165例HBV基因分型與中醫(yī)證型的關(guān)系探討

楊培偉 趙文霞 徐亞洲

（1 河南中醫(yī)學(xué)院研究生，鄭州 450000；2 河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，鄭州 450000）

165例HBV基因分型與中醫(yī)證型的關(guān)系探討

楊培偉1趙文霞2徐亞洲1

（1 河南中醫(yī)學(xué)院研究生，鄭州 450000；2 河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，鄭州 450000）

目的 了解本地區(qū)慢性乙型肝炎 （CHB）患者乙型肝炎病毒 （HBV）基因型分布的特點(diǎn)，探討基因型與中醫(yī)證型的關(guān)系。方法 收集本地區(qū)CHB患者165例，分為肝膽濕熱證、肝郁脾虛證、肝腎陰虛證、瘀血阻絡(luò)證和脾腎陽虛證；采用熒光定量PCR方法檢測(cè)其HBV基因型。結(jié)果 165例CHB患者C型＞B型，肝郁脾虛證＞瘀血阻絡(luò)證＞肝膽濕熱證，肝郁脾虛證與其他各證相比有顯著性意義 （P＜0.05）。結(jié)論 本地區(qū)CHB患者HBV基因型與不同中醫(yī)證型之間可能存在一定的規(guī)律性，這對(duì)于判斷病情及指導(dǎo)用藥具有重要的臨床意義。

HBV；基因分型；中醫(yī)證型

HBV基因型存在典型的地域分布差異，且不同基因型致病性不同，HBV基因型與病毒的傳播方式、抗病毒藥物的療效及預(yù)后都有一定的相關(guān)性。本研究應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng) （FQ－PCR）技術(shù)對(duì)本地區(qū)165例乙型病毒性肝炎 （HBV）患者進(jìn)行了HBV基因分型，探討HBV基因型與中醫(yī)證型可能存在的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組165例慢性乙型肝炎 （CHB）患者為2010年7月至2013年11月本院肝病科住院或門診就診的患者，均為河南人。其中男86例，女79例；年齡為13～70歲，平均年齡 （39.2±12.0）歲；病程最短半年，最長(zhǎng)50年，平均病程為 （10.6±7.4）年。西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)為慢性肝炎的診斷按照2000年西安會(huì)議 “病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)”［1］。中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)參照2004年中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)內(nèi)科分會(huì)慢性肝炎辨證標(biāo)準(zhǔn)，排除中醫(yī)辨證不屬于慢性肝炎者。將患者分為肝膽濕熱、肝郁脾虛、肝腎陰虛、瘀血阻絡(luò)、脾腎陽虛5型。所有病例血清排除合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染以及藥物性肝病、酒精性肝病、自身免疫性肝病、代謝性肝病等。血清－70℃保存。

1.2 主要試劑 HBV基因分型PCR檢測(cè)試劑盒由上海克隆生物高技術(shù)有限公司提供，試劑盒檢測(cè)下限103 IU/ml。

1.3 主要儀器 PCR擴(kuò)增儀為美國(guó)羅氏公司MX－3000P全自動(dòng)定量PCR儀，基因測(cè)序儀為美國(guó)AB公司的3130型測(cè)序儀。

1.4 檢測(cè)方法 熒光定量PCR法HBV基因分型檢測(cè)在ABI系列PCR熒光檢測(cè)儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，循環(huán)參數(shù)如下：42℃逆轉(zhuǎn)錄5min；94℃，變性5min；40個(gè)PCR循環(huán)：94℃變性5s和60℃退火40s；最后72℃延伸5min。利用ABI 3130（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）對(duì)所得PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序。將序列結(jié)果與美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心 （NCBI）的HBV數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)，得到HBV基因型。該試劑采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （PCR）結(jié)合TaqMan熒光探針技術(shù)，F(xiàn)AM波長(zhǎng)檢測(cè)B型乙型肝炎病毒，HEX波長(zhǎng)檢測(cè)C型乙型肝炎病毒。檢測(cè)按照說明書操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV基因型種類、分布頻率 165例慢性HBV感染者中，B型56例 （男29例，女27例）占33.94%，C型104例 （男54例，女50例）占63.03%，D型2例（男性）占1.21%，未定型3例 （男1例，女2例）占1.81%。提示慢性HBV感染者的優(yōu)勢(shì)基因型為C型，其次為B型，D型所占比例最少。

