HPLC法測定鹽酸苯海拉明乳膏的含量

白 林，范金釗，蔡 樂，徐風華（.解放軍總醫院藥品保障中心，北京 00853；.安徽蚌埠醫學院，安徽 蚌埠 33000）

HPLC法測定鹽酸苯海拉明乳膏的含量

白 林1，范金釗2，蔡 樂1，徐風華1（1.解放軍總醫院藥品保障中心，北京 100853；2.安徽蚌埠醫學院，安徽 蚌埠 233000）

目的：建立測定鹽酸苯海拉明乳膏含量的方法。方法：采用HPLC法，色譜柱：Platisil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5）；檢測波長：258 nm；流速：0.8 mL·min-1；柱溫：40 ℃。結果：鹽酸苯海拉明與其它雜質峰分離良好。鹽酸苯海拉明在125.0 ～ 1 000.0 μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r = 1.000 0）；鹽酸苯海拉明的平均回收率為98.18%，RSD = 0.40%（n = 9）。結論：本方法簡便、準確、重復性好，可用于鹽酸苯海拉明乳膏的含量測定。

高效液相色譜法；鹽酸苯海拉明乳膏；含量測定

鹽酸苯海拉明乳膏收載于《中國人民解放軍醫療機構制劑規范》[1]，具有抗過敏、止癢、消炎、消腫作用，臨床上常用于治療急性濕疹、皮炎及其他各種過敏性皮膚疾病。原含量測定方法為銀量法和陰離子表面活性劑雙向滴定法[1]，銀量法測定的是氯離子的含量，專屬性不強且突躍顏色不明顯；陰離子表面活性劑雙向滴定法中十二烷基硫酸鈉溶液是一種表面活性劑，表面張力低，易從滴定管下漏，不易控制消耗毫升數，該法采用二甲基黃-溶劑藍19混合指示液，滴定終點氯仿層由綠色轉變為紅灰色，顏色變化不明顯，突躍點不易觀察。兩種方法準確度、靈敏度較低，本實驗參考相關文獻[2-7]采用HPLC法，快速、準確的測定了鹽酸苯海拉明乳膏的含量，以期為有效控制其制劑質量提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（包括四元梯度泵、自動脫氣機、VWD檢測器和化學工作站，美國安捷倫科技有限公司）；UV-2550型紫外分光光度儀（日本島津公司）。

鹽酸苯海拉明對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100066-200807）；乙腈為色譜純，冰醋酸、三乙胺為分析純。鹽酸苯海拉明乳膏（本院制劑室提供，規格：20 g，批號20131223、20131230、20131231）；二苯酮（美國ChemService公司，批號727800）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Platisil C18色譜柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5）用冰醋酸調至pH 6.5；檢測波長：258 nm；柱溫：40 ℃；流速：0.8mL·min-1；進樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

（1）對照品溶液：取鹽酸苯海拉明對照品約0.250 0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。取二苯酮對照品約0.014 8 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述儲備液各1 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（含鹽酸苯海拉明500 μg·mL-1、二苯酮14.8 μg·mL-1）。

（2）供試品溶液：取鹽酸苯海拉明乳膏約1.25 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相30 mL，置于50 ℃水浴加熱振搖使溶解，放冷至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷藏1 h，取出，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

（3）陰性對照溶液：按處方比例取除鹽酸苯海拉明以外的其余成分，按鹽酸苯海拉明乳膏的制備工藝制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 系統適用性實驗

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定。見圖1。

圖1 鹽酸苯海拉明色譜圖A – 對照品，B – 供試品，C – 陰性對照；1 – 鹽酸苯海拉明，2 – 羥苯乙酯（防腐劑），3 – 二苯酮（苯海拉明分解產物）Fig 1 Chromatograms of diphenhydramine hydrochlorideA – reference substance, B – sample, C – negative reference substance; 1 – diphenhydramine hydrochloride, 2 – ethyl hydroxybenzoate (preservative), 3 – benzophenone (the decomposition product of diphenhydramine)

2.4 線性關系考察

吸取鹽酸苯海拉明對照品溶液，含鹽酸苯海拉明分別為125.0、250.0、500.0、750.0、1 000.0 μg·mL-1注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積值為縱坐標（Y），進樣量（μg·mL-1）為橫坐標（X）繪制標準曲線，得回歸方程：Y = 1.046 7 X + 1.011，r = 1.000 0。結果表明鹽酸苯海拉明在125.0 ～ 1000.0 μg·mL-1的范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗

精密吸取對照品溶液10 μL，按“2.1”項下色譜條件連續重復進樣6次，記錄峰面積值，鹽酸苯海拉明RSD為0.08%，表明儀器的精密度良好。

2.6 重復性實驗

取鹽酸苯海拉明軟膏（批號20131223）按“2.2”項下方法分別制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，分別進樣10 μL，標示量%分別為100.90%、101.15%、100.45%、100.79%、101.17%、100.77%，RSD為0.27%（n = 6）。表明方法重復性良好。

2.7 穩定性實驗

取同一份供試品溶液分別于0、1、2、4、6、8 h進樣10 μL，測定鹽酸苯海拉明峰面積分別為528.5、528.2、528.5、528.4、528.9、527.7，RSD為0.08%。結果表明供試品溶液中鹽酸苯海拉明在8 h內穩定。

