3394例女性患者宮頸人乳頭瘤病毒基因分型及臨床意義

董玉蘭，徐冉，陳龍山，馬亮

(景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西景德鎮(zhèn)333000)

·檢驗(yàn)與臨床·

3394例女性患者宮頸人乳頭瘤病毒基因分型及臨床意義

董玉蘭，徐冉，陳龍山，馬亮

(景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西景德鎮(zhèn)333000)

目的調(diào)查女性人群宮頸人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況及其亞型分布，為預(yù)防HPV感染和宮頸癌防治提供有價(jià)值的參考資料。方法采用DNA反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)(RDB)檢測(cè)江西省景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院婦科3394例宮頸HPV感染與分型情況，并對(duì)HPV亞型感染情況進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果3394例就診者中共檢出HPV陽(yáng)性者526例，陽(yáng)性率為15.50%。其中單一型感染率為12.20%，主要以HPV52(18.06%，95/526)、16(11.60%，61/526)和58型(9.70%，51/526)感染為主，雙重及多重感染率為3.30%，主要以HPV16、52、58、6、39型感染為主。結(jié)論女性宮頸HPV感染主要以52、16和58型感染為主，常見(jiàn)感染亞型既符合亞洲人群的分布規(guī)律，又有一定的區(qū)域性。推測(cè)包含HPV-52和58型的預(yù)防性疫苗會(huì)為女性提供更高幾率的保護(hù)。

人乳頭瘤病毒；基因分型；宮頸癌

宮頸癌(Cervical cancer，CC)是世界第二大常見(jiàn)婦科腫瘤。流行病學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)感染是導(dǎo)致浸潤(rùn)性宮頸癌發(fā)生的主要因素，約99.7%的宮頸癌患者都可檢測(cè)到HPV-DNA[1]。本研究采用基因分型檢測(cè)技術(shù)對(duì)江西省景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院3394例婦女HPV感染情況進(jìn)行調(diào)查分析，旨在了解本地區(qū)HPV感染現(xiàn)狀，為宮頸癌的防治提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象2011年1月至2013年12月來(lái)江西省景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院就診女性患者3394例，年齡18～87歲，平均41歲。患者均為初次進(jìn)行HPV核酸檢測(cè)，均無(wú)宮頸疾病治療與抗HPV藥物治療史。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)已婚或有性生活史，未妊娠，無(wú)子宮切除術(shù)和子宮頸手術(shù)史，無(wú)盆腔放射治療史。每一位研究對(duì)象均自愿接受HPV基因分型檢測(cè)并簽署知情同意書(shū)。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)凡有下列情況者予以剔除：(1)既往有宮頸疾病治療與抗HPV藥物治療史；(2)處于月經(jīng)期；(3)目前正在妊娠或者妊娠終止3個(gè)月內(nèi)；(4)不同意接受HPV篩查檢測(cè)者。

1.2 儀器與試劑HPV基因分型檢測(cè)試劑購(gòu)于中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，配有試劑盒Ⅰ和試劑盒Ⅱ，試劑盒Ⅰ主要為PCR反應(yīng)液，試劑盒Ⅱ?yàn)镠PV各亞型雜交膜條、雜交液、TMB等。PCR儀為ABI7300，雜交儀為電熱恒溫振蕩水槽(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本采集宮頸脫落細(xì)胞：在無(wú)菌條件下，以窺陰器暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸分泌物，然后使用專用的宮頸刷置于宮頸口，用宮頸刷伸入宮頸管內(nèi)2cm，旋轉(zhuǎn)數(shù)周并停留片刻后取出；將取樣后的宮頸刷放入裝有2ml細(xì)胞保存液(丹陽(yáng)市東勝塑料制品有限公司)的有蓋試管中,擰緊瓶蓋，作好標(biāo)記送檢驗(yàn)室檢測(cè)。

1.3.2 核酸提取將采集的標(biāo)本在震蕩器上充分震蕩混勻，吸取標(biāo)本轉(zhuǎn)至1.5ml離心管中，12000r/min離心5min；去上清，沉淀加入50μl DNA提取液充分混勻，恒溫處理(10±1)min；12000r/min離心5min，備用。

1.3.3 PCR擴(kuò)增HPV DNA提取上清5μl加入HPV核酸PCR擴(kuò)增體系組份，6000 r/min瞬時(shí)離心后，將各反應(yīng)管放入PCR儀，按下列條件擴(kuò)增：93℃3min；93℃40s，55℃40s，72℃40s，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min。

1.3.4 雜交及分析過(guò)程雜交、洗膜與顯色均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，雜交膜條上顯示藍(lán)色斑點(diǎn)為陽(yáng)性，多個(gè)斑點(diǎn)為多重感染。統(tǒng)計(jì)HPV感染率及基因型分布。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各年齡組HPV感染情況3394例送檢標(biāo)本中19種型別均可被檢出，HPV檢測(cè)陽(yáng)性526例，陽(yáng)性率為15.50%，其中單一感染414例，雙重及多重感染112例，感染率分別為12.20%和3.30%。從年齡分布上分析，30～34歲年齡段的患者HPV感染率最高，為18.91%(73/386)，其次為45～49歲的患者，感染率為16.64%(98/589)。在各年齡組中HPV感染的陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。各年齡組患者HPV感染情況見(jiàn)表1。

