南昌血站病毒滅活血漿制品主要質量控制指標的分析

錢獻，楊南

(南昌市中心血站，江西南昌330025)

南昌血站病毒滅活血漿制品主要質量控制指標的分析

錢獻，楊南

(南昌市中心血站，江西南昌330025)

目的了解本血站經亞甲藍/光化學法病毒滅活后，新鮮冰凍血漿、冷沉淀、冷上清中總蛋白、纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量是否符合《全血及成份血質量要求》(GB18649-2012)的質量要求。方法隨機采集100袋新鮮冰凍血漿，經亞甲藍/光化學法病毒滅活過濾后留取1份標本(病毒滅活新鮮冰凍血漿實驗組)，解凍后制備冷沉淀前各留取1份標本(病毒滅活新鮮冰凍血漿實驗組)，采用改良快速融化離心法制備冷沉淀后各留取1份標本(冷沉淀實驗組)，留取冷上清標本各1份(冷上清實驗組)，三個實驗組分別檢測總蛋白、纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量。結果病毒滅活新鮮冰凍血漿總蛋白和凝血因子Ⅷ含量分別為57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分別為154.4mg/袋、87.8IU/袋，冷上清的總蛋白含量為46.3g/L。結論本站制備的病毒滅活新鮮冰凍血漿、冷沉淀符合《全血及成份血質量要求》(GB18649-2012)的質量要求，冷上清的血漿蛋白含量不足，不能標注為病毒滅活冰凍血漿在臨床上使用。

新鮮冰凍血漿；冷沉淀；冷上清；蛋白；凝血因子

由于ELISA、NAT檢測技術的局限性、檢測項目的有限性,即使通過加強對低危獻血者的招募和血液的篩選，仍不可能完全避免經血傳播病原體的漏檢，為有效降低疾病經血傳播的風險，亞甲藍/光化學法用于血漿病毒滅活在中國血站系統已得到廣泛采用。南昌血站于2009年開展亞甲藍/光化學法制備病毒滅活血漿，目前病毒滅活血漿已在南昌市各醫院得到廣泛應用，為進一步改進病毒滅活血漿的制備方法、規范質量控制，本站隨機抽取200份經過亞甲藍/光化學法進行病毒滅活處理的血漿樣本，進行質量指標檢測。

1 材料與方法

1.1 研究對象隨機抽取符合《獻血者健康檢查標準》的無償獻血者血樣100份，使用ACD-B保養液血袋采集血液。

1.2 試劑與儀器ZBK-YBM-01醫用血漿病毒滅活柜(山東淄博中保康醫療器具公司)，HXL血液濾白柜(青島海爾公司)，WG-G型低溫操作柜(山東威高集團醫用高分子制品公司)，SDJ-20血漿速凍機(天津天商冰凍科技有限公司)；KJX-111冰凍血漿解凍箱(蘇州醫用儀器廠)，Thermo CRYOFUGE6000i大容量離心機(賽默飛世爾科技公司)，WG-JGJ-I型無菌接管機(山東威高集團醫用高分子制品公司)，FB-20型血凝儀(山西亞森)，超低溫冰箱MDF-U50V(日本SANYO公司)。總蛋白測定試劑盒(四川邁克生物科技公司)，凝血因子Ⅷ促凝活性檢測試劑盒、纖維蛋白原檢測試劑盒(成都協和生物技術公司)，一次性使用病毒滅活裝置配套用輸血過濾器(山東淄博中保康醫療器具公司)。

1.3 方法血液采集后4h內按照標準操作規程分離新鮮血漿，向血漿中加入一定量亞甲藍，混勻后使亞甲藍最終濃度為1μg/ml，25 000～40 000 Lx光照強度的可見光照射35min，病毒滅活柜的溫度保持為5℃，將經過光照后的血漿通過病毒滅活過濾器去除殘余的亞甲藍和白細胞后，各留取1份2ml標本(病毒滅活FFP實驗組)，血漿連同留取的標本置于-50℃血漿速凍機速凍2h后保存于-30℃，48h后，標本(病毒滅活FFP實驗組)置于37℃解凍，解凍后檢測總蛋白、凝血因子Ⅷ含量，病毒滅活FFP采用改良快速融化離心法制備冷沉淀，制備好的冷沉淀各留取1份2ml標本(冷沉淀實驗組)，檢測纖維蛋白原、凝血因子Ⅷ含量，去除冷沉淀后的血漿各留取1份2ml標本(冷上清實驗組)檢測總蛋白含量。

