放化療對IRM—2小鼠不同腫瘤模型治療作用的研究

王忻妍等

[摘要] 目的 觀察IRM-2小鼠的腫瘤易感性，探討放化療對IRM-2小鼠不同腫瘤模型的抑制作用。 方法 利用120只IRM-2近交系小鼠，分別接種肺腺癌（LA795）、宮頸癌（U14）、黑色素瘤（B16）、肝癌（HepA）細(xì)胞，造模24 h后，將荷瘤鼠隨機分為對照組、照射組、環(huán)磷酰胺組，每組各10只。照射組于第4天開始進行1 Gy全身照射，每日1次，連續(xù)5 d，共照射5次。環(huán)磷酰胺組（25 mg/kg）腹腔注射隔日1次，0.2 mL/只，共4次。對照組注射相同體積生理鹽水。小鼠于第12天處死，解剖瘤塊、胸腺和脾臟稱重，骨髓有核細(xì)胞計數(shù)，計算抑瘤率、胸腺及脾重指數(shù)。 結(jié)果 ①IRM-2小鼠皮下移植4種腫瘤的成瘤率均為100%。②環(huán)磷酰胺組、照射組LA795的抑瘤率分別為（31.8±27.3）%、（68.2±18.2）%，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。環(huán)磷酰胺組、照射組瘤重[（0.07±0.04）、（0.15±0.06）g]均低于對照組[（0.22±0.15）g]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；環(huán)磷酰胺組瘤重低于照射組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。③環(huán)磷酰胺組、照射組U14的抑瘤率分別為（37.3±3.5）%、（70.8±8.2）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。環(huán)磷酰胺組瘤重[（0.50±0.14）g]低于對照組[（1.71±0.60）g]及照射組[（1.14±0.06）g]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。④環(huán)磷酰胺組、照射組對黑色素瘤B16的抑瘤率分別為（17.7±15.8）%、（63.6±15.9）%，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。環(huán)磷酰胺組脾重指數(shù)、瘤重與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）；環(huán)磷酰胺組瘤重[（0.72±0.31）g]低于照射組[（1.63±0.51）g]，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。⑤環(huán)磷酰胺組、照射組對肝癌HepA的抑瘤率分別為（31.5±21.7）%、（69.6±25.0）%，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。環(huán)磷酰胺組、照射組瘤重[（0.28±0.23）、（0.63±0.20）g]均低于對照組[（0.92±0.16）g]，差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）；環(huán)磷酰胺組瘤重低于照射組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。 結(jié)論 IRM-2近交系小鼠對肺腺癌、宮頸癌、黑色素和肝癌均能有效接種，放療對接種腫瘤有一定殺傷作用，環(huán)磷酰胺能有效抑制IRM-2小鼠腫瘤的生長，療效更佳。

[關(guān)鍵詞] 腫瘤；動物模型；放射療法；化學(xué)藥物療法

[中圖分類號] R730.5 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）01（a）-0007-04

近年來，惡性腫瘤發(fā)病率逐年上升，全國腫瘤病死率為180.54/10萬，每年因癌癥死亡病例達(dá)270萬例，腫瘤成為當(dāng)前研究熱點[1]。腫瘤動物模型作為研究腫瘤必備的有效實驗材料和工具。現(xiàn)根據(jù)不同研究目的已經(jīng)建立了各種小鼠腫瘤模型，從而獲得相關(guān)疾病的模型，但理想的腫瘤模型有待進一步開發(fā)。移植性小鼠腫瘤模型因其建模周期短、重復(fù)性好，動物模型生物特性穩(wěn)定，成為國內(nèi)外常用動物腫瘤模型建模方法之一[2-4]。IRM-2小鼠是中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所自主培育的近交系小鼠[5-7]。本實驗觀察在IRM-2小鼠能否建立腫瘤發(fā)病率較高的肺腺癌、宮頸癌、黑色素、肝癌模型，并在建立不同小鼠腫瘤模型的基礎(chǔ)上，比較放、化療對不同荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用，為放、化療對惡性腫瘤的治療及其研究提供有實用意義的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 動物和細(xì)胞系

