水蛭提取液對(duì)大鼠上皮組織炎癥的效果觀察

聶云天 沈 雷 何 軍 孫 權(quán)△

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院2012 級(jí)臨床專業(yè)，黑龍江齊齊哈爾 161006;2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院解剖教研室,黑龍江齊齊哈爾 161006

皮膚是復(fù)層扁平上皮組織附著在人體的表面，起到免疫、保護(hù)等作用，當(dāng)皮膚受到燒燙傷、外力挫傷、真菌、細(xì)菌感染等致病因素就會(huì)發(fā)生相應(yīng)的炎癥反應(yīng)。目前臨床治療皮膚炎癥有兩種方法：抗生素治療或者使用激素類藥物。長期使用抗生素類藥物治療皮炎，可以導(dǎo)致細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生耐藥性[1-2]；長期使用激素類藥物治療皮炎時(shí)會(huì)減少中性粒細(xì)胞的趨化作用，同時(shí)還能降低Langer hans cell 的功能，從而使皮膚局部免疫功能下降；使皮膚屏障功能受損，造成皮膚對(duì)激素產(chǎn)生依賴[3]。對(duì)于治療皮膚炎癥應(yīng)該尋求更加安全有效的辦法，本實(shí)驗(yàn)探究水蛭提取液對(duì)實(shí)驗(yàn)性上皮組織炎癥的抗炎作用，為治療皮膚炎癥奠定研究基礎(chǔ)，開辟新的治療思路。

1 材料與方法

1.1 材料

20g 寬體金線蛭（江蘇峰瑞達(dá)股份有限公司）；30只重量20～22g，雄性，年齡1歲，生理情況各項(xiàng)都正常，健康狀況良好的昆明小白鼠（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心）；金黃色葡萄球菌，菌號(hào)[ATCC29213]（南京便診生物科技有限公司）；分析純級(jí)聚乙二醇（益康藥業(yè)有限公司）；醫(yī)用紅霉素軟膏（重慶科瑞制藥有限公司），金黃色葡萄球菌檢測試紙（廣州健侖生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 藥品處理 將金黃色葡萄球菌配置成濃度為9×103CFu/mL 的細(xì)菌溶液備用，取20g 寬體金線蛭研磨成粉狀，用200 mL 聚乙二醇進(jìn)行有效成分萃取[4],配置成水蛭聚乙二醇溶液含水蛭有效成分濃度為10%[5]。將萃取好的溶液進(jìn)行常溫靜置備用。

1.2.2 皮膚感染模型 小鼠背部正中線處備皮，消毒。無菌手術(shù)剪刀行5.0mm×5.0mm“□”全層皮膚缺損處理[6]，無菌棉簽蘸取濃度為9×103CFu/mL 的金黃色葡萄球菌涂抹昆明小白鼠傷口[7]，術(shù)后小鼠放置在無菌環(huán)境，2 h 后傷口出現(xiàn)炎癥，用金黃色葡萄球菌檢測試紙對(duì)傷口組織進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)試紙檢測呈陽性，證明此感染為金黃色葡萄球菌造成[8]。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組 30只昆明小鼠傷口感染模型，隨機(jī)分為A、B、C3組，每組10只。其中，A、B、C 三組均為雄性，且年齡1歲，傷口情況相差無異且三組小白鼠平均體重分別為205、210、215g,差異不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。小白鼠A組為水蛭提取液組：無菌棉簽蘸取濃度為10%的水蛭聚乙二醇溶液對(duì)小白鼠傷口表面進(jìn)行均勻涂抹，面積為36mm2；B組為陽性對(duì)照組，傷口用紅霉素軟膏涂抹[9],紅霉素軟膏涂抹量為1mm2，以覆蓋傷口破潰表面形成薄膜為準(zhǔn)[10]。C組為陰性對(duì)照組，小鼠傷口用凡士林涂抹,凡士林涂抹量以覆蓋破潰表面形成薄膜為準(zhǔn)[11]。

表1 三組在治療前后紅腫高度、面積及結(jié)痂面積變化比較

1.2.4 觀察指標(biāo) 自進(jìn)行藥物涂抹后間隔2 h 觀察一次，最終8 h后觀察各組情況并記錄數(shù)據(jù)。以紅腫的高度，紅腫的面積，結(jié)痂的面積數(shù)值為參照依據(jù)。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)方法 應(yīng)用SPSS 19.0 進(jìn)行處理計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間的比較采用方差分析。

2 結(jié)果

各組在治療前后紅腫高度、面積、結(jié)痂面積比較如表1、表2所示。

3 討論

水蛭在中醫(yī)里面是一味傳統(tǒng)的中藥，水蛭始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主逐惡血,瘀血,月閉,破血瘕積聚,無子,利水道。”其味咸、苦,性平,歸肝經(jīng),具有破血通經(jīng)、逐瘀消癥之功,主治血瘀經(jīng)閉、癥瘕痞塊、中風(fēng)偏癱、跌打損傷等[12]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明水蛭含有多肽類、肝素、抗血栓素、氨基酸以及鎮(zhèn)痛酶、抗炎酶和溶血酶等主要成分,其中分離出的活性成分可分為兩大類：一類是直接作用于凝血系統(tǒng)的成分,包括凝血酶抑制劑,以及其它抑制血液凝固的物質(zhì),如水蛭素(Hirudin)、菲牛蛭素(Bufrudin)、森林山蛭素(HaenBdin)等[13];第二類是其它蛋白酶抑制劑及其它活性成分,如溶纖素(Hementerin)、待可森(Decorsin)、抗炎酶等其中抗炎酶是是水蛭提取液能具有產(chǎn)生抗炎作用的原因[14]。水蛭還具有抗凝、抗栓、改善血流變學(xué)、抗炎、抗腫瘤、降血脂等作用[15];李明等人在水蛭臨床研究綜述液也總結(jié)出水蛭以及提取液有廣泛的臨床要用價(jià)值，在水蛭抗炎方面有很大的探究研究空間[16]。