1.4 統計學分析樣本測定結果采用IBM SPSS Statistics v19進行統計，剔除離群值，所得結果用x±s表示。由于本次研究只分析樣品測定結果是否符合國家標準下限值，而非樣本均數與總體均數的比較，所以不需要進行統計學比較。

2 結果

檢測得三種病毒滅活血漿制品主要質量指標與國家標準的比較見表1。

表1 三種病毒滅活血漿制品主要質量指標與國家標準的比較

病毒滅活新鮮冰凍血漿總蛋白和凝血因子Ⅷ含量分別為57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分別為154.4mg/袋、87.8IU/袋，符合《全血及成份血質量要求》(GB18649-2012)的質量要求，冷上清的總蛋白含量為46.3g/L，低于國家標準≥50g/L的要求。

3 討論

亞甲藍可與病毒核酸的鳥嘌呤以及病毒的脂質包膜相結合，在可見光的作用下，可使病毒的核酸斷裂，包膜破損，使病毒完全失去穿透、復制及感染能力，從而達到滅活病毒的目的。亞甲藍/光化學法用于血漿病毒滅活在中國血站系統已得到廣泛采用，其效果與安全性已得到廣泛的驗證。

病毒滅活新鮮冰凍血漿富含多種凝血因子，特別是凝血因子Ⅷ，因此主要用于補充凝血因子特別是不穩定因子，起止凝血作用，如甲乙型血友病患者出血，大容量的血漿置換，大面積燒傷體液外滲等。冷沉淀含有大量的凝血因子Ⅷ、血管性血友病因子(vWF)、纖維蛋白原、纖維結合蛋白，因容量小，有效成分濃度高，可以快速輸入迅速提升體內的凝血因子水平，主要用于補充纖維蛋白原缺乏癥和甲型血友病患者出血[1-4]。有研究表明[5,6]經過病毒滅活后，滅活病毒新鮮冰凍血漿與冷沉淀各種有效成份均有不同程度的下降，但沒有統計學上的差異，本站制備的病毒滅活新鮮冰凍血漿總蛋白和凝血因子Ⅷ含量分別為57.7g/L、0.66IU/ml，冷沉淀的纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分別為154.4mg/袋、87.8IU/袋，符合國家標準。目前冷沉淀的制備，有的血站從病毒滅活新鮮冰凍血漿制備，有的血站認為從新鮮冰凍血漿制備可以獲得更高的質量指標，但是從安全輸血的角度來看，冷沉淀輸注量大，傳染病毒的風險顯然較高，因此采用病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀就顯得更為安全。

與病毒滅活新鮮冰凍血漿與冷沉淀相比較，冷上清其不穩定凝血因子、穩定凝血因子、vWF和血漿蛋白的含量都明顯較低[5-7]，本站冷上清的總蛋白含量為46.3g/L，低于國家標準≥50g/L的要求，因此不能把冷上清標識為普通冰凍血漿而應用于臨床。而英國血液學標準委員會輸血工作組于2004年發布的英國血液學標準委員會輸血特別委員會在《新鮮冰凍血漿、冷沉淀和冷上清使用指南》中亦指出：冷上清血漿去除了Ⅷ因子和纖維蛋白原，缺乏vWF大分子量多聚體，但含有vWF金屬蛋白酶[8]，血栓性微血管疾病(TTP)是由于患者體內vWF金屬蛋白酶活性的嚴重缺乏而致使vWF不能水解，從而形成超大vWF多聚體，后者可直接導致血小板聚集，很多臨床研究[9-11]也表明，冷上清在治療方面有確切的療效，如果能明確vWF金屬蛋白酶、vWF大分子量多聚體的質量標準，就能成為一種新型的成分血，從而能充分利用寶貴的血液資源。

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R457.1+4

A

1674-1129(2014)04-0432-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.023

2014-04-02；

2014-06-17)

楊南。