抗-HCV CLIA檢測(cè)S/CO值與確證試驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性探討

王正芳，張素華，解松剛

(揚(yáng)州市蘇北人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)中心，江蘇揚(yáng)州225001)

抗-HCV CLIA檢測(cè)S/CO值與確證試驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性探討

王正芳，張素華，解松剛

(揚(yáng)州市蘇北人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)中心，江蘇揚(yáng)州225001)

目的探討抗丙型肝炎病毒(HCV)抗體化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析法(CLIA)檢測(cè)S/CO值與確證試驗(yàn)陽(yáng)性的相關(guān)性。方法采集用CLIA檢測(cè)抗-HCV樣本測(cè)定值/臨界值(S/CO)在0.9～12之間的標(biāo)本124例，S/CO值>12.0的標(biāo)本25例。以重組免疫印跡法(RIBA)最終確認(rèn)。結(jié)果抗-HCV S/CO值在0.9～1.0之間的共20例，RIBA法確證陽(yáng)性的0例，陰性的15例(占75%)，不確定的5(占15%)例；1.1～5.0之間的共92例，RIBA法確證陽(yáng)性的5例(5.4%)，陰性的65例(占70.7%)，不確定的22 (占23.9%)例；5.1～12.0之間的共12例，RIBA法確證陽(yáng)性的3例(25%)，陰性的5例(占41.7%)，不確定的4(占33.3%)例。S/CO值>12.0時(shí)，25例標(biāo)本中RIBA法確證陽(yáng)性的20例(80%)，陰性的2例(占8%)，不確定的3(占12%)例。CLIA法檢測(cè)HCV抗體的敏感性和特異性分別為100%和16.53%。結(jié)論抗HCV用CLIA法檢測(cè)S/CO值時(shí)，RIBA確證的陽(yáng)性率隨著S/CO值的增加顯著升高(P<0.05)。對(duì)CLIA法結(jié)果S/CO偏低的樣本應(yīng)慎重，綜合分析，合理解釋，不確定病例隨訪，必要時(shí)用RIBA法進(jìn)一步驗(yàn)證，避免假陽(yáng)性。

肝炎抗體，丙型；化學(xué)發(fā)光測(cè)定法；重組免疫印跡實(shí)驗(yàn)；診斷

丙型肝炎病毒(HCV)自1989年被發(fā)現(xiàn)以來，近年有報(bào)道稱發(fā)病患者數(shù)有上升趨勢(shì)[1]。目前，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析法(CLIA)因其靈敏度高、線性范圍寬等特點(diǎn)，已經(jīng)開始用于HCV感染的診斷[2]，但假陽(yáng)性率不容忽視[3]。在2011年中國(guó)疾病預(yù)防控制中心編寫的丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范中，需要根據(jù)S/CO值判斷是否需要進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)即確證試驗(yàn)(RIBA)，由于RIBA試劑昂貴，我國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室及采供血機(jī)構(gòu)對(duì)抗-HCV檢測(cè)結(jié)果不強(qiáng)行進(jìn)行確證試驗(yàn)。但是，由于抗-HCV檢測(cè)假陽(yáng)性的問題，勢(shì)必會(huì)引起相當(dāng)一部分就醫(yī)者沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)及不必要的心理壓力。國(guó)產(chǎn)CLIA試劑是否也可遵循如Ortho、Abbott試劑類似的原則？其S/ CO比值定在多少合適？目前對(duì)這一問題的研究報(bào)道甚少。鑒于此，筆者以抗-HCV CLIA S/CO值與確證試驗(yàn)陽(yáng)性的相關(guān)性進(jìn)行探討，以指導(dǎo)檢測(cè)方法的選擇。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 樣本收集2012年6月至2013年5月江蘇省揚(yáng)州市蘇北人民醫(yī)院住院和門診患者血清樣本，2h內(nèi)分離血清，24h內(nèi)進(jìn)行CLIA法的檢測(cè)，收集抗HCV S/CO值在0.9～12[4]之間的標(biāo)本，共124例，S/CO值>12的標(biāo)本25例。根據(jù)S/CO值分布分為四組，-20℃凍存待RIBA法確證。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑CHEMCLIN600型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以及配套的HCV抗體診斷試劑盒(北京科美東雅生物技術(shù)有限公司)；重組免疫印跡法(RIBA)確證試劑(北京萬泰生物藥業(yè)有限公司)，批號(hào)RC20130804，其檢測(cè)性能與進(jìn)口試劑相同[5]。試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2.2 CLIA法應(yīng)用間接法化學(xué)發(fā)光免疫分析原理測(cè)定其發(fā)光值(RLU)，根據(jù)臨界值(CO)判斷樣本中是否含有HCV特異性抗體，結(jié)果判斷以S/CO≥1.0為陽(yáng)性，S/CO＜1.0為陰性。