表表11 33339944例例宮宮頸頸標(biāo)標(biāo)本本各各年年齡齡組組HHPPVV感感染染情情況況

2.2 HPV單一感染情況414例單一感染患者主要以HPV52、16和58型感染為主，占50.00%，分別為95例(22.95%)、61例(14.73%)和51例(12.32%)。其中低危型(HPV6、11、43型)感染44例(44/414，10.63%)，高危型感染(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304型) 370例(370/414，89.37%)。

2.3 HPV雙重及多重感染情況112例雙重及多重感染中，雙重感染88例(88/112，78.57%)，三重及三重以上感染24例(24/112，21.43%)，感染類型主要以HPV16、52、58、6、39為主，分別為25例(22.32%)、18例(16.07%)、13例(11.61%)、12例(10.71%)、10例(8.93%)，在各種亞型感染中，HPV39、6、11、51主要以復(fù)合感染為主。HPV各型感染分布見(jiàn)表2。

3 討論

本研究結(jié)果顯示HPV-52、16和58型是女性的主要感染型別，這與Cliffeord GM等[1]報(bào)道的HPV-52和58型在亞洲人群中占有相對(duì)優(yōu)勢(shì)相吻合。而HPV-52居首位，超過(guò)HPV-16，提示HPV感染型別存在一定的地域性。目前已經(jīng)上市的針對(duì)高危型別HPV-16及HPV-18的預(yù)防性疫苗，對(duì)其它型別的交叉預(yù)防作用有限，推測(cè)第一代預(yù)防性疫苗的效果，需要考慮不同人群間HPV型別分布的差異。所以對(duì)于研發(fā)針對(duì)特定地區(qū)的第二代預(yù)防性疫苗，該地區(qū)HPV優(yōu)勢(shì)型別資料的獲得則具有指導(dǎo)意義。因此，從HPV感染的主要型別推斷包含HPV-52和58型的預(yù)防性疫苗會(huì)為本地區(qū)的女性提供更高幾率的保護(hù)。

表2 526例HPV陽(yáng)性各亞型感染情況[n(%)]

目前已經(jīng)有超過(guò)100種的HPV型別被檢測(cè)出，約40種型別與生殖器粘膜的感染有關(guān)[2]。本研究采用HPV-DNA-反向斑點(diǎn)膜雜交技術(shù)(RDB方法)對(duì)3394例女性患者進(jìn)行HPV核酸檢測(cè)和基因分型，低危型6、11、43和高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304型)共19種型別均可被檢測(cè)出。結(jié)果526例患者HPV陽(yáng)性，其陽(yáng)性率為15.50%，與高宇琳[3]報(bào)道的廣東東莞較為接近。但比方麗娟等[4]報(bào)道的江西地區(qū)要低很多，形成這一差異的主要原因是研究對(duì)象的不同。為了進(jìn)一步了解HPV在女性宮頸感染情況，本研究將患者按年齡分為不同組，得出各年齡組中HPV感染的陽(yáng)性率差別不大。與楊君等[5]報(bào)道的重慶地區(qū)及項(xiàng)靜婉等[6]報(bào)道的浙江沿海地區(qū)的HPV感染陽(yáng)性率的高峰出現(xiàn)在50歲以上女性人群不同，推測(cè)除存在地區(qū)間差異外，主要與年輕性活躍婦女HPV一過(guò)性感染及年齡因素致清除病毒能力弱所引起的持續(xù)性感染和潛在感染有關(guān)。

本研究中雙重及多重感染例數(shù)占總例數(shù)的21.29%(112/526)，提示女性人群多重感染率較高。雖然有關(guān)HPV的多重感染率與宮頸病變的關(guān)系目前還沒(méi)有確切的結(jié)論[7]，有研究認(rèn)為宮頸病變的嚴(yán)重程度與HPV感染的基因型多寡無(wú)關(guān)，而與感染HPV亞型的致病能力有關(guān)[8]。但也有研究認(rèn)為，HPV的多重感染者出現(xiàn)持續(xù)感染的風(fēng)險(xiǎn)更大[9]，而HPV的持續(xù)感染又是宮頸病變的原因。因此對(duì)于HPV多重感染者應(yīng)建議定期隨訪和追蹤。

針對(duì)性地廣泛開(kāi)展HPV核酸檢測(cè)及基因分型篩查可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)高危人群，并且可能有助于高危人乳頭瘤病毒陽(yáng)性婦女的危險(xiǎn)分層[10]，從而做到早期阻斷宮頸癌病變的進(jìn)一步發(fā)展，有效降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。

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R737.33,R446.62

A

1674-1129(2014)04-0440-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.027

2014-04-24；

2014-05-20)