水蛭提取液對大鼠上皮組織炎癥的效果觀察

聶云天 沈 雷 何 軍 孫 權△

1.齊齊哈爾醫學院2012 級臨床專業，黑龍江齊齊哈爾 161006;2.齊齊哈爾醫學院解剖教研室,黑龍江齊齊哈爾 161006

皮膚是復層扁平上皮組織附著在人體的表面，起到免疫、保護等作用，當皮膚受到燒燙傷、外力挫傷、真菌、細菌感染等致病因素就會發生相應的炎癥反應。目前臨床治療皮膚炎癥有兩種方法：抗生素治療或者使用激素類藥物。長期使用抗生素類藥物治療皮炎，可以導致細菌會產生耐藥性[1-2]；長期使用激素類藥物治療皮炎時會減少中性粒細胞的趨化作用，同時還能降低Langer hans cell 的功能，從而使皮膚局部免疫功能下降；使皮膚屏障功能受損，造成皮膚對激素產生依賴[3]。對于治療皮膚炎癥應該尋求更加安全有效的辦法，本實驗探究水蛭提取液對實驗性上皮組織炎癥的抗炎作用，為治療皮膚炎癥奠定研究基礎，開辟新的治療思路。

1 材料與方法

1.1 材料

20g 寬體金線蛭（江蘇峰瑞達股份有限公司）；30只重量20～22g，雄性，年齡1歲，生理情況各項都正常，健康狀況良好的昆明小白鼠（齊齊哈爾醫學院動物實驗中心）；金黃色葡萄球菌，菌號[ATCC29213]（南京便診生物科技有限公司）；分析純級聚乙二醇（益康藥業有限公司）；醫用紅霉素軟膏（重慶科瑞制藥有限公司），金黃色葡萄球菌檢測試紙（廣州健侖生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 藥品處理 將金黃色葡萄球菌配置成濃度為9×103CFu/mL 的細菌溶液備用，取20g 寬體金線蛭研磨成粉狀，用200 mL 聚乙二醇進行有效成分萃取[4],配置成水蛭聚乙二醇溶液含水蛭有效成分濃度為10%[5]。將萃取好的溶液進行常溫靜置備用。

1.2.2 皮膚感染模型 小鼠背部正中線處備皮，消毒。無菌手術剪刀行5.0mm×5.0mm“□”全層皮膚缺損處理[6]，無菌棉簽蘸取濃度為9×103CFu/mL 的金黃色葡萄球菌涂抹昆明小白鼠傷口[7]，術后小鼠放置在無菌環境，2 h 后傷口出現炎癥，用金黃色葡萄球菌檢測試紙對傷口組織進行檢測，發現試紙檢測呈陽性，證明此感染為金黃色葡萄球菌造成[8]。

1.2.3 實驗分組 30只昆明小鼠傷口感染模型，隨機分為A、B、C3組，每組10只。其中，A、B、C 三組均為雄性，且年齡1歲，傷口情況相差無異且三組小白鼠平均體重分別為205、210、215g,差異不明顯，無統計學意義，具有可比性。小白鼠A組為水蛭提取液組：無菌棉簽蘸取濃度為10%的水蛭聚乙二醇溶液對小白鼠傷口表面進行均勻涂抹，面積為36mm2；B組為陽性對照組，傷口用紅霉素軟膏涂抹[9],紅霉素軟膏涂抹量為1mm2，以覆蓋傷口破潰表面形成薄膜為準[10]。C組為陰性對照組，小鼠傷口用凡士林涂抹,凡士林涂抹量以覆蓋破潰表面形成薄膜為準[11]。

表1 三組在治療前后紅腫高度、面積及結痂面積變化比較

1.2.4 觀察指標 自進行藥物涂抹后間隔2 h 觀察一次，最終8 h后觀察各組情況并記錄數據。以紅腫的高度，紅腫的面積，結痂的面積數值為參照依據。

1.2.5 統計方法 應用SPSS 19.0 進行處理計量資料以均數±標準差（）表示，多組間的比較采用方差分析。

2 結果

各組在治療前后紅腫高度、面積、結痂面積比較如表1、表2所示。

3 討論

水蛭在中醫里面是一味傳統的中藥，水蛭始載于《神農本草經》：“主逐惡血,瘀血,月閉,破血瘕積聚,無子,利水道?！逼湮断?、苦,性平,歸肝經,具有破血通經、逐瘀消癥之功,主治血瘀經閉、癥瘕痞塊、中風偏癱、跌打損傷等[12]?，F代醫學研究證明水蛭含有多肽類、肝素、抗血栓素、氨基酸以及鎮痛酶、抗炎酶和溶血酶等主要成分,其中分離出的活性成分可分為兩大類：一類是直接作用于凝血系統的成分,包括凝血酶抑制劑,以及其它抑制血液凝固的物質,如水蛭素(Hirudin)、菲牛蛭素(Bufrudin)、森林山蛭素(HaenBdin)等[13];第二類是其它蛋白酶抑制劑及其它活性成分,如溶纖素(Hementerin)、待可森(Decorsin)、抗炎酶等其中抗炎酶是是水蛭提取液能具有產生抗炎作用的原因[14]。水蛭還具有抗凝、抗栓、改善血流變學、抗炎、抗腫瘤、降血脂等作用[15];李明等人在水蛭臨床研究綜述液也總結出水蛭以及提取液有廣泛的臨床要用價值，在水蛭抗炎方面有很大的探究研究空間[16]。

表2 各組實驗治療后對比表（n=10）

在本研究的動物炎癥模型中采用的是金黃色葡萄球菌,此細菌感染皮膚之后炎癥反應明顯，便于觀察[17]。從實驗結果中看出有顯著性差異且P＜0.05。實驗組A 與對照組B 相互比較，紅腫高度均有所下降，紅腫的面積均有所減小，且紅腫高度下降與紅腫面積減小幅度相當，水蛭提取液與紅霉素軟膏抗炎能力相仿。將實驗組A 的結果與對照組C 相互比較，對照組C 紅腫的高度與紅腫的面積均沒有明顯變化，而實驗組A 的紅腫高度與紅腫面積都有所下降，水蛭提取液與凡士林相對比顯示了水蛭提取液對小鼠皮膚炎癥具有一定的抗炎的作用，究其原因，可能與以下原因有關。

①水蛭提取液含有抗炎酶，是產生抗炎作用的主要原因[18]，當水蛭提取液涂抹在傷口處時會改善傷口皮膚下層組織的通透性，改善傷口的營養供應，曾強傷口的免疫能力，達到快速抗炎的作用。②水蛭提取液涂抹后還可以改善傷口皮膚下層的血液流變，增加對炎癥傷口皮膚的血液供應，釋放大量白細胞、漿細胞、IL-6、IL-8 等抗炎細胞或因子，從而產生抗炎作用。③水蛭提取液的抗炎酶可以降解細菌的細胞壁，改變細菌等致病生物細胞的通透性，阻止細菌細胞之間的信號傳遞，抑制細菌等對營養物質的吸收，從而達到滅菌抗炎的作用。④水蛭提取液的其他抗炎成分可以抑制細菌內部DNA 復制，阻止細菌的增殖，從而達到滅菌抗炎的作用。此外，水蛭提取液附著在傷口表面，形成膜化作用，保護皮膚傷口不被其他致病因素的侵襲。

通過本實驗發現，水蛭提取液的確可以在皮膚炎癥中發揮抗炎的重要作用，但是具體機制還有待深入探索，以便為治療皮膚炎癥發揮積極作用。

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