IRM-2近交系小鼠120只，由北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所提供，合格證號SCXK（津）2005-0001；雌雄兼用，體重22～24 g。B16黑色素瘤細(xì)胞由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供，肺腺癌（LA795）、宮頸癌（U14）、肝癌（HepA）細(xì)胞由天津市藥品檢驗所提供。

1.2 儀器

BX51，奧林巴斯顯微鏡（BX51日本），電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。137Cs γ射線照射源，加拿大原子能有限公司，型號USD，Autocell40，照射劑量為1 Gy，劑量率分別為0.84 Gy/min。

1.3 試劑

環(huán)磷酰胺為上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品（批號040805），生理鹽水配制劑量為25 mg/kg。

1.4 腫瘤模型的建立

無菌條件下分別取出LA795、B16、U14、HepA瘤塊，加磷酸鹽緩沖液（PBS）制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×107/mL，取0.2 mL接種于每只小鼠右側(cè)腋窩下。

1.5 分組及處理

建模24 h后，將接種不同腫瘤細(xì)胞的荷瘤小鼠隨機分為對照組、照射組、環(huán)磷酰胺組，每組各10只。環(huán)磷酰胺組隔日給藥1次，0.2 mL/只，共4次，照射組于接種后第4天進行全身1 Gy照射，每日1次，連續(xù)5 d。對照組給予相同體積生理鹽水注射。

1.6 檢測指標(biāo)

實驗第12天，稱重后處死小鼠，取瘤體稱重，計算抑瘤率，抑瘤率（%）=（1-治療組平均瘤質(zhì)量/對照組平均瘤質(zhì)量）×100%。取單側(cè)股骨，用1 mL白細(xì)胞稀釋液沖洗骨髓腔，制成懸液，全自動血液分析儀計數(shù)。取胸腺、脾臟稱重，分別計算胸腺指數(shù)（mg/g）和脾重指數(shù)（mg/g）。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 11.5對數(shù)據(jù)進行分析，正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 放化療對LA795的抑瘤作用結(jié)果

環(huán)磷酰胺組、照射組LA795的抑瘤率分別為（31.8±27.3）%、（68.2±18.2）%，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。環(huán)磷酰胺組、照射組瘤重均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；環(huán)磷酰胺組瘤重低于照射組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。見表1。

2.2 放化療對U14的抑瘤作用結(jié)果

環(huán)磷酰胺組、照射組U14的抑瘤率分別為（37.3±3.5）%、（70.8±8.2）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。環(huán)磷酰胺組瘤重低于對照組及照射組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表2。

2.3 放化療對黑色素瘤B16的抑瘤作用結(jié)果

環(huán)磷酰胺組、照射組對黑色素瘤B16的抑瘤率分別為（17.7±15.8）%、（63.64±15.90）%，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。環(huán)磷酰胺組脾重指數(shù)、瘤重與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）；環(huán)磷酰胺組瘤重低于照射組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。見表3。

2.4 放化療對肝癌HepA的抑瘤作用結(jié)果

環(huán)磷酰胺組、照射組對肝癌HepA的抑瘤率分別為（31.5±21.7）%、（69.6±25.0）%，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。環(huán)磷酰胺組、照射組瘤重均低于對照組，差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）；環(huán)磷酰胺組瘤重低于照射組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。見表4。

