HPLC法同時測定復方乳酸依沙吖啶溶液中兩種組分的含量

馬 萍，吳 誠，王景成，曹 淼，孫 平，張麗平，牛華英（.第二炮兵總醫院藥學部，北京 00088；.濟南大成醫藥發展有限公司，山東 濟南 5000）

HPLC法同時測定復方乳酸依沙吖啶溶液中兩種組分的含量

馬 萍1，吳 誠1，王景成2，曹 淼1，孫 平2，張麗平1，牛華英2（1.第二炮兵總醫院藥學部，北京 100088；2.濟南大成醫藥發展有限公司，山東 濟南 250100）

目的：建立HPLC法同時測定復方乳酸依沙吖啶溶液中乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的含量。方法：色譜柱為Luna氰基柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5）；流速1.0 mL·min-1；柱溫30 ℃；檢測波長230 nm；進樣量20 μL。結果：乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明與二苯酮分離良好。乳酸依沙吖啶在0.601 2 ～ 1.403 0 mg·mL-1范圍內線性關系良好（r = 0.999 4），鹽酸苯海拉明在0.148 7 ～ 0.346 9 mg·mL-1范圍內線性關系良好（r = 0.999 9），依沙吖啶和苯海拉明的平均回收率分別為99.91%、99.73%，RSD分別為1.06%（n = 9）、1.10%（n = 9）。結論：本方法簡便準確，快速可靠，可用于復方乳酸依沙吖啶溶液的含量測定和質量控制。

復方乳酸依沙吖啶溶液；乳酸依沙吖啶；鹽酸苯海拉明；高效液相色譜法；含量測定

復方乳酸依沙吖啶溶液（復方利凡諾溶液），是《中國人民解放軍醫療機構制劑規范》（2002年版）中收載的外用滅菌溶液劑[1]。其有效組分為乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明，具有消炎、脫敏、止癢的作用，臨床上常用于治療皮膚濕疹等疾病。復方乳酸依沙吖啶溶液原質量標準僅有乳酸依沙吖啶紫外檢測的含量測定方法，本文建立HPLC法同時測定復方乳酸依沙吖啶溶液中兩種組分的含量，以期為該制劑質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（包括LC-10ATVP泵、SPD-10AVP紫外檢測器、PDA檢測器、LC Solution 色譜工作站，日本島津公司）。

乳酸依沙吖啶（中國藥品檢定研究院，含量：94.3%，批號100290-201002）；鹽酸苯海拉明（中國藥品檢定研究院，含量：99.9%，批號100066-200807）；復方乳酸依沙吖啶溶液（100 mL/瓶，含乳酸依沙吖啶200 mg及鹽酸苯海拉明50 mg，第二炮兵總醫院配制科研用）；二苯酮（北京通縣育才精細化工廠，批號970721）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Luna氰基柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5，用冰醋酸調節pH至6.5）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：230 nm；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液分別精密稱取乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明對照品適量，分別置于量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度制成濃度為5.314 mg·mL-1和2.478 mg·mL-1儲備液；精密量取乳酸依沙吖啶儲備液2 mL和鹽酸苯海拉明儲備液1 mL置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻作為對照品溶液備用。

2.2.2 供試品溶液精密量取復方乳酸依沙吖啶溶液5 mL置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即為供試品溶液。

2.3 專屬性實驗

精密稱取二苯酮5 mg，置于100 mL量瓶中，加乙腈5 mL使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻；另取乳酸依沙吖啶對照品10 mg和鹽酸苯海拉明對照品2.5 mg，置于同一10 mL量瓶中，加上述二苯酮溶液1 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即為定位溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按二苯酮、乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的順序出峰，各峰之間的分離度均應大于2.0，乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的理論塔板數分別大于3000和5000。詳見圖1。

