HPLC法測(cè)定卡托普利片含量的測(cè)量不確定度評(píng)定

秦 立，肖 英，范亞剛（.云南省食品藥品檢驗(yàn)所，昆明 6500；.山東省食品藥品檢驗(yàn)所，濟(jì)南 500）

HPLC法測(cè)定卡托普利片含量的測(cè)量不確定度評(píng)定

秦 立1＊，肖 英2，范亞剛1（1.云南省食品藥品檢驗(yàn)所，昆明 650011；2.山東省食品藥品檢驗(yàn)所，濟(jì)南 250101）

目的：評(píng)定高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定卡托普利片含量的測(cè)量不確定度。方法：建立HPLC法測(cè)定卡托普利片的含量的數(shù)學(xué)模型，分析測(cè)量不確定度的影響因素并對(duì)各因素進(jìn)行評(píng)估，給出擴(kuò)展測(cè)量不確定度報(bào)告。結(jié)果：HPLC法測(cè)定卡托普利片含量的擴(kuò)展測(cè)量不確定度為1.2%，測(cè)量結(jié)果表示為（100.3±1.2）%，k＝2。結(jié)論：明確產(chǎn)生不確定度的主要來(lái)源，可為有效地控制該含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確性提供可靠的理論依據(jù)。

卡托普利片；高效液相色譜法；含量測(cè)定；測(cè)量不確定度

測(cè)量不確定度是與測(cè)量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的一個(gè)參數(shù)，用以表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性[1]。它與測(cè)量誤差有著本質(zhì)的區(qū)別。測(cè)量不確定度對(duì)測(cè)量、試驗(yàn)結(jié)果的可信性、可比性和可接受性都有非常重要的意義。在相同的條件下進(jìn)行測(cè)量時(shí)，合理賦予被測(cè)量的任何值，均具有相同的測(cè)量不確定度，即測(cè)量不確定度僅與測(cè)量方法有關(guān)[2]。

卡托普利片是《中國(guó)藥典》2010年版（二部）收載品種[3]，為競(jìng)爭(zhēng)性血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，適用于治療慢性心功能不全和高血壓。卡托普利片的含量測(cè)定方法為高效液相色譜（HPLC）外標(biāo)法。筆者根據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》及有關(guān)規(guī)定[4-5]并參考有關(guān)文獻(xiàn)[6-9]，對(duì)HPLC法測(cè)定卡托普利片含量的測(cè)量不確定度進(jìn)行評(píng)估，分析影響不確定度的各因素，為客觀評(píng)價(jià)卡托普利片的含量測(cè)定結(jié)果提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

2695型HPLC儀，包括Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器及Waters Empower工作站（美國(guó)Waters公司）；BP-211D電子天平（德國(guó)賽多利斯公司，d＝0.01mg）；DELTA320酸度計(jì)（瑞士梅特勒-托利多公司）；100m l量瓶均檢定為A級(jí)。

卡托普利對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100318-201103，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.5%）；卡托普利片（云南龍恩制藥有限公司，批號(hào)：20130301）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 試驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液-甲醇-乙腈（75∶25∶5，V/V/V，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）；流速：1.0m l/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μl。

2.2 溶液的制備

取樣品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于卡托普利10mg），置于100m l量瓶中，加流動(dòng)相適量溶解并定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取卡托普利對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置于100m l量瓶中，加流動(dòng)相適量溶解并定容，作為對(duì)照品溶液。

2.3 樣品測(cè)定

精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μl，注入HPLC儀，記錄色譜，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

3 測(cè)量不確定度評(píng)定

化學(xué)分析中的測(cè)量不確定度評(píng)定主要分為以下步驟[2，4]：被測(cè)量的技術(shù)規(guī)定；識(shí)別測(cè)量不確定度的來(lái)源；測(cè)量不確定度分量的量化；計(jì)算合成標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量不確定度；擴(kuò)展測(cè)量不確定度的給出；報(bào)告測(cè)量不確定度。

3.1 數(shù)學(xué)模型

根據(jù)測(cè)定原理和過(guò)程，樣品的標(biāo)示百分含量計(jì)算公式為：

式中：X為供試品中卡托普利的標(biāo)示百分含量；AX為供試品的峰面積；AR為對(duì)照品的峰面積；WX為供試品的稱(chēng)取量；WR為對(duì)照品的稱(chēng)取量；VX為供試品溶液的配制體積；VR為對(duì)照品溶液的配制體積；PR為對(duì)照品的純度；W為平均片質(zhì)量；標(biāo)示量為25mg/片。