表2 各組實(shí)驗(yàn)治療后對(duì)比表（n=10）

在本研究的動(dòng)物炎癥模型中采用的是金黃色葡萄球菌,此細(xì)菌感染皮膚之后炎癥反應(yīng)明顯，便于觀察[17]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中看出有顯著性差異且P＜0.05。實(shí)驗(yàn)組A 與對(duì)照組B 相互比較，紅腫高度均有所下降，紅腫的面積均有所減小，且紅腫高度下降與紅腫面積減小幅度相當(dāng)，水蛭提取液與紅霉素軟膏抗炎能力相仿。將實(shí)驗(yàn)組A 的結(jié)果與對(duì)照組C 相互比較，對(duì)照組C 紅腫的高度與紅腫的面積均沒有明顯變化，而實(shí)驗(yàn)組A 的紅腫高度與紅腫面積都有所下降，水蛭提取液與凡士林相對(duì)比顯示了水蛭提取液對(duì)小鼠皮膚炎癥具有一定的抗炎的作用，究其原因，可能與以下原因有關(guān)。

①水蛭提取液含有抗炎酶，是產(chǎn)生抗炎作用的主要原因[18]，當(dāng)水蛭提取液涂抹在傷口處時(shí)會(huì)改善傷口皮膚下層組織的通透性，改善傷口的營養(yǎng)供應(yīng)，曾強(qiáng)傷口的免疫能力，達(dá)到快速抗炎的作用。②水蛭提取液涂抹后還可以改善傷口皮膚下層的血液流變，增加對(duì)炎癥傷口皮膚的血液供應(yīng)，釋放大量白細(xì)胞、漿細(xì)胞、IL-6、IL-8 等抗炎細(xì)胞或因子，從而產(chǎn)生抗炎作用。③水蛭提取液的抗炎酶可以降解細(xì)菌的細(xì)胞壁，改變細(xì)菌等致病生物細(xì)胞的通透性，阻止細(xì)菌細(xì)胞之間的信號(hào)傳遞，抑制細(xì)菌等對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而達(dá)到滅菌抗炎的作用。④水蛭提取液的其他抗炎成分可以抑制細(xì)菌內(nèi)部DNA 復(fù)制，阻止細(xì)菌的增殖，從而達(dá)到滅菌抗炎的作用。此外，水蛭提取液附著在傷口表面，形成膜化作用，保護(hù)皮膚傷口不被其他致病因素的侵襲。

通過本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，水蛭提取液的確可以在皮膚炎癥中發(fā)揮抗炎的重要作用，但是具體機(jī)制還有待深入探索，以便為治療皮膚炎癥發(fā)揮積極作用。

[1]李顯志,張麗.細(xì)菌抗生素耐藥性：耐藥機(jī)制與控制策略[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,34(5)：445-455.

[2]楊凡.關(guān)于抗生素耐藥性的探討[J].中國保健營養(yǎng),2013,2(4)：1896-1897.

[3]劉丹丹,孫立.激素依賴性皮炎的研究現(xiàn)狀[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,34(5)：832-835.

[4]汪多仁.聚乙二醇的應(yīng)用與合成進(jìn)展[J].化學(xué)工業(yè)與工程技術(shù),2000,21(5)：21-23.

[5]萬明.寬體金線蛭鮮品和干品提取物體外抗凝血活性研究[J].中南民族大學(xué)學(xué)報(bào),2013,31(1)：48-50.

[6]王國江,顧軍.小鼠背部變應(yīng)性接觸性皮炎模型的建立[J].中國職業(yè)醫(yī)學(xué),2004,32(1)：17-18.

[7]魏領(lǐng)地,苗培.動(dòng)物皮膚炎癥病理模型的建立及五黃膏抗感染作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥新藥與臨床藥理,1995，6(l)：40-42.

[8]王元萍,王元婷.金黃色葡萄球菌實(shí)驗(yàn)室檢測方法的分類與進(jìn)展[J].中國城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生,2011(6)：109-111.

[9]李凌凌,張部昌.紅霉素抗菌作用及細(xì)菌產(chǎn)生紅霉素抗性的機(jī)制[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊,2004,25(1)：12-15.

[10]陳柱花.紅霉素軟膏聯(lián)合維生素E 針外用治療潰瘍期褥瘡的療效觀察[J].中國醫(yī)藥指南，2013,11(1)：502-503.

[11]孫慶華,楊文東.濕潤燒傷膏與凡士林在治療體表膿腫切除術(shù)后創(chuàng)面的臨床療效[J].中國燒傷創(chuàng)瘍雜志,2011(2)：57-59.

[12]王江橋.金黃色葡萄球菌感染的特征及其耐藥性[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī),2007，14（4）：990-991.

[13]Khelifa E,Kaya G,Laffitte E.Cutaneous pseudolymphomas after leech therapy[J].J Dermatol,2013,5(10)：1342-1346.

[14]潘賀.中藥水蛭的活性成分及藥理作用研究概況[J].中醫(yī)藥信息,2006,2(1)：20-22.

[15]李克明.水蛭的藥理研究概況[J].中醫(yī)研究,2007,20(2)：62-64.

[16]李明.水蛭的臨床應(yīng)用綜述[J].中醫(yī)研究,2006,19(8)：62-65.

[17]劉玉梅,章軍.水蛭化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2011,18 (12)：108-109.

[18]楊洪雁,杜智恒,白秀娟.水蛭藥理作用的研究進(jìn)展[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012(3)：76-78.