懸浮固化-分散液-液微萃取-氣相色譜法測定蔬菜中6種擬除蟲菊酯類農藥

高青珍，馬智玲，周千渝，張延國，林 桓，劉新燕，李凌云，劉 肅

（中國農業科學院蔬菜花卉研究所，農業部蔬菜品質監督檢驗測試中心，北京100081）

擬除蟲菊酯類農藥自20世紀70年代被研發出來后，因具有殺蟲廣譜、高效、生物降解性等特點，在農業生產中被廣泛使用，使用量僅次于有機磷類農藥[1]。但此類農藥也有一定蓄積性，長期接觸會引起慢性疾病，部分農藥還有致癌、致畸、致突變作用，對哺乳動物神經、心血管、免疫系統有一定毒性[2]。而且隨著近年來蔬菜水果中農藥殘留問題日益凸顯，國家對農殘方面監測力度加大，因此有必要建立快速、靈敏檢測蔬菜水果中擬除蟲菊酯類農藥的分析方法。

Anastassiades等[3]提出了一種新的農藥殘留檢測技術QuEChERS方法。相較于已有的樣品前處理技術如固相萃取（SPE）、液-液萃取（LLE）、固相微萃取（SPME）、超聲輔助提取（MAE）等，QuEChERS方法具有快速、簡單、便宜、安全等特點，已被國內外許多分析機構采用，美國和歐盟分別建立了適合酸堿敏感農藥的官方分析方法AOAC2007.01[4]和EN15662[5]。

分散液-液微萃取技術（dispersive liquid-liquid m icroextraction，DLLME）具有富集倍數高，簡便快捷等優點，已用于農藥殘留的檢測。由于易受到基質干擾物的影響，目前該方法只用于簡單基質如水樣[6]和果汁[7]等簡單基質的農藥殘留的提取富集。

Huang和Feng等[8]提出一種新型DLLME微萃取技術，懸浮固化-分散液液微萃取（dispersive liquidliquid m icroextraction-Solidification of floating organic drop，DLLME-SFO），萃取劑為不含氯元素的長鏈脂肪烴或脂肪醇（如十一醇、十二醇、十六烷等）避免了常用高毒含氯溶劑（氯苯、氯仿和四氯化碳等）危害環境和人體健康，而且當檢測器為氣相色譜（ECD），最終濃縮溶液無需進行溶劑轉換。

因菊酯類農藥在氣相色譜（ECD）上響應值比較低，本文旨在將QuEChERS和DLLME-SFO方法結合起來，以達到快速凈化和有效濃縮的目的。該方法簡便、快速、靈敏度高，滿足對幾種蔬菜基質中6種擬除蟲菊酯類農藥的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

氯氟氰菊酯CAS 68359-37-5、氯菊酯CAS 52645-53-1、氟氰戊菊酯CAS 70124-77-5、氰戊菊酯CAS 51630-58-1、氟胺氰菊酯CAS 102851-06-9、溴氰菊酯CAS 52918-63-5 Dr1EhrenstorferGmbH和Sigma公司；乙腈、丙酮 色譜純；冰醋酸、無水醋酸、氯化鈉 分析純；無水硫酸鎂 分析純，用前在500℃馬弗爐內烘5h，冷卻后取出放入干燥器備用；十六烷色譜純GC，純度＞99.0%；PSA粉、ODS C18粉、石墨炭黑粉 購于Agela Technologies公司。

RTX-1MS型毛細管柱 美國安捷倫公司；GC-2010型氣相色譜 島津公司；高速離心機 美國Thermo公司；IKAT18型均質器 德國IKA公司；WH-2微型漩渦混合儀 上海瀘西分析儀廠有限公司；AB204/01型分析天平 梅特勒-托利多（上海）有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：RTX-1MS毛細管柱（30m×0.25mm×0.5μm）；載氣：氮氣（純度99.999%）；電子捕獲檢測器溫度：320℃；恒壓模式，壓力：94.4kPa；尾吹氣流量：50m L/m in；進樣口溫度：250℃；進樣量：1μL；進樣方式：不分流進樣；1m in后打開分流閥和隔墊吹掃閥；隔墊吹掃流量：3m L/m in；柱溫箱升溫程序：初始溫度150℃（保持1m in），以10℃/m in升溫至180℃，再以3℃/m in升溫至220℃（保持10m in）；再以5℃/m in升溫至290℃（保持12m in）。

1.2.2 標準溶液的配制 將1000mg/L的單標標準儲備液用正己烷稀釋，配制成各農藥組分質量濃度均為10.00mg/L的混合工作溶液，于-18℃冰箱中保存待用（兩周后需重新配制）。使用時稀釋至一定濃度進行實驗條件的優化。

1.3 樣品前處理

精確稱取勻漿后的蔬菜樣品10.00g（精確至0.01g）于50m L聚四氟乙烯離心管中，加入1g NaCl及10.0m L 1%乙酸乙腈溶液，均質1m in，靜置，待乙腈層與水層分離后加入3g MgSO4和1g醋酸鈉，振蕩混勻。以5000r/min高速離心5min，取2.00m L上清液轉入裝有100mg PSA、100mg C18的5m L離心管中，渦旋振蕩1m in后取上清液1.00m L于含5m L NaCl（加入量為1.25g）溶液的15m L具塞的尖底離心試管中，再加入40μL十六烷，渦旋混勻1min。后于5000r/min下離心3min使之分層；將離心試管置于冰浴中浸泡5m in，此時十六烷凝固呈環狀凝固壁上，除去下層水層，待萃取劑溶解后，5000r/min高速離心2min，此時殘余的水即可和萃取劑分開，吸取上層萃取劑，供GC-ECD分析。