1.2.3 RIBA法用于確證抗HCV抗體陽(yáng)性的標(biāo)本及HCV抗體篩查試驗(yàn)假陽(yáng)性結(jié)果的進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)[6-8]。通過顯色條帶以判定標(biāo)本陰、陽(yáng)性，以出現(xiàn)兩條及兩條以上條帶為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0進(jìn)行處理，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 S/CO比值分布與RIBA結(jié)果分析抗HCV用CLIA法檢測(cè)S/CO值在0.9～12之間的標(biāo)本，共124例，S/CO值>12的標(biāo)本25例。根據(jù)S/CO值分布分為四組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)S/CO值<12時(shí)：陰性率隨著S/CO值的增加無顯著降低(χ2=4.597，P=0.1)，陽(yáng)性率隨著S/CO值的增加顯著升高(χ2=8.377，P=0.015)，不確定率隨著S/CO值的增加無顯著變化(χ2=0.502，P=0.778)。當(dāng)S/CO值<12時(shí)，所有標(biāo)本用RIBA確證后陰性68.5%，陽(yáng)性6.5%，不確定25%。當(dāng)S/CO值>12時(shí)，陽(yáng)性率顯著提高(χ2= 73.748，P<0.01)，陰性率顯著降低(χ2=31.394，P< 0.01)，不確定率無顯著降低(χ2=1.996，P=0.158)。見表1。

表1 S/CO比值分布與各種檢測(cè)方法結(jié)果分析

表1 S/CO比值分布與各種檢測(cè)方法結(jié)果分析

2.2 CLIA法檢測(cè)HCV抗體的臨床評(píng)價(jià)CLIA法的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及診斷效率分別為：100%、16.53%、21.71%、100%及32.21%。見表2。

表2 RIBA法確證CLIA結(jié)果(n)

3 討論

目前，臨床上判斷HCV感染的技術(shù)主要以HCV核酸檢測(cè)、基因型以及血清中相關(guān)抗體、抗原的檢測(cè)為主。核酸檢測(cè)技術(shù)操作繁雜而且成本昂貴；而血清標(biāo)志物的檢測(cè)操作簡(jiǎn)易，費(fèi)用也較低，臨床應(yīng)用廣泛。臨床初篩常見方法有ELISA法、放射免疫測(cè)定法、粒子凝集法、膠體金標(biāo)記法和化學(xué)發(fā)光免疫分析法。

臨床工作中發(fā)現(xiàn)CLIA法測(cè)抗HCV時(shí)S/CO值在0.9～12之間的標(biāo)本占抗HCV陽(yáng)性結(jié)果的相當(dāng)一部分，為減少就醫(yī)者不必要的心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，結(jié)果是否為假陽(yáng)性還應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的確證試驗(yàn)后再報(bào)告結(jié)果。國(guó)外有研究表明抗HCV S/CO值與確證試驗(yàn)的陽(yáng)性率極具相關(guān)性，是否需要做確證試驗(yàn)可以依據(jù)S/CO值的高低來判斷[9]。當(dāng)前，美國(guó)疾病預(yù)防控制中心(CDC)的新導(dǎo)則是僅對(duì)初篩試驗(yàn)S/CO值≥3.8的標(biāo)本做病毒核酸檢測(cè)以確診。這項(xiàng)措施可大大減少進(jìn)一步驗(yàn)證的標(biāo)本數(shù)，從而可大大節(jié)省確證所需費(fèi)用。筆者對(duì)抗HCV用CLIA法檢測(cè)S/CO值在0.9～12之間的標(biāo)本，共124例，S/CO值>12的標(biāo)本25例。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：當(dāng)S/CO值<12時(shí)：陰性率隨著S/CO值的增加無顯著降低(P>0.05)，陽(yáng)性率隨著S/CO值的增加顯著升高(P<0.05)，不確定率隨著S/CO值的增加無顯著變化(P>0.05)。當(dāng)S/CO值>12時(shí)，陽(yáng)性率顯著提高(P<0.05)，陰性率顯著降低(P<0.05),不確定率無顯著降低(P>0.05)。此外，分布最密集的是1.1～5.0之間的標(biāo)本，共92例，也是假陽(yáng)性率較高的一組。從結(jié)果可以看出，S/CO值<12時(shí)，抗HCV CLIA法存在著很大的假陽(yáng)性率，有文獻(xiàn)報(bào)道[3]國(guó)產(chǎn)試劑因?yàn)榕R界值大大低于國(guó)外試劑，但國(guó)產(chǎn)試劑對(duì)于陰陽(yáng)性樣品檢測(cè)的OD值差別太小，對(duì)于處于臨界值附近的樣品易檢測(cè)為假陽(yáng)性。這是因?yàn)閲?guó)產(chǎn)的HCV試劑抗原純度不夠；假陽(yáng)性還可能為自身免疫性疾病或者妊娠干擾[10]。當(dāng)S/CO值>12時(shí)，陽(yáng)性率達(dá)到80%，尚未達(dá)到陽(yáng)性預(yù)測(cè)值≥95%。但抗HCV用CLIA法檢測(cè)S/CO值時(shí)，RIBA確證的陽(yáng)性率隨著S/CO值的增加顯著升高(P<0.05)。CLIA法檢測(cè)HCV抗體的敏感性達(dá)到100%，但是特異性和診斷效率與國(guó)內(nèi)研究相比不高[11]，分析可能與標(biāo)本的選取有關(guān)，增大S/CO值>12的標(biāo)本量可能會(huì)明顯提高，尚待進(jìn)一步研究。