圖1 復方乳酸依沙吖啶溶液典型HPLC圖A – 空白基質溶液，B – 定位溶液（含5 μg·mL-1的二苯酮和1000 μg·mL-1的乳酸依沙吖啶及250 μg·mL-1的鹽酸苯海拉明），C – 供試品溶液，D – 對照品溶液；1 – 二苯酮，2 – 乳酸依沙吖啶，3 – 鹽酸苯海拉明Fig 1 Typical HPLC chromatograms of complex ethacridine lactate solutionA – blank substrate solution, B – locating solution( 5 μg·mL-1diphenyl ketone, 1000 μg·mL-1ethacridine lactate and 250 μg·mL-1benzhydramine hydrochloride), C – sample solution, D –reference solution; 1 – diphenyl ketone, 2 – ethacridine lactate, 3 –benzhydramine hydrochloride

2.4 線性關系考察

分別精密吸取乳酸依沙吖啶儲備液1.2、1.6、2.0、2.4、2.8 mL和鹽酸苯海拉明儲備液0.6、0.8、l.0、1.2、1.4 mL分別置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度搖勻，各取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。分別以濃度為橫坐標（X），色譜峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線，得乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的回歸方程分別為：Y = 1.77×107X – 5.78×105（r = 0.999 4）、Y = 1.56×107X – 2.54×104（r = 0.999 9）。結果表明，乳酸依沙吖啶（0.601 2 ～ 1.403 0 mg·mL-1）和鹽酸苯海拉明（0.148 7 ～ 0.346 9 mg·mL-1）在各自濃度范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗

取對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6次，以峰面積計算，測得乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的RSD分別為0.13%和0.16%（n = 6），表明方法精密度良好。

2.6 穩定性實驗

取同一供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別在0、2、4、6、8 h進樣測定。計算乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明色譜峰面積RSD分別為0.06%和0.15%（n = 5），表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.7 重復性實驗

取復方乳酸依沙吖啶溶液（批號090915）共6份，按“2.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別進樣，測定乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的平均標示量（%）分別為101.12%（RSD = 0.98%）、100.52%（RSD = 0.75 %），RSD均小于2.0%，表明方法重復性良好。

2.8 回收率實驗

取乳酸依沙吖啶對照品約40、50、60 mg（含量94.3%），各3份，精密稱定，分別置9個50 mL量瓶中，按處方比例各加入鹽酸苯海拉明對照品約10、12.5、15 mg各3份，加水適量使溶解，并用水稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明對照品，精密稱定，用水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含乳酸依沙吖啶1 mg與鹽酸苯海拉明0.25 mg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算本品中乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的回收率。乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的平均回收率分別為99.91%、99.73%，RSD分別為1.06%、1.10%。具體見表1和表2。

2.9 耐用性實驗

分別改變流動相中有機相比例（±5%）、流動相pH值（± 0.1）、柱溫（27 ℃、33 ℃）與流速（0.98 mL·min-1、1.02 mL·min-1），以“2.3”項下定位溶液為供試品溶液，在上述不同的條件下分別取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察各峰之間的分離度。詳見表3。

表1 乳酸依沙吖啶回收率實驗結果. n = 9Tab 1 Results of recovery test for ethacridine lactate. n = 9

表2 鹽酸苯海拉明回收率實驗結果. n = 9Tab 2 Results of recovery test for benzhydramine hydrochloride. n = 9

表3 耐用性實驗結果Tab 3 Results of durability test

結果顯示微調有機相比例（± 5%），pH值（± 0.1），柱溫（27 ～ 33 ℃），流速（0.98 ～ 1.02 mL·min-1），系統適用性溶液中各峰之間的分離度均大于2.0，表明方法耐用性良好。

2.10 樣品含量測定

取復方乳酸依沙吖啶溶液3批，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的含量，詳見表4。

表4 復方乳酸依沙吖啶溶液的含量測定結果.%Tab 4 Results of contents determination in complex ethacridine lactate solution. %

3 討論

有關乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明各自的含量測定方法文獻[2-3]均有報道，但同時檢測的方法未見報道。因此，本文建立了高效液相色譜法同時測定制劑中乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的含量。