1.4 樣品分析

樣品分析時，在相同色譜條件下，測定五個不同濃度的標準溶液和待測樣品，目標物以保留時間定性，用外標法定量。

2 結果與討論

2.1 QuEChERS方法條件的優化

2.1.1 提取劑的選擇 在農藥殘留樣品前處理過程中，常用的提取劑有乙腈、乙酸乙酯和丙酮等。由于丙酮提取液中色素含量比較多，乙酸乙酯易提取蠟質、脂肪等非極性干擾物，且大部分極性農藥不易轉移到有機相中。因此本實驗選擇乙腈作為提取劑。由于一些農藥容易受基質pH的影響，本文比較了乙腈和1%的乙酸乙腈作為萃取劑時的差異。由圖1可知，1%的乙酸乙腈提取效果較好，因此選擇1%乙酸乙腈作為提取劑。

圖1 不同提取溶劑對提取效果的影響Fig.1 Infulunce of the differentextraction solventon the extraction efficiency

2.1.2 萃取劑的選擇 在懸浮固相液-液萃取中，萃取劑需滿足的條件為在水中的溶解度低，對待測目標物有較強的提取能力。本實驗比較了十一醇、十二醇、十六烷這三種萃取劑的差異，從圖2中可以看出十六烷對大部分農藥的提取效率最高，所以本實驗選擇十六烷作為萃取劑。

圖2 不同萃取劑對提取效果的影響Fig.2 Infulunce of the differentextraction solventon the extraction efficiency

2.1.3 萃取劑體積的選擇 本實驗考察了萃取劑十六烷在30、40、50、60、70μL時對萃取效果的影響。當十六烷體積為40μL時，可以看出農藥的回收率最大。因為隨著萃取劑體積的增大，萃取相中的待測物濃度減小，而萃取相中待測物總量等于體積乘以濃度，在二者相互關系下，在某一值時，回收率達到了最大值。故選擇萃取劑體積為40μL。

圖3 萃取劑體積對提取效果的影響Fig.3 Influnce of extraction solvent volume on the extraction efficiency

圖4 分散劑體積對提取效果的影響Fig.4 Infulunce of dispersive solvent volume on the extraction efficiency

2.1.4 分散劑體積的的選擇 分散劑的體積能影響乳濁液的形成和萃取效率的大小，當分散劑體積小時，對萃取劑分散效果不好，影響乳濁液的形成；當分散劑用量較大時，待測物在水中的溶解度增大，萃取效率降低。本實驗考察了分散劑體積為0.5、0.75、1、1.25、1.5m L時對萃取效果的影響。從圖4中可以看出，當乙腈體積大于1m L時，萃取效率逐次降低。為了提高萃取相中待測物的濃度，提高檢測靈敏度，本實驗選擇1m L作為分散劑的體積。

2.1.5 離子強度的影響 在萃取過程中，鹽濃度會影響目標物在水中的溶解度，從而影響萃取效率。本實驗考察了在5m L水中，氯化鈉加入量為0～1.5g時，離子效應的作用。從圖5中可以看出，農藥在氯化鈉的加入量為1.25g時，萃取效果最好，因為隨著水中離子強度增加，待測物在水中的溶解度降低，有利于待測物進入有機相；而當鹽的量為1.5g時（基本鹽達到飽和），實驗發現待測物峰面積很低，可能是此鹽濃度下阻礙了分散體系的形成，因此本實驗選擇鹽的用量為1.25g。

圖5 NaCl的濃度對提取效果的影響Fig.5 Influnce of NaCl concentration on the extraction efficiency

2.2 方法學確證

2.2.1 方法的線性關系、檢出限和定量限 在已優化的實驗條件下，將10g空白蔬菜樣品黃瓜、番茄中添加混合農藥標準溶液，使其濃度分別為2.5、5、7.5、10、25、50、75、100μg/kg，按照實驗方法進行萃取、凈化、濃縮，以峰面積Y對濃度X（μg/kg）做標準曲線。富集25倍，六種擬除蟲菊酯在2.5～100μg/kg濃度范圍內線性良好，其線性相關系數R均大于0.996。以3倍信噪比（S/N=3）和10倍信噪比（S/N=10）計算方法的檢出限（LOD）和定量限（LOQ），從表1中可以看出七種菊酯類農藥的檢出限和定量限分別在0.07～0.58μg/kg和0.22～1.94μg/kg之間，該方法靈敏度高，滿足農藥殘留痕量檢測的要求。

2.2.2 方法的準確度和精密度 分別在上述兩種空白基質中添加混合農藥標準溶液使其濃度分別為5、10、50μg/kg，每個濃度水平設定6個重復樣品，按照優化的實驗方法進行處理，計算平均回收率及相對標準偏差（RSD），6種菊酯類農藥3個添加水平下的平均回收率為84.84%～111.59%，相對標準偏差（RSD）為0.48%～9.61%，表明該實驗方法準確性和重復性良好。

3 結論

本文建立了QuEChERS-DLLME-SFO-GC聯用測定蔬菜中6種擬除蟲菊酯類農藥的檢測方法。樣品用QuEChERS方法提取、凈化，提取液再經DLLMESFO濃縮，樣品前處理方法簡單，快速，濃縮倍數高，提高了六種擬除蟲菊酯類農藥的靈敏度，可以作為蔬菜基質中擬除蟲菊酯農藥的檢測方法。

表1 6種菊酯類農藥的檢出限、定量限及其在黃瓜、番茄基質中的平均回收率與相對標準偏差（RSDs）Table1 Limits of detection（LOD），the limitof quantification（LOQ），and the average recoveries，standard deviations（RSDs）of the

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