抗-HCV陽性反應血清中HCV核酸檢測結果分析

臧希卉

吉林省疾病控制中心消毒所，吉林長春 130000

為了防止丙型肝炎的交叉感染發生，往往在對抗-HCV 指標進行篩查的時候，都會采用靈敏度較高的試劑來完成篩選。目前，為了快速地縮短運用抗-HCV 進行檢驗的“窗口期”，很多機構已將HCV 核酸的檢測方法使用于對抗-HCV 的篩選[1]。為了探討與分析抗-HCV 陽性反應中，受檢者血清中的HCV 核酸的檢測狀況，本研究選取部分受檢者抗-HCV 陽性的血清，進行HCV 核酸指標的相關檢測和研究，取得了較好的效果，現進行如下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本所從2011年6月—2013年5月期間篩選出血清抗-HCV 陽性反應標本一共152 份，其中，同時使用兩種ELISA 的試劑而進行檢測呈陽性反應的血清一共50 份，使用單種試劑而通過檢測呈陽性反應的血清一共102 份，主要包括使用試劑2 檢測出的陽性(含使用試劑1 檢測出陰性)標本共有59 份；使用試劑1 來檢測出的陽性(包含使用試劑2 檢測出陰性)標本共有43 份。

1.2 檢測方法

使用HCV 核酸擴增酶免檢測試劑盒（由華美生物制造）、抗-HCV ELISA 檢測試劑和基因擴增儀以及高速冷凍離心機等。抗HCV 陽性的標本采用受檢者的單份血清進行HCV 核酸擴增酶免的檢測，然后依照說明書來進行操作，首先在采集血液以后，于6 h 內進行血清的分離，放置于零下70℃的冰箱內進行冷凍保存，在實驗之前解凍后，取每份樣品100μL 的放到樣品管內，再用酶免樣品處理液和乙醇（濃度為75%）來處理血清樣品，棄上清以后快速進行烘干；然后將1 其在樣品管內冷卻，并加入反轉錄酶與反轉錄混合物以后進行孵育，另外加入尿嘧啶DNA 糖基化酶和PCR擴增反應的混合物，迅速在擴增儀內進行擴增處理[2]；之后把擴增的產物轉移到捕捉板內，同時加入雜交反應液后，在溫度是37℃的環境中，進行孵育、洗板并顯色，最后再用酶標儀來確認檢測的結果，然后分析。

1.3 統計學原理

本文研究所得的數據全部采用軟件SPSS 18.0 進行統計學進行處理，兩組之間的計數資料對比采用χ2的檢驗，全部計量資料用均數加減標準差進行表示，以P＜0.05，表明差異具有統計學意義。

2 結果

通過本次試驗中收集的50 份通過2 種ELISA 試劑來檢測抗-HCV 呈陽性反應血清。其中，共有7 份抗-HCA 呈陽性受檢者，運用2 種試劑進行檢測都顯示出強陽性(S/CO 大于10)，其HCV核酸檢測也全部顯示為陽性（比例為100%），其它43 份抗-HCA陽性受檢者，經檢測均顯示為較弱的陽性(S/CO 小于5)，其中HCV 核酸檢測顯示陽性的共20 份（占46.5%）。

另外，通過運用1 種試劑來檢測抗-HCV 陽性血清，都顯示出較弱陽性(S/CO 小于5)，該HCV 核酸檢測的陽性率也比較低（11例，占10.8%），說明抗-HCV 陽性反應血清中的HCV 核酸的檢出率和S/ CO 數值的高低存在相關性。同時，運用2 種試劑檢測抗-HCV 陽性率要比運用1 種試劑進行檢測抗HCV 陽性率，二者對比，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同試劑抗-HCA 陽性血清核酸擴增酶免檢結果對比

3 討論

本次試驗中收集的50 份抗HCA 陽性中，有7 份抗HCA 呈陽性受檢者，運用2 種試劑進行檢測都顯示出強陽性(S/CO 大于10)，其HCV 核酸檢測也全部顯示為陽性（比例為100%），因此可以證明，若抗HCV 呈陽性并且HCV 核酸檢測也呈現陽性，則可以確定已經是HCV 感染；但是，如果抗-HCV 呈現陽性，為何HCV 核酸檢測結果卻呈現陰性？ 究其原因則值得進行深入的研究和分析。

許志遠等[3]研究證明，即使血清當中僅存在有1 個病毒核酸分子，那么經過PCR 擴增以后也可以被檢測出來，但是在實際的操作中，由于檢測出血清中的病毒核酸如果含量真是太少，常常會導致在提取核酸時無法實現。同樣，對于PCR 試劑的檢測靈敏度和樣本及擴增體系中，均很有可能存在著某類抑制病毒核酸擴增效果的影響因素等，從而影響到病毒核酸的總檢出率與準確性[4]。在本組檢測中，一部分抗HCV 呈弱陽性，反應血清的HCV 核酸在進行檢測時卻呈陰性，43 份抗HCA 陽性受檢者經檢測均顯示為較弱的陽性(S/CO 小于5)，其中HCV 核酸檢測顯示陽性的共20 份（占46.5%）。其余為陰性，這些極有可能和上述相關因素密切相關。

林洪鏗等[5]有關研究文獻報道，只有55%的抗HCV 陽性者可以檢測出HCV RNA，此時病毒極有可能會自發性的丟失。通過對本組資料進行分析表明，仍然有抗HCA 受檢者，在通過使用兩種試劑情況下，進行的抗-HCV 檢測呈現陽性，但實在通過HCV 核酸檢測時卻呈現陰性，其中很大的原因的，就是抗HCV 檢驗篩查結果屬于假陽性，而在現實中，受檢者根本并沒有被感染HCV；另外的原因則可能是：HCV 的病毒血癥已經完全消退或者是病毒的基因產生了變異等。另據閔志軍等[6]有關文獻表明，抗-HCV呈陽性的受檢者，在通過HCV 的核酸檢測雖然呈現陰性，但是仍然會使他人受到交叉感染。

以上研究表明，通過針對HCV 的血液指標篩查，不應當僅僅參照HCV 核酸而進行檢測，而應當取代為抗-HCV 的指標檢測，而且兩者必須密切結合，這樣才能有效地縮短患者HCV 感染的“窗口期”，以此來保證供血和受血者的安全與健康。

[1]歐陽玲,李雪麗,黃呈輝,等.對HBsag 和抗-HCV ELISA 篩查陽性獻血者進行確認試驗分析[J].中國現代醫學雜志，20119(12)：177-178.

[2]任芙蓉，龔曉燕，李晶晶，等.獻血員丙型肝炎病毒抗體酶免疫法檢測試劑的測定值與其真陽性的相關性[J].中華肝臟病雜志，2012,13(7)：255.

[3]許志遠,李冬妹,冷嬋,等.對國產及進口抗-HCV 酶聯免疫試劑實驗室檢測效果的探討[J].中國輸血雜志，2010,16(2)：104.

[4]Operska EA,Mosley JW.HCV viral load in anti-HCV-positive donors and terout come in their recipients[J].Transfasion，2011,18(3)：750-752.

[5]林洪鏗,江偉梅,周曉真,等.獻血者ELISA 抗-HCV 篩查反應性強度與RIBA 確證陽性的相關性研究[J].中國輸血雜志，2010,20(8)：83-85.

[6]閔志軍,張力超,張建偉,等.試劑盒平衡時間對抗-HCV 檢測結果的影響因素分析[J].臨床血液學雜志：輸血與檢驗版，2010,11(6)：128.