石河子地區規?；i場主要疫病血清流行病學調查

楊 莉，歐 都，龔子桓，齊亞銀

（石河子大學動物科技學院 傳染病實驗室，新疆 石河子 832000)

隨著養豬業的持續性發展，養殖方式也由傳統的散養逐步轉變為規?；s化的養殖方式。但由于規?；B殖的飼養密度較高，豬群活動量少而導致抗病力下降。在規?；B殖場的疾病防治當中傳染病的防治顯得尤為重要，傳染病不僅會造成重大的經濟損失，又有著波及范圍廣、撲滅困難、診斷與治療復雜、 隱性帶毒、易復發等特點[1]。同時新的病毒感染性疫病日漸增多，一些傳染病的免疫失敗時有發生，引起獸醫工作者極大的關注。豬藍耳病、豬瘟以及豬O型口蹄疫是目前對中國養豬業危害最大的3種重要傳染病。而通過抗體水平監測數據，了解豬場免疫抗體和感染抗體水平，實時監測群體免疫狀況，可為豬場制定更為科學合理的免疫程序提供依據，減少養殖戶的損失。

1 材料和試劑

1.1 血清樣品

來自A、B、C、D 4個規?；i場豬只的620份血清均做了豬瘟檢測；對其中587份血清又做了豬藍耳病檢測；對620份血清中344份做了口蹄疫檢測。無菌采集豬前腔靜脈血液樣品3～5 mL，室溫靜置3～6 h待析出血清，取上清置于滅菌的離心管內，逐份進行編號，置于-20 ℃保存備用。

1.2 主要器材與儀器設備

采血器、微量移液器、1次性微量移液器使用的吸頭、蒸餾水或去離子水、溫箱、TGL-16G高速臺式離心機、DNM-9602型酶標分析儀。

1.3 試劑

ELISA試劑：豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒；豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒；豬O型口蹄疫ELISA抗體檢測試劑盒均由武漢科前動物生物制品有限責任公司提供。

ELISA試劑盒包括：96孔抗原包被板（2塊）、血清稀釋板（2塊）、20倍濃縮洗滌液（30 mL）、樣品稀釋液（50 mL）、陽性對照血清（1 mL）、陰性對照血清（1 mL）、羊抗豬酶標二抗（20 mL）、底物液A（10 mL）、底物液B（10 mL）、終止液（10 mL）、說明書 1 份。

2 方法與結果判定

2.1 操作步驟

2.1.1 加樣 取抗原包被板，將稀釋好的樣品血清和對照血清分別按照100μL對應從稀釋板轉入抗原包被板中，待檢樣品每份加一個孔，對照樣品每份加2個孔，在振蕩器上微微振勻孔中的樣品，然后置37 ℃溫育30 min。

2.1.2 洗板 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置3 min倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。

2.1.3 加酶 每孔加羊抗豬酶標二抗100 μL，置37 ℃再溫育30 min。

2.1.4 洗滌 做法同2.1.2。

2.1.5 顯色 每個孔分別加入底物A和B（50μL）混勻，室溫避光顯色10 min。

2.1.6 終止反應 加終止液50μL利用酶標儀檢測。

2.2 判斷標準

豬瘟：樣品OD630nm值＞0.35，判為抗體陽性；樣品OD630nm值＜0.35，判為抗體陰性。

豬藍耳?。簶悠稫Q≥20，判為藍耳病抗體陽性，若KQ＜20，判為藍耳病抗體陰性。

豬口蹄疫病毒：樣品OD630nm值＞0.4，判為抗體陽性，樣品OD630nm值≤0.4，判為抗體陰性。

3 結果與分析

3.1 豬藍耳病毒抗體檢測結果與分析

4個規?；i場共送檢620份血清樣品中有587份血清檢測了豬藍耳病毒抗體水平，總陽性率為88.42%（詳見表1）。不同年齡豬藍耳病毒抗體檢測結果存在差異（詳見表2）。

3.2 豬瘟抗體檢測結果與分析

4個規?；i場共送檢620份血清檢測豬瘟抗體水平，總陽性率為81.77%（詳見表3）。不同年齡豬瘟抗體檢測結果不同（詳見表4）。

3.3 豬O型口蹄疫抗體檢測結果與分析

對石河子地區共4個規模豬場送檢的344份血清樣品進行豬O型口蹄疫抗體檢測發現，4個豬場抗體陽性率從84%～93%不等（詳見表5）。不同年齡段的豬只血清抗體陽性率在81%～100%之間（詳見表6）。