在抗-HCV測(cè)定的化學(xué)發(fā)光免疫學(xué)方法中，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法(EIA)研究較多[12]。國(guó)內(nèi)黃霞[13]等對(duì)19例獻(xiàn)血者的抗-HCV EIA的反應(yīng)強(qiáng)度(美國(guó)Abbott公司的Murex HCV 4.0 EIA)與RIBA試驗(yàn)結(jié)果(荷蘭Organon公司的LiaTek III)的相關(guān)性進(jìn)行了研究，在5份RIBA陽(yáng)性標(biāo)本中，有3份EIA S/CO比值并不高，因此認(rèn)為EIA S/CO比值與確證試驗(yàn)的陽(yáng)性率無明顯相關(guān)性。任芙蓉等[14-15]曾對(duì)2003年11月-2004年5月采集的獻(xiàn)血者初篩和/或復(fù)檢抗-HCV陽(yáng)性標(biāo)本156份，用當(dāng)前國(guó)內(nèi)初篩常用的Ortho HCV 3.0 EIA及6種國(guó)產(chǎn)HCV EIA試劑重新雙孔復(fù)檢，確證試驗(yàn)則用Chiron Procleix HCV Discriminatory Assay檢測(cè)HCV RNA或用Chiron RIBA 3.0 SIA檢測(cè)抗-HCV，結(jié)果顯示，7種試劑均能很好地預(yù)測(cè)確證試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果，但各試劑的S/CO閾值差別很大，其S/CO閾值及其確證試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果預(yù)測(cè)率分別為：Ortho S/CO≥3.8時(shí)確證陽(yáng)性預(yù)測(cè)率為96.1%，華美S/CO≥6.0為97.3%，華大吉比愛S/CO≥7.0為96.1%，英科新創(chuàng)S/CO≥8.6為96.1%，金偉凱S/CO≥10.0為96.1%，科華S/CO≥1 0.0為96.0%，萬泰S/CO≥14.0為96.0%。這些研究結(jié)果給本實(shí)驗(yàn)提供了較好的參考價(jià)值。

鑒于此實(shí)驗(yàn)結(jié)果，臨床工作中應(yīng)結(jié)合抗-HCV和病毒核酸檢測(cè)，并參考其他檢測(cè)指標(biāo)如谷草轉(zhuǎn)氨酶等[16]，為丙肝的早期診斷、療效判斷、預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。建議CLIA法對(duì)S/CO偏低的樣本應(yīng)慎重，必要時(shí)用RIBA法進(jìn)一步驗(yàn)證，以避免假陽(yáng)性。在本實(shí)驗(yàn)的研究基礎(chǔ)上，以后有必要增大樣本量，增加不同的實(shí)驗(yàn)方法或者不同的抗HCV試劑，或?qū)CV不同感染率的人群進(jìn)行分析研究。

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R446.62,R512.6+3

A

1674-1129(2014)04-0429-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.022

2014-05-04；

2014-05-21)

解松剛。