廣東蛇葡萄的化學成分研究

吳新星，黃日明，徐志防*，邱聲祥*

1中國科學院華南植物園，廣州 510650;2 中國科學院大學，北京 100049

廣東蛇葡萄［Ampelopsis cantoniensis (Hook.et Arn.)planch.］是葡萄科(Vitaceae)蛇葡萄屬植物，別名粵蛇葡萄，在民間常被稱作山葡萄、田浦茶、背帶藤、牛牽絲、山甜茶等，主要分布在江西、湖南、廣東、廣西和海南等地［1］。廣東蛇葡萄為民間常用藥材，特別在江西、兩廣地區其莖葉常作為“藤茶”的主要品種［另一種為同屬植物顯齒蛇葡萄(A.grossedentata)］飲用，具有清熱解毒、降血脂和降血壓等功效［2］。

目前，國內外對廣東蛇葡萄化學成分的研究鮮見報道，為進一步開發利用該植物的化學資源，作者對廣東蛇葡萄的化學成分進行了研究，從其藤莖乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部共分離得到13 個化合物，分別為白藜蘆醇(1)、5，7-二羥基香豆素(2)、山奈酚(3)、二氫木犀草素(4)、槲皮素(5)、二氫槲皮素(6)、沒食子酸(7)、楊梅素(8)、二氫楊梅素(9)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(10)、楊梅素-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(12)、表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(13)。除楊梅素和二氫楊梅素外，其余化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Eyela N-1100 旋轉蒸發儀、Eyela SB-1100 水浴鍋、Eyela Aspirator A-1000S 循環水真空泵(Tokyo Rikakai，日本);DLSB-5/20 低溫冷卻循環泵(鄭州長城科工貿有限公司，中國);WFH-203 三用紫外分析儀(上海精科實驗有限公司，中國);APCI 2000 LC-MS-MS(Applied Biosystems，美國);Bruker DRX-400、AV Ⅲ500 核磁共振儀(Bruker，瑞士)。

柱色譜硅膠(100～200 目、200～300 目，青島海洋化工廠，中國);柱層析反相硅膠RP-18(50 μm、70 μm，J.T.Baker，美國);柱層析凝膠為Sephadex LH-20(Amersham Biosciences，瑞典);其它有機溶劑和化學藥品均為國產分析純。

植物材料采自江西贛州大余縣，經中國科學院華南植物園王發國研究員鑒定為葡萄科蛇葡萄屬植物廣東蛇葡萄(Ampelopsis cantoniensis)，樣本保存于中國科學院華南植物園天然產物化學生物學實驗室。

2 提取與分離

取廣東蛇葡萄藤莖12 kg，充分粉碎，用95%的乙醇室溫浸泡3 次，每次約3 d，合并濾液減壓濃縮至浸膏約600 g。向浸膏中加入水形成懸濁液，然后用正己烷與乙酸乙酯萃取，回收溶劑后得正己烷部16 g、乙酸乙酯部380 g 以及水部210 g。

將乙酸乙酯部380 g 進行硅膠(200～300 目)柱層析，氯仿∶甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，得到7 個組分:Fr.1～Fr.7。

Fr.3 有大量灰黃色固體析出，溶出固體重結晶得到化合物1(1250 mg)，Fr.3 再過硅膠柱色譜，用正己烷∶丙酮(9∶1～0∶10)洗脫，得到3 個亞組分Fr.3.1～Fr.3.3。組分Fr.3.2 過反相硅膠柱色譜，用甲醇∶水(3∶7～10∶0)洗脫，得到化合物2(15 mg)和3(11 mg);組分Fr.3.3 過凝膠柱色譜(Sephadex LH-20)得到化合物4(27 mg)。

Fr.4 硅膠柱層析，用二氯甲烷∶甲醇(15∶1～7∶3)梯度洗脫，得到Fr.4.1～Fr.4.4 四個亞組分。組分Fr.4.1 繼續用硅膠柱色譜純化得到化合物5(13 mg);組分Fr.4.2 過Sephadex LH-20 得到化合物6(10 mg);組分Fr.4.3 過硅膠柱色譜，用二氯甲烷∶甲醇(18∶1)洗脫得到化合物7(2200 mg);組分Fr.4.4 用硅膠柱色譜純化后過Sephadex LH-20 得到化合物8(12 mg)和9(13 mg)。

