直接擴(kuò)增技術(shù)在接觸性檢材DNA檢驗(yàn)中的應(yīng)用

李長征 劉海東 崔 文 尋超群 孫賢學(xué) 姜銘章

(1濟(jì)寧市公安局刑偵支隊(duì),山東 濟(jì)寧 272000；2濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)院，濟(jì)寧 272067)

案件現(xiàn)場接觸性檢材DNA的檢驗(yàn)一直是難題，傳統(tǒng)的DNA提取方法無論是chelex-100提取法、磁珠法還是硅珠法對目標(biāo)載體的選擇都為大載體，雖然可以保證獲取到足夠的DNA模板，但大體系的提取方法也降低了目標(biāo)DNA的單位濃度，從而造成擴(kuò)增結(jié)果的失敗。極微量的接觸性DNA檢材如果選取大載體進(jìn)行提取更容易獲得混合DNA分型。直接擴(kuò)增技術(shù)是使擴(kuò)增直接從檢材開始，對接觸性DNA檢材的檢驗(yàn)較傳統(tǒng)提取方法有著明顯優(yōu)勢[1]，其對目標(biāo)載體的選擇更有針對性，在保證獲得足夠模板DNA的同時(shí)，更容易得到單一個(gè)體來源的DNA分型。本文采用DNA直接擴(kuò)增技術(shù)對案件現(xiàn)場中的不同生物檢材DNA進(jìn)行直接擴(kuò)增，以探討該技術(shù)的有效性，為保證結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性，我們采取了在載體的一定面積內(nèi)選取多個(gè)點(diǎn)進(jìn)行平行擴(kuò)增的方法。

1 材料與方法

1.1 檢材

120份檢材全部來自本實(shí)驗(yàn)室日常受理案件中的現(xiàn)場生物檢材。包括手套20只，煙蒂20枚，上衣20件，飲料瓶、吸管20個(gè)，殘缺指紋40枚。分別剪取3處2mm×2mm手套拇指虎口或手背浮出的纖維、3處2mm×2mm煙蒂與口唇接觸處外面紙片、3處3mm×3mm上衣袖口或衣領(lǐng)處5cm×5cm面積內(nèi)布片、3處2mm×2mm擦拭飲料瓶口和吸管的擦拭棉簽、3處大小為2mm×2mm殘缺指紋擦拭濕棉簽。

1.2 儀器與試劑

ABI 9700 PCR儀和ABI 3500xL測序儀(美國ABI公司)；Identifiler Direct試劑盒(美國ABI公司)； Identifiler擴(kuò)增試劑盒(美國ABI公司)；5% chelex-100飽和溶液；10mg/ml，蛋白酶K(proteinose K,PK)；QIAGEN硅膜試劑盒。……