新疆哈薩克族高血壓患者外周血T淋巴細胞亞群表達的變化

袁慶艷，張源明，張邱兵，章桂銘，郁 潔，朱 健

高血壓是一種常見的心血管疾病，高血壓及其并發癥嚴重威脅著人們健康，但其發病機制仍未完全明確。最新研究表明，高血壓是一種慢性低度炎性反應，同時提出T淋巴細胞介導的炎性反應參與了高血壓的發生發展[1-2]。近年對于高血壓與T淋巴細胞亞群表達變化的報道較少見。本研究通過觀察新疆哈薩克族高血壓患者外周血T淋巴細胞亞群表達的變化，探討高血壓發病機制與T淋巴細胞亞群的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年9月—2013年1月新疆醫科大學第一附屬醫院高血壓門診收治的未經降壓藥物治療的新疆哈薩克族高血壓患者20例作為高血壓組，高血壓診斷參考2005年世界衛生組織/國際高血壓學會(WHO/ISH)高血壓診斷標準：收縮壓≥140 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)和/或舒張壓≥90 mm Hg。排除標準：經實驗室和臨床檢查診斷為繼發性高血壓、風濕性心臟病、急性腦血管病、急慢性感染、先天性心臟病、糖尿病、全身免疫系統性疾病、重要臟器功能衰竭等疾病之一者。另選取同期在本院體檢健康的同民族者20例作為對照組。操作程序均經新疆醫科大學第一附屬醫院倫理委員會批準，受試者均簽署知情同意書。

表1 兩組基本資料比較

注：*為χ2值

表2 兩組T淋巴細胞亞群表達水平比較

1.2 試劑與儀器 PE-抗CD8，FITC-抗CD4，Percp-抗CD8三色標記的單克隆抗體(美國BD公司)，淋巴細胞分離液(美國SIGMA公司)，磷酸鹽緩沖液(PBS)(新西蘭Hyclone公司)，流式細胞儀(美國BD公司)，離心機(Multifuge X1R型，美國Thermo公司)。

1.3 T淋巴細胞分選 抽取受試者空腹外周靜脈血3 ml，使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，標本在采集8 h內測定。根據密度梯度離心法提取淋巴細胞，取淋巴細胞分離液3 ml加入離心管，然后將3 ml抗凝血與PBS緩沖液1∶1混勻后放入另一試管，小心加入呈有淋巴細胞分離液的離心管中，可見清晰的兩層液體界面。以1 600 r/min在離心機中離心20 min，離心半徑13.5 cm，離心管由上至下分為5層，第一層是淡粉色的血清層；第二層是白色絮狀樣外周血單核細胞層；第三層是透明的淋巴細胞分離液；第四層是粒細胞，又稱為棕黃層；第五層是紅細胞、血小板等。取第二層即淋巴細胞層，加入PBS洗滌3次，然后調整細胞密度為1×106/ml，加入20 μl三色標記的單克隆抗體，混勻后于4 ℃靜置30 min，PBS洗滌2次，再加入PBS 0.5 ml重懸，利用流式細胞儀測定T淋巴細胞亞群的表達。

2 結果

2.1 兩組基本資料比較 兩組性別、年齡、吸煙率、飲酒率、BMI、空腹血糖、CRP、TG、LDL-C、HDL-C比較，差異均無統計學意義(P>0.05，見表1)。

3 討論

近年來，高血壓與炎癥之間的相關性也越來越受到關注。Chas等[3]提出，炎性細胞激活參與了高血壓的發生發展，并且為高血壓的治療提出了新的研究方向。Schmid-Sch?nbein等[4]研究發現，自發性高血壓鼠體內存在著大量的T淋巴細胞浸潤。Dzielak[5]提出，當實驗鼠體內缺乏T淋巴細胞時，可降低甚至避免高血壓的發生。表明T淋巴細胞的激活與高血壓的發生有關。

有研究提示，淋巴細胞在高血壓和血管重構的病因和發生發展中扮演著重要角色，并指出T淋巴細胞在血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)形成過程中起關鍵作用，而AngⅡ又在高血壓的發生發展中起關鍵作用[6-9]。AngⅡ可促進炎性遞質的形成，進而刺激T淋巴細胞。炎癥與高血壓可通過血管氧化應激、內皮損傷、血管壁重構等機制相互影響和促進[10-11]。Madhur等[12]明確提出，高血壓患者白介素17(IL-17)血清水平明顯升高，并且其可進一步促進T淋巴細胞的活化增殖，IL-17作為一個危險因素促進了高血壓的發生發展。Navarro-Gonzalez等[13]提出，在高血壓合并糖尿病患者中，炎性遞質白介素6(IL-6)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)的血清水平是正常對照組的數倍。炎性遞質可促進高血壓的發生，甚至加速高血壓惡化，引起心腦腎等靶器官的損害[14]。

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