組分Fr.5 過硅膠柱色譜用二氯甲烷∶甲醇(9∶1～1∶1)梯度洗脫，得到亞組分Fr.5.1、Fr.5.2 和Fr.5.3。組分Fr.5.2 過硅膠柱色譜，用氯仿∶甲醇(8∶1～6∶1)梯度洗脫，得到亞組分Fr.5.2.1 和Fr.5.2.2;組分Fr.5.2.1 過Sephadex LH-20 得到化合物10(51 mg)和12(10 mg);組分Fr.5.2.2 重結晶得到化合物11(334 mg)。

組分Fr.5.3 過硅膠柱色譜重結晶得到化合物13(8 mg)。

3 結構鑒定

化合物1 白色粉末;ESI-MS m/z:227(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.44(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，H-6')，7.05(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，6.92(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，6.87(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，H-5')，6.61(2H，d，J=2.0 Hz，H-2，H-6)，6.34(1H，t，J=2.0 Hz，H-4);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:159.6(C-3，C-5)，158.2(C-4')，140.8(C-1)，129.9(C-1')，129.0(C-8)，128.7(C-2'，C-6')，126.8(C-7)，116.3(C-3'，C-5')，105.6(C-2，C-6)，102.6(C-4)。以上數據與文獻［3］報道一致，故鑒定化合物1 為白藜蘆醇。

化合物2 白色粉末;ESI-MS m/z:177(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:8.02(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，6.36(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.28(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.05(1H，d，J=9.6 Hz，H-3);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:163.0(C-2)，161.7(C-7)，157.7(C-8a)，156.8(C-5)，140.0(C-4)，109.9(C-3)，102.9(C-6)，99.0(C-4a)，95.1(C-8)。以上數據與文獻［4］報道一致，故鑒定化合物2 為5，7-二羥基香豆素。

化合物3 黃色粉末;ESI-MS m/z:285(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:8.18(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，H-6')，7.02(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，H-5')，6.55(1H，s，H-8)，6.28(1H，s，H-6);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:176.7(C-4)，165.0(C-7)，162.2(C-5)，160.2(C-9)，157.7(C-4')，147.0(C-2)，132.9(C-3)，130.4(C-2'，C-6')，123.3(C-1')，116.2(C-3'，C-5')，104.1(C-10)，99.1(C-6)，94.4(C-8)。以上數據與文獻［5］報道一致，故鑒定化合物3 為山奈酚。

化合物4 黃色粉末;ESI-MS m/z:287(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.00(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，6.85(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.82(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6')，5.93(2H，s，H-6，H-8)，5.33(1H，dd，J=4.0，12.0 Hz，H-2)，3.12(1H，dd，J=12.0，16.0 Hz，H-3)，2.90(1H，dd，J=4.0，16.0 Hz，H-3);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:197.2(C-4)，167.8(C-7)，164.9(C-5)，164.1(C-9)，146.4(C-4')，146.0(C-3')，131.0(C-1')，118.9 (C-6')，115.9 (C-5')，114.5 (C-2')，102.8(C-10)，96.7(C-6)，95.8(C-8)，79.8(C-2)，43.2(C-3)。以上數據與文獻［4］報道一致，故鑒定化合物4 為二氫木犀草素。

化合物5 黃色針狀晶體;ESI-MS m/z:301(［M-H］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.84(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.71(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6')，7.00(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.54(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.27(1H，d，J=2.0 Hz，H-6);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:176.4(C-4)，164.9(C-7)，162.0(C-5)，157.7(C-9)，148.2(C-2)，146.8(C-4')，145.7(C-3')，136.6(C-3)，123.7(C-1')，121.4(C-6')，116.1(C-5')，115.6(C-2')，104.0(C-10)，99.0(C-6)，94.4(C-8)。以上數據與文獻［6］報道一致，故鑒定化合物5 為槲皮素。

化合物6 黃色粉末;ESI-MS m/z:303(［MH］-);1H NMR(C3D6O，400 MHZ)δ:7.07(1H，d，J=2.0，H-2')，6.90(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6')，6.86(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，5.99(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，5.94(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.01(1H，d，J=12.0 Hz，H-3)，4.61(1H，d，J=12.0 Hz，H-2);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:198.1(C-4)，168.0(C-7)，164.9(C-5)，164.0(C-9)，146.6(C-4')，145.8(C-3')，129.6(C-1')，120.6(C-6')，115.7(C-5')，115.6(C-2')，101.3(C-10)，97.0(C-6)，96.0(C-8)，84.4(C-2)，73.0(C-3)。以上數據與文獻［7］報道一致，故鑒定化學物6 為二氫槲皮素。