4 討論

疫苗接種被規模化豬場作為防控傳染病的主要方式，是通過免疫使易感豬變為對傳染病具有抵抗力的非易感豬。只有在接種疫苗后機體產生相應的免疫應答后才會起到預防傳染病的作用，而免疫應答是一種復雜的生物學過程，易受多種因素的影響。因此想要達到理想的免疫效果，需要監測豬群抗體水平的消長，掌握豬群免疫狀態，判斷動物對某傳染病的抵抗力或某疫苗的免疫效果至關重要[2]，抗體水平的高低可直接反映出免疫效果以及未免疫的豬群是否存在野毒感染。

豬藍耳病是由一種動脈炎病毒引發豬呼吸道疾病和繁殖障礙的傳染病[3]。我國于1995年首次在北京郊區豬群發現有該病的流行[4]，近年來該病傳播范圍日漸廣泛，成為危害養豬業的重要疫病之一。從抗體檢測結果中不難看出，按照抗體陽性率大于75%為豬群免疫合格，石河子地區A豬場的豬藍耳病的免疫效果差，防疫體系脆弱，極易受藍耳病病毒強度攻擊，從而暴發藍耳病。因豬藍耳病是以病豬和帶毒豬為主要傳染源，傳播途徑以胎盤、精液等垂直傳播和水平傳播。而母豬的抗體陽性率較低，導致其哺乳仔豬的血清抗體陽性率也相對較低，應加強對藍耳病的積極預防。因此建議在哺乳母豬的生產周期再加一次藍耳病疫苗的免疫，實行全進全出制，嚴格隔離、檢疫、消毒工作，逐步淘汰陽性豬。

表1 4個規?；B豬場送檢血清的豬藍耳病毒抗體陽性率

表2 不同年齡豬藍耳病毒抗體檢測結果

表3 4個規?；B豬場送檢血清的豬瘟抗體陽性率

表4 不同年齡豬瘟抗體檢測結果

表5 4個規?；B豬場送檢血清的豬O型口蹄疫抗體陽性率

表6 不同年齡豬口蹄疫抗體檢測結果

我國豬瘟的流行現狀是長期持續存在并呈多點散發，臨床上呈現了典型豬瘟的病豬數量減少，而非典型豬瘟病例增多以及免疫失敗現象，其主要特征是持續感染及隱性感染和免疫耐受，豬死亡率下降，嚴重地影響了我國豬瘟的防控效果[5]。而通過對豬瘟血清抗體檢測結果說明豬場的抗體陽性率參差不齊，A豬場的疫苗免疫效價較低，容易導致豬群處于易感狀態不足以抵抗強毒侵襲而發病或成為隱性帶毒者，威脅易感豬群。同時不同年齡段的豬群豬瘟血清抗體水平差異較大，公豬的抗體陽性率最高，育肥豬的血清抗體陽性率最低，引起這一現象的原因可能是由于公豬的抗體水平的高低直接影響到母豬的配種，進而影響仔豬的生長發育及其對病原的抵抗力，因此豬場對公豬尤為關注。而育肥豬的飼養時間較短且重復利用率低，因此養殖場對其不夠重視。

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄動物共患的急性、熱性、接觸性傳染病[6]，由于其血清型多，傳播迅速且傳播途徑廣，國際獸疫局(OIE)一直將本病列為發病必須報告的A類動物疫病名單之首。ELISA試驗結果顯示各豬場的抗體陽性率均較高，說明石河子地區規?；i場的口蹄疫免疫效果較好；保育豬的抗體陽性率較低，應及時進行免疫補充。

從4個豬場的3種傳染病的檢測結果來看，A豬場整體的免疫效果不理想，而B豬場3種傳染病的抗體陽性率均達到90%以上，可能原因是由于A豬場的免疫程序不科學、免疫時機不適宜，不能產生良好的免疫應答而導致的免疫失敗。建議A豬場調整免疫程序同時加強豬場的隔離消毒，減少環境中的病毒及加強飼養管理。3種傳染病中豬瘟的抗體陽性率最低，口蹄疫的血清抗體陽性率最高，說明石河子地區養殖場應加強對豬瘟的預防接種，防止豬瘟的暴發。

[1] 陳溥言.獸醫傳染病學[M]. 第5 版.北京：中國農業出版社，2006.

[2] 楊漢春.動物免疫學[M].第2版.北京：中國農業大學出版社,2003：255-258.

[3] 吳清明.獸醫傳染病學[M].北京：中國農業大學出版社,2001.

[4] 郭寶清,陳章水,劉文興,等.從疑似PRRS流產胎兒分離PRRSV的研究[J].中國畜禽傳染病,1996,18(2)：1-41．

[5] 李智麗,馬靜云,曾喜多,等.高致病性豬藍耳病綜合防控體會[J].中國動物保健, 2011(11): 44-47.

[6] 蔡寶祥.家畜傳染病學[M].北京：中國農業出版社,2001：149-156.