3.2 識(shí)別測(cè)量不確定度的來(lái)源

有關(guān)測(cè)量不確定度的來(lái)源見(jiàn)圖1。

圖1 測(cè)量不確定度分量因果圖Fig 1 Cause-effect diagram of uncertainty components

3.3 測(cè)量不確定度分量的量化分析

3.3.6 供試品溶液稀釋的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度ure（lVX） 測(cè)量不確定度的分析同“3.3.3”項(xiàng)。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度ur（elVX）＝6.80× 10－4。 3.3.7 供試品色譜峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度ure（lAX） 因檢測(cè)次數(shù)較少，故采用極差法[3]計(jì)算供試品色譜峰面積引入的不確定度。當(dāng)n＝2時(shí)，極差系數(shù)C＝1.13。精密稱(chēng)取2份卡托普利片供試品，分別配制成供試品溶液，每份溶液重復(fù)進(jìn)樣2次，結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 供試品峰面積測(cè)定結(jié)果（n＝2）Tab 1 Result of the peak area for test sam ple（n＝2）

3.4 計(jì)算合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc，rel

測(cè)量不確定度各分量的分析結(jié)果見(jiàn)表2和圖2。

表2 各分量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽Tab 2 Relative standard uncertainty of each component

圖2 測(cè)量不確定度的分量大小Fig 2 Value of uncertainty components

3.5 給出擴(kuò)展不確定度U

測(cè)量結(jié)果符合正態(tài)分布，取置信概率為95%，包含因子k＝2，則：U＝kuc（X）＝2×0.6%＝1.2%。

3.6 測(cè)量不確定度報(bào)告

HPLC法測(cè)定卡托普利片的含量結(jié)果表示為X＝（100.3± 1.2）%，k＝2。

4 討論

由上述測(cè)量不確定度的分析評(píng)定結(jié)果可知，HPLC法測(cè)定卡托普利片含量的不確定度主要來(lái)自于對(duì)照品的稱(chēng)取量，其次是藥片的質(zhì)量差異、液相色譜峰面積、供試品的稱(chēng)取量以及稀釋過(guò)程。提示在檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)選用精度符合要求的分析天平稱(chēng)量，使用經(jīng)校正合格的容量?jī)x器進(jìn)行稀釋?zhuān)粦?yīng)定期做好HPLC儀的計(jì)量檢定和期間核查工作，使HPLC儀的技術(shù)性能處于良好工作狀態(tài)，以確保測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠；對(duì)于含量測(cè)定結(jié)果處于合格邊緣的產(chǎn)品應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待藥片質(zhì)量差異對(duì)結(jié)果的影響。

[1] 全國(guó)法制計(jì)量管理計(jì)量技術(shù)委員會(huì).測(cè)量不確定度評(píng)定與表示：JJF1059.1-2012[S].北京：中國(guó)質(zhì)檢出版社，2013.

[2] 倪育才.實(shí)用測(cè)量不確定度評(píng)定[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2004：9.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：525.

[4] 全國(guó)法制計(jì)量管理計(jì)量技術(shù)委員會(huì).化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定：JJF1135-2005[S].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2005.

[5] 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南：CNAS-GL06[S].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006.

[6] 謝瓊玉.HPLC法測(cè)定賴(lài)諾普利片含量及含量均勻度的不確定度評(píng)定[J].中國(guó)藥房，2013，24（40）：3 827.

[7]翁雪萍，黃丹瑩.HPLC法測(cè)定保健食品中蘆薈苷含量不確定度的評(píng)定[J].藥物分析雜志，2011，31（6）：1 193.

[8] Quintela M，Báguena J，GotorG，etal.Estimation of the uncertainty associated w ith the results based on the validation of chromatographic analysis procedures：application to the determ ination of chlorides by high performance liquid chromatography and of fatty acids by high resolution gas chromatography[J].J Chromatogr A，2012，1 223： 107.

[9] Konieczka P，Namie?nik J.Estimating uncertainty in analytical procedures based on chromatographic techniques [J].JChromatogrA，2010，1 217（6）：882.

[10]全國(guó)流量容量計(jì)量技術(shù)委員會(huì).常用玻璃量器檢定規(guī)程：JJG196-2006[S].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006.

Evaluation of Uncertainty for the Content Determ ination of Captopril Tablets by HPLC

QIN Li1，XIAO Ying2，F(xiàn)AN Ya-gang1（1.Yunnan Institute for Food and Drug Control，Kunm ing 650011，China；2.Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the uncertainty evaluation for the determination of Captopril tablets by HPLC.METHODS：Mathematicalmodelwas established for HPLC for the content determination of Captopril tablets to identify influential factors of uncertainty，evaluate the uncertainty factors and report expanded measurement uncertainty.RESULTS：The expanded uncertainty for the content determination of Captopril tablets as 1.2%，and the result of content determination was（100.3± 1.2）%（k＝2）.CONCLUSIONS：Main source of uncertainty should be clear and definite，which can provide theory evidence for accuracy control of themeasurementmethod.

Captopril tablets；HPLC；Content determ ination；Uncertainty

R917

A

1001-0408（2014）12-1140-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2014.12.29

＊副主任藥師，碩士。研究方向：藥品質(zhì)量分析。電話：0871-63130536。E-mail：qinli2112@gmail.com

2013-10-21

2014-01-24）