化合物7 無色針狀結晶;ESI-MS m/z:169(［M-H］-);1H NMR(C3D6O，400 MHz)δ:7.17(2H，s，H-2，H-6);13C NMR(C3D6O，100 MHz)δ:169.2(-COOH)，145.7(C-3，C-5)，138.8(C-4)，121.4(C-1)，110.1(C-2，C-6)。以上數據與文獻［6］報道一致，故鑒定化合物7 為沒食子酸。

化合物8 黃色粉末;ESI-MS m/z:317(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:7.36(2H，s，H-2'，H-6')，6.39(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6);13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:176.4(C-4)，165.0(C-7)，162.1(C-5)，157.6(C-9)，146.9(C-2)，146.2(C-3'，C-5')，135.9(C-3)，135.5(C-4')，121.7(C-1')，107.1(C-2'，C-6')，103.1(C-10)，97.8(C-6)，92.9(C-8)。以上數據與文獻［8］報道一致，故鑒定化合物8 為楊梅素。

化合物9 淡黃色粉末;ESI-MS m/z:319(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:6.57(2H，s，H-2'，H-6')，5.95(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，5.90(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，4.85(1H，d，J=11.4 Hz，H-3)，4.49(1H，d，J=11.4 Hz，H-2);13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:196.9(C-4)，167.3(C-7)，163.8(C-5)，163.0(C-9)，145.5(C-3'，C-5')，133.5(C-4')，127.7(C-1')，106.8(C-2'，C-6')，100.4(C-10)，96.0(C-6)，94.9(C-8)，83.8(C-2)，72.3(C-3)。以上數據與文獻［8］報道一致，故鑒定化合物9為二氫楊梅素。

化合物10 黃色粉末;ESI-MS m/z:447(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:7.34(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.29(1H，dd，J=8.3，2.1 Hz，H-6')，6.92(1H，d，J=8.3 Hz，H-5')，6.30(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.15(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.37(1H，d，J=1.5 Hz，H-1'')，4.29(1H，dd，J=3.3，1.5 Hz，H-2'')，3.82(dd，J=9.3，3.3 Hz，H-3'')，3.48～3.43(1H，m，H-5'')，3.43～3.38(1H，m，H-4'')，0.97(3H，d，J=8.0 Hz，H-6'');13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:178.1(C-4)，164.2(C-7)，161.6(C-5)，157.8(C-9)，157.0(C-2)，148.2(C-4')，144.8(C-3')，134.8(C-3)，121.7(C-1')，121.6(C-6')，115.7(C-5')，115.0(C-2')，104.5(C-10)，102.1(C-1'')，98.5(C-6)，93.5(C-8)，71.9(C-4'')，70.8(C-3'')，70.6(C-2'')，70.5(C-5'')，16.3(C-6'')。以上數據與文獻［9］報道一致，故鑒定化合物10 為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物11 黃色粉末;ESI-MS m/z:463(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:6.97(2H，s，H-2'，H-6')，6.39(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.23(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，5.33(1H，d，J=1.7 Hz，H-1'')，4.24(1H，dd，J=3.3，1.7 Hz，H-2'')，3.81(1H，dd，J=9.5，3.3 Hz，H-3'')，3.54(1H，dq，J=9.5，6.3 Hz，H-5'')，3.33(1H，m，H-4'')，0.97(3H，d，J=8.0 Hz，H-6'');13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:178.3(C-4)，164.4(C-7)，161.8(C-5)，158.1(C-9)，157.1(C-2)，145.4(C-3'，5')，136.5(C-4')，135.0(C-3)，120.5(C-1')，108.2(C-2'，6')，104.5(C-10)，102.2(C-1'')，98.4(C-6)，93.3(C-8)，71.9(C-4'')，70.7(C-3'')，70.6(C-2'')，70.4(C-5'')，16.3(C-6'')。以上數據與文獻［10］報道一致，故鑒定化合物11 為楊梅素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物12 黃色粉末;ESI-MS m/z:431(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:7.77(2H，d，J=8.7 Hz，H-2'，6')，6.95(2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，H-5')，6.37(1H，d，J=1.3 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=1.3Hz，H-6)，5.39(1H，d，J=1.5 Hz，H-1'')，4.25(1H，dd，J=3.1，1.6 Hz，H-2'')，3.75(1H，m，H-3'')，3.35(1H，m，H-5'')，3.33(1H，m，H-4'')，0.94(3H，d，J=6.3Hz，H-6'');13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:178.2(C-4)，164.4(C-7)，161.8(C-5)，160.1(C-9)，157.9(C-4')，157.1(C-2)，134.9(C-3)，130.6(C-2'，6')，121.3(C-1')，115.3(C-3'，5')，104.5(C-10)，102.1(C-1'')，98.5(C-6)，93.4(C-8)，71.8(C-4'')，70.7(C-3'')，70.6(C-2'')，70.4(C-5'')，16.3(C-6'')。以上數據與文獻［11］報道一致，故鑒定化合物12 為山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物13 白色粉末;ESI-MS m/z:441(［MH］-);1H NMR(CD3OD，500 MHz)δ:6.97(2H，s，H-2''，H-6'')，6.95(1H，d，J=2.1 Hz，H-2')，6.83(1H，dd，J=8.3，2.1 Hz，H-6')，6.72(1H，d，J=8.3 Hz，H-5')，5.99(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，5.98(1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，5.55(1H，m，H-3)，5.05(1H，s，H-2)，3.02(1H，dd，J=17.3，4.6 Hz，H-4a)，2.87(1H，dd，J=17.3，2.2 Hz，H-4b);13C NMR(CD3OD，125 MHz)δ:166.2(C=O)，156.5(C-9)，156.5(C-5)，155.9(C-7)，144.9(C-3''，5'')，144.6(C-3')，144.5(C-4')，138.4(C-4'')，130.1(C-1')，120.1(C-1'')，118.0(C-6')，114.6(C-5')，113.7(C-2')，108.8(C-2''，6'')，98.0(C-10)，95.1(C-8)，94.5(C-6)，77.3(C-2)，68.6(C-3)，25.5(C-4)。以上數據與文獻［12］報道一致，故鑒定化合物13 為表兒茶素-3-O-沒食子酸酯。

