湯對小鼠的急性毒性實驗研究［J］.中國藥學雜志，2011;46(18):1399－1404.

［6］唐大軒，熊靜悅，梁婭君，等.川楝子對大鼠完全急性毒性作用研究［J］.時珍國醫國藥，2011;22(10):2387－2389.

［7］張崗強，何昕，董憲喆，等.肝膽兩益湯鎮靜催眠作用及其機制研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2013;19(14):226－229.

［8］張蕾，何曉曦，徐淑萍，等.酸棗果肉的鎮靜催眠作用［J］.中藥材，2011;34(8):1263－1266.