3 討論

移植性腫瘤模型是目前抗癌藥物、藥效學(xué)研究中使用最多的一類動物腫瘤模型。不同小鼠對不同腫瘤的易感性存在顯著差異。目前肺腺癌、肝癌、宮頸癌等發(fā)病率較高，而惡性黑色素瘤是一類起源于神經(jīng)嵴、由黑色母細(xì)胞轉(zhuǎn)變而來、主要發(fā)生在皮膚的惡性腫瘤，發(fā)病率為全身惡性腫瘤的1%～2%[8-11]。本研究選用了較常用的自發(fā)型和移植型腫瘤，建立了肺腺癌（LA795）、宮頸癌（U14）、黑色素瘤（B16）、肝癌（HepA）腫瘤模型，成瘤率均為100%，與筆者前期的實驗結(jié)果相符合。

由于鼠的品系和瘤源不同，對放、化療的敏感性也存在差異，但均可用來驗證放化療的有效性。因此在成功建立了IRM-2 4種荷瘤小鼠后，觀察放、化療（環(huán)磷酰胺）對這4種腫瘤的治療作用。治療方案均模擬臨床，放療持續(xù)5次小劑量照射，而化療使用環(huán)磷酰胺[2，12]。研究結(jié)果表現(xiàn)為放、化療對4種腫瘤均有抑制作用，從結(jié)果可以看出，放療對U14組抑瘤效果較好，抑瘤率為（37.3±3.5）%，對LA795、HepA、B16的抑瘤率分別為（31.8±27.3）%、（31.5±21.7）%、（17.7±15.8）%。環(huán)磷酰胺組對U14抑瘤效果最好，抑瘤率為（70.8±8.2）%，對LA795、B16、HepA的抑瘤率分別為（68.2±18.2）%、（63.6±15.9）%、（69.6±25.0）%，環(huán)磷酰胺抑瘤率要高于照射組抑瘤率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05），放療、化療對U14的抑瘤率最高。放療、化療對B16的抑瘤率最低。因此，本研究所建立的IRM-2小鼠移植型腫瘤模型可以較好地反映放、化療的治療效果，并因為能夠同時接種多種不同腫瘤，為評價同一治療方法對不同類型腫瘤的療效提供了新的模型。

[參考文獻]

[1] 赫捷，趙平，陳萬青.中國腫瘤登記年報（2012）[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2012：1-2.

[2] 王月英，吳紅英，李德冠，等.小鼠不同腫瘤模型對放化療敏感性的研究[J].國際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志，2012，36（5）：289-292.

[3] 蔡學(xué)瑜，陳志哲.同種移植性小鼠白血病模型的建立及應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)綜述，2007，13（16）：1222-1224.

[4] 蒲才秀，常淑芳，孫江川，等.2種人卵巢癌裸鼠移植瘤模型的生物學(xué)特性比較研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011， 36（11）：1343-1346.

[5] 王月英，周繼文，王汝勤.IRM-2近交系小鼠的生殖生長特性[J].中國實驗動物學(xué)報，2001，9（2）：103-106.

[6] 王月英，周繼文，穆傳杰.IRM-2近交系小鼠腫瘤模型的建立[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2003，13（4）：246-248.

[7] 吳紅英，王月英，李德冠.IRM-2小鼠移植性腫瘤模型的生物學(xué)特性[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（12）：42-44.

[8] Chen W，Zheng R，Zhang S，et al. Report of incidence and mortality in China cancer registries，2009 [J]. Chin J Cancer Res，2013，25（1）：10-21.

[9] Forner A，Llovet JM，Bruix J. Hepatocellular carcinoma [J]. Lancet，2012，379（9822）：1245-1255.

[10] Merrill RM，Harris JD，Merrill JG. Differences in incidence rates and early detection of cancer among non-Hispanic and Hispanic Whites in the United States [J]. Ethn Dis，2013，23（3）：349-355.

[11] Ingraffea A. Melanoma [J]. Facial Plast Surg Clin North Am，2013，21（1）：33-42.

[12] 曹建忠，羅京偉，徐國鎮(zhèn).紅細(xì)胞生成素在腫瘤放療中的研究現(xiàn)狀[J].中華放射腫瘤學(xué)雜志，2006，15（4）：267-269.

（收稿日期：2013-09-26 本文編輯：李繼翔）