2.2 中醫(yī)證型分布規(guī)律 根據(jù)臨床主證特點(diǎn)，165例CHB患者中肝膽濕熱型12例 （7.27%），肝郁脾虛型92例 （55.76%），肝腎陰虛型2例 （1.21%），瘀血阻絡(luò)型57例 （34.55%），脾腎陽虛型2例 （1.21%），表明CHB患者的中醫(yī)證候以肝郁脾虛和瘀血阻絡(luò)型居多。

2.3 HBV基因型與中醫(yī)證型的關(guān)系 CHB患者在性別、年齡、病程等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），CHB患者中醫(yī)辨證分型在不同HBV基因型中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因D基因型和未定型者及肝腎陰虛證和脾腎陽虛證例數(shù)較少，統(tǒng)計(jì)誤差太大，故均未列入統(tǒng)計(jì)。C基因型多于B基因型，C型的比例肝郁脾虛證＞瘀血阻絡(luò)證＞肝膽濕熱證，基因B型與基因C型及各證型間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 HBV基因型與中醫(yī)證型的關(guān)系 ［n（%）］

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為肝喜條達(dá)而惡抑郁，主疏泄，調(diào)暢氣機(jī)。肝病首先影響肝臟的疏泄功能。表1提示CHB患者肝郁脾虛證出現(xiàn)頻次最多，瘀血阻絡(luò)證次之，肝膽濕熱證再次之。臨床中已有很多CHB患者出現(xiàn)脾胃功能的異常，這正好與中醫(yī)的 “見肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實(shí)脾”理論相符合。另外，“久病入絡(luò)”，會(huì)影響氣血運(yùn)行，出現(xiàn)瘀血阻絡(luò)證。

根據(jù)HBV全基因組測(cè)序結(jié)果，規(guī)定核苷酸序列異質(zhì)性≥8.0%或S基因核甘酸序列異質(zhì)性≥4.0%，將HBV分為A～I(xiàn)9種基因型［2－3］。HBV基因型呈一定的地理區(qū)域性分布［4］，在我國(guó)以C型和B型為主，本研究采用熒光定量PCR法檢測(cè)本地區(qū)165例CHB患者HBV基因型，結(jié)果提示河南地區(qū)的慢性HBV感染者的優(yōu)勢(shì)基因型為C型。有研究表明，C基因型感染者與B基因型感染者相比，較難出現(xiàn)HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，也更容易進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。

HBV基因型與拉米夫定治療耐藥發(fā)生率具有一定相關(guān)性，乙肝病毒某些基因型容易發(fā)生基因變異，在臨床中對(duì)CHB患者進(jìn)行基因分型檢測(cè)是很有必要的。同時(shí)，通過加強(qiáng)中醫(yī)證型與基因分型之間的聯(lián)系，促進(jìn)辨證與辨病、宏觀辨證與微觀辨證相結(jié)合，有利于明確證候的診斷，提高中醫(yī)藥的臨床療效，促進(jìn)中醫(yī)藥更好地發(fā)展。因此，了解HBV基因型分布和中醫(yī)證型，追溯感染源對(duì)判斷其預(yù)后、監(jiān)測(cè)抗病毒藥物療效、減少基因變異、延緩病程進(jìn)展及選擇個(gè)體化治療方案等方面具有重要應(yīng)用價(jià)值。

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)·肝臟學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案［J］.中華肝臟病雜志，2000，8：324.

［2］Tran TT，Trinh TN，Abe K.New complex recombinant genotype of hepatitis B virus identified in Vietnam［J］.J Virol，2008，82（11）：5657.

［3］Olinger CM，Jutavijittum P，Hubschen JM，etal.Possible new hepatitis B virus genotype southeast Asia［J］.Emerg Infect Dis，2008，14（11）：1777.

［4］馮琴，朱善軍，何江，等.新疆5個(gè)民族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布特點(diǎn)［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20（14）：2015－2017.

10.3969/j.issn.1672－2779.2014.10.094

1672－2779（2014）－10－0154－02

（本文責(zé)編：楊 杰 本文校對(duì)：張文娟

2014－01－20）