《中國藥典》（2010年版）[4]分別收載了乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明HPLC的含量測定方法，由于乳酸依沙吖啶有2個芳香胺基結構，C18對其保留強，因此采用C18色譜柱，而鹽酸苯海拉明則采用氰基鍵合硅膠為填充劑。本實驗首先嘗試采用《中國藥典》中乳酸依沙吖啶的HPLC法，但通過預實驗發現在該條件下鹽酸苯海拉明峰形差、嚴重拖尾、理論塔板數低，繼而嘗試采用《中國藥典》中鹽酸苯海拉明的HPLC法，用氰基鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5，用冰醋酸調節pH值至6.5）為流動相，該條件下乳酸依沙吖啶和苯海拉明保留時間適合，峰形對稱，分離度好。

乳酸依沙吖啶在270 nm波長處有最大吸收，鹽酸苯海拉明在258 nm波長處有最大吸收，如果以270 nm或258 nm為檢測波長，兩者峰面積相差懸殊，為了便于定量，選擇兩者吸收較相近的230 nm為檢測波長。由純度實驗可見，乳酸依沙吖啶和鹽酸苯海拉明的峰純度均符合規定，兩主峰處均未檢出其他雜質，表明本方法專屬性良好。經方法學考察，本文建立的檢測方法操作簡便、重現性佳、回收率高，可作為復方乳酸依沙吖啶溶液含量測定和質量控制方法。

[1]中國人民解放軍總后勤部衛生部.中國人民解放軍醫療機構制劑規范[S].2002年版.北京：人民軍醫出版社，2003：112.

[2]劉玉春，李艷娜.HPLC法測定乳酸依沙吖啶注射液的含量[J].安徽醫藥，2008，12（3）：225-226.

[3]江燕.高效液相色譜法測定鹽酸苯海拉明片的有關物質和溶出度[J].中國現代應用藥學，2006，23（4）：331-333.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：481，725.

Simultaneous determination of two components in complex ethacridine lactate solution by HPLC

MA Ping1, WU Cheng1, WANG Jing-cheng2, CAO Miao1, SUN Ping2, ZHANG Li-ping1, NIU Hua-ying2(1. Department of Pharmacy, General Hospital of the Rocket Forces , Beijing 100088, China; 2. Jinan Dachpharm Development Co. Ltd., Jinan 250100, China)

Objective:To establish the HPLC method for simultaneous determination of ethacridine lactate and benzhydramine hydrochloride in complex ethacridine lactate solution.Methods:The extract was separated by Luna CN column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm ), and the mobile phase was consisted of acetonitrile-water-triethylamine (50 : 50 : 0.5) with the fl ow rate of 1.0 mL·min-1. The column temperature was 30 ℃. The detection wavelength was 230 nm and the injection volume was 20 μL.Results:The calibration curves of ethacridine lactate and benzhydramine hydrochloride were linear in the range of 0.601 2 – 1.403 0 mg·mL-1(r = 0.999 4) and 0.148 7 – 0.346 9 mg· mL-1(r = 0.999 9), respectively. The average recovery of ethacridine lactate was 99.91% with RSD of 1.06% (n = 9). The average recovery of benzhydramine hydrochloride was 99.73% with RSD of 1.10% (n = 9).Conclusion:The method is simple, accurate and reliable. It can be used as the quality control of complex ethacridine lactate solution.

Complex ethacridine lactate solution; Ethacridine lactate; Benzhydramine hydrochloride; HPLC; Content determination

R917

A

1672 – 8157(2014)03 – 0149 – 03

2014-01-20

2014-03-03）

軍隊醫療機構制劑標準提高科研專項課題計劃重點項目（13ZJZ22）

牛華英，女，副主任藥師，主要從事新藥研發工作。E-mail：niuhuaying@sohu.com

馬萍，女，副主任藥師，主要從事醫院新制劑研發及藥物臨床研究。E-mail：maping691009@126.com