1 Editorial Board of Flora of China，Chinese Academy of Sciences(中國科學院中國植物志編委會).Flora of China(中國植物志).Beijing:Science Press，1998.Vol 48(2)，49-50.

2 Zhan Y(戰宇)，Ning ZX(寧正祥)，Zheng C(鄭成).Study on the purification and crystallization shape of Ampleopsis flavones.J Food Sci Technol(食品科學)，2006，3:34-36.

3 Xu JY(胥俊越)，Chen QC(陳全成)，Lin T(林挺)，et al.Chemical constituents of Vitis thunbergii var.Taiwaniana.Chin Tradit Herb Drugs(中草藥)，2013，44:660-664.

4 Chengdu Institute of Biology，Chinese Academy of Sciences(中國科學院成都生物研究所).13C NMR Analysis of Natural Products(天然產物核磁共振碳譜分析).Kunming:Yunnan Science and Technology Press，2006.463.

5 Huang HB(黃洪波)，Bao WF(包文芳)，Yang FF(楊芳芳)，et al.A study on chemical constituents of Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz..J Shenyang Pharm Univ(沈陽藥科大學學報)，2001，18:266-267.

6 Zhou RG(周榮光)，Yang ZX(楊兆祥)，Wang J(王金)，et al.Chemical constituents from leaves of Mangifera persiciformis.Nat Prod Res Dev(天然產物研究與開發)，2012，24:1217-1219.

7 Ba YY(巴寅穎)，Liu QY(劉倩穎)，Shi RB(石任兵)，et al.Studies on flavonoids from Euonyus alatus.Chin Tradit Herb Drugs(中草藥)，2012，43:242-246.

8 Wu LH(吳龍火)，Zhang J(張劍).The chemical constituents of Hovenia dulcis Thunb..Lishizhen Med Mater Res(時珍國醫國藥)，2013，24:1028-1029.

9 Yang SH(楊書慧)，Tian X(田瑄).Chemical components of Rhododendron concinnum.Acta Bot Boreal-Occident Sin(西北植物學報)，2007，27:364-370.

10 Cao H(曹暉)，Xiao YH(肖艷華)，Wang SY(王紹云)，et al.Chemical constituents of leaves and roots of Vernicia fordii.J Southwest China Normal Univ(西南師范大學學報)，2008，33:30-32.

11 Dong L(董禮)，Li L(李磊)，Liao ZH(廖志華)，et al.Chemical constituents in roots of Rhodiola bupleuroides.Acta Bot Boreal-Occident Sin(西北植物學報)，2007，27:2564-2567.

12 Zhang Q(張倩)，Rena K(熱娜卡斯木)，Wang XM(王曉梅)，et al.Studies on the chemical constituents of flavonids in the inflorescences of Cynomorium songaricum Rupr..J Xinjiang Med Univ(新疆醫科大學學報)，2007，30:466-468.