HPLC法測定胃復(fù)春片中人參皂苷Rb1的含量

張美娟

摘 要：目的 采用高效液相色譜法測定胃復(fù)春片中人參皂苷Rb1的含量。方法 采用YMC-Pack Polymer C18（250×4.6mm 5？滋m）色譜柱；乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）為流動相；檢測波長為203nm。結(jié)果 人參皂苷Rb1在1～20μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系， 人參皂苷Rb1的平均回收率為99.5%。結(jié)論 本方法是一種簡便、準確、安全的測定胃復(fù)春片中人參皂苷Rb1含量的方法。

關(guān)鍵詞：胃復(fù)春片；人參皂苷Rb1；高效液相色譜法

胃復(fù)春片由紅參、香茶菜、枳殼（麩炒）組成。 胃復(fù)春片具有健脾益氣、活血解毒等功效。胃復(fù)春片用于治療胃癌、癌前期病變及胃癌手術(shù)后輔助治療，慢性萎縮性胃炎、其它消化系統(tǒng)腫瘤的輔助治療。胃復(fù)春片能減輕致癌物質(zhì)N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）對大鼠胃粘膜的損害，降低胃癌癌前期病變的發(fā)病率。長期服用胃復(fù)春片可抑制幽門螺旋桿菌；抑制醋酸致小鼠扭體次數(shù)；增加大鼠胃液分泌量。紅參是參的熟用品，具有大補元氣、益血、養(yǎng)心安神、強心、健胃、鎮(zhèn)靜、復(fù)脈固脫、益氣攝血等功效。紅參具有提高腦、體力活動能力、抗疲勞、抗腫瘤、抗衰老、抗輻射等作用。紅參可用于體虛欲脫、氣短喘促、氣不攝血、崩漏下血、心力衰竭、心原性休克自汗肢泠、精神倦怠、食少吐瀉、氣虛作喘或久咳等。人參皂苷具有抗腫瘤、抗衰老、抗氧化、抗病毒、美容等藥理作用[1-8]。文章用高效液相色譜法對胃復(fù)春片中的人參皂苷Rb1的含量進行了測定。

1 儀器與試劑

QT3120K脫氣可調(diào)型超聲波清洗器（天津市瑞普電子儀器公司）；TH-W50GC多功能全自動純水機（武漢市天虹儀表有限責(zé)任公司）；RV10 數(shù)顯型立式旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海東戈姆科貿(mào)發(fā)展有限公司）；JULABO 實驗室溫度控制器（優(yōu)萊博技術(shù)（北京）有限公司）；CC-100分析型色譜柱溫箱（成都納杰科技有限公司）； Smartline高效液相色譜系統(tǒng)（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）；AUX220 分析天平（上海東戈姆科貿(mào)發(fā)展有限公司）。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 液相色譜條件

依據(jù)查閱文獻[9-11]及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下：色譜柱為YMC-Pack Polymer C18（250×4.6mm 5？滋m）；乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）為流動相；檢測波長為203nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2 提取方法確定

取胃復(fù)春片，研碎，分成三份置索氏提取器中，分別加三氯甲烷20ml，加熱回流3小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，分別精密加入水飽和正丁醇50ml，密塞，放置2小時，分別超聲處理30分鐘、40分鐘、50分鐘，濾過，濾液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至5毫升，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。結(jié)果表明超聲處理30分鐘、40分鐘、50分鐘人參皂苷Rb1含量無明顯差異，所以選擇超聲處理30分鐘。

2.3 供試品溶液的制備

取胃復(fù)春片，研碎，置索氏提取器中，加三氯甲烷20ml，加熱回流3小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，精密加入水飽和正丁醇50ml，密塞，放置2小時，超聲處理30分鐘，濾過，濾液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至5毫升，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Rb1對照品約1mg，置100mL容量瓶中，用流動相超聲波振蕩溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含人參皂苷Rb1 10μg）。

2.5 陰性干擾試驗

香茶菜、枳殼（麩炒）分別加水煎煮兩次，香茶菜每次3小時，枳殼（麩炒）每次1小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度1.13-1.18（20）的清膏，加淀粉、硬脂酸鎂混合均勻，制粒，干燥，壓片，即得陰性制劑。將陰性制劑研碎，置索氏提取器中，加三氯甲烷20ml，加熱回流3小時，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，精密加入水飽和正丁醇50ml，密塞，放置2小時，超聲處理30分鐘，濾過，濾液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至5毫升，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，按色譜條件測定。結(jié)果表明：在選定條件下測得的陰性液吸收曲線在與人參皂苷Rb1相同保留時間處不存在吸收峰，說明此方法具有較強的專屬性。

2.6 標準曲線的制備

制備濃度為1、2、4、8、12、16、20μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標，進樣濃度（μg·mL-1）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，人參皂苷Rb1對照品在1～20μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗

精密吸取人參皂苷Rb1對照品溶液10μL重復(fù)進樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.66%。結(jié)果表明，本實驗精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗

分別稱取同批胃復(fù)春片樣品6份，分別制備成供試品溶液，按色譜條件測定含量，并計算樣品的RSD值為0.88%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別在0，2，4，8，10h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進行測定，供試品人參皂苷Rb1峰面積積分值的RSD為0.53%。結(jié)果表明人參皂苷Rb1至少在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的人參皂苷Rb1對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.5%，RSD為0.75%。endprint

2.11 耐用性試驗

用SPOLAR C18 HPLC Column（4.6×250mm 5μm）液相色譜柱、CAPCELL PAK C18 MGⅡ（4.6×250mm 5？滋m）液相色譜柱測定同一樣品，峰形及柱效均良好，表明不同的色譜柱測定時，色譜行為無顯著性差異。

2.12 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定胃復(fù)春片三批樣品中人參皂苷Rb1的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為0.27μg·片-1、0.29μg·片-1、0.28μg·片-1。

3 結(jié)束語

分別考察乙腈-水-磷酸（50：50：0.01），乙腈-水-磷酸（20：80：0.01），甲醇-乙腈-0.05%磷酸水溶液（15：25：60）不同比例的流動相，結(jié)果以乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-水-磷酸（20：80：0.01）為流動相。本方法是一種簡便、準確、安全的測定胃復(fù)春片含量的方法。胃復(fù)春片中人參皂苷Rb1的含量不少于0.26μg·片-1。

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