2.8 回收率實驗

按處方量稱取處方中除鹽酸苯海拉明以外的輔料，按制備工藝制成鹽酸苯海拉明的陰性樣品，取9份，分成3組，每組3份，每份約1.25 g。分別精密加入4.0、5.0、6.0 mL鹽酸苯海拉明對照品溶液，按供試品溶液制備方法制成含量為標示量的80%、100%、120%的樣品溶液。按“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖及峰面積，計算回收率。結果顯示鹽酸苯海拉明的平均回收率為98.18%，RSD = 0.40%。詳見表1。

表1 鹽酸苯海拉明乳膏回收率實驗測定結果. n = 9Tab 1 Results of recovery test for diphenhydramine hydrochloride cream. n = 9

2.9 樣品含量測定

取不同批號的樣品各3份（批號20131223、20131230、20131231），按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行含量測定，每份樣品重復進樣2次，詳見表2。

表2 鹽酸苯海拉明乳膏含量測定結果. n = 3Tab 2 Contents determination of diphenhydramine hydrochloride in diphenhydramine hydrochloride cream. n = 3

3 討論

3.1 鹽酸苯海拉明含量測定方法的選擇

鹽酸苯海拉明含量測定方法主要有硝酸銀滴定法[1]、十二烷基硫酸鈉滴定法[1]，紫外分光光度法[8]，HPLC法[2-5]等。硝酸銀滴定法、十二烷基硫酸鈉滴定法無需特殊儀器，但滴定終點變化不明顯；紫外分光光度法，基質對測定結果的影響較大。有文獻[2-7]采用HPLC法測定鹽酸苯海拉明，可以有效避免基質對測定的干擾，操作簡便，專屬性強，結果準確，適用于醫療單位對該制劑進行質量控制。

3.2 HPLC法測定條件的優化

3.2.1 檢測波長的選擇將對照品溶液置紫外分光光度計上，在200 ～ 350 nm進行掃描，得鹽酸苯海拉明的紫外光譜圖。結果表明鹽酸苯海拉明在258 nm處有最大吸收且不受雜質、輔料、溶劑的干擾，因此選擇258 nm為鹽酸苯海拉明的檢測波長。

3.2.2 流動相的選擇本實驗曾用甲醇-1%三乙胺、乙腈-1%三乙胺[3-4]、甲醇-水-三乙胺[5]及不同比例的乙腈、水、三乙胺為流動相，在乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5）[9-10]的條件下測定鹽酸苯海拉明的含量不受雜質干擾，且峰形好，靈敏度高，重現性和回收率好，完全能滿足該品種質量標準的要求，為其質量控制提供了可靠的定量方法參考。

3.2.3 溶劑的選擇本實驗曾以甲醇、乙醇、流動相分別作為溶劑提取鹽酸苯海拉明，其中采用流動相作溶劑提取回收率高，且樣品溶液進入色譜系統不會有不溶物質析出，因此用流動相作為提取劑。

3.2.4 色譜柱選擇文獻[9-10]測定鹽酸苯海拉明采用氰基柱，本實驗曾采用氰基柱進行試驗，色譜柱沖洗及更換等操作繁瑣，氰基柱用于反相條件時CN鍵易水解，尤其是在pH 1.5 ～ 7.0的范圍以外，柱子使用壽命會下降較快。本實驗采用常用ODS柱，不需頻繁更換色譜柱，柱效與氰基柱基本相同。建立的含量測定方法快速、簡捷、準確度高、重復性好，基質對測定無干擾，分離效果好，能很好的用于鹽酸苯海拉明乳膏的含量測定。

3.3 穩定性影響因素

（1）光照：將實驗配置的對照品溶液，置自然光照下，于0、3、6、9、12、24 h分別進樣10 μL，記錄峰面積分別為530.5、529.4、530.1、530.0、529.7、529.9。實驗結果表明鹽酸苯海拉明在24 h內幾乎不受光照影響，實驗過程中不必采取避光操作。

（2）酸性：文獻[10]表明，鹽酸苯海拉明經酸破壞會產生二苯酮雜質峰，本實驗流動相pH 6.5為弱酸性。對照品溶液最終由流動相（pH 6.5）定容，結合光照實驗，可知鹽酸苯海拉明在pH 6.5溶液中較穩定，不干擾本實驗含量測定結果。

（3）溫度：本實驗曾用不同水浴溫度（50 ～ 80 ℃）進行試驗，結果表明水浴溫度對鹽酸苯海拉明的穩定性無影響。

[1]中國人民解放軍總后勤衛生部.中國人民解放軍醫療機構制劑規范[S].2002年版.北京：人民軍醫出版社，2002：48-49.

[2]李傍娣，程江.HPLC法測定鹽酸苯海拉明乳膏的含量[J].西北藥學雜志，2012，27（1）：41-43.

[3]劉燕，吳美珠，譚雄斯.HLPC法測定復方皮炎平霜中鹽酸苯海拉明的含量[J].實用醫技雜志，2007，14（27）：3705-3706.

[4]張云楚，王玉，紀宇，等.HPLC法同時測定氨麻苯美片中4種主要成分的含量[J].藥物分析雜志，2011，31（6）：1158-1161.

[5]會書鈞.高效液相法測定復方樟腦乳膏中鹽酸苯海拉明的含量[J].中國醫藥導報，2009，6（28）：48-50.

[6]白林，聶帥.HPLC法測定脊痛寧膠囊中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].中國藥物應用與監測，2013，10（3）：147-149.

[7]郭美華，馬妍妍，劉世萍.鹽酸苯海拉明乳膏的制備及質量控制[J].中國藥師，2010，13（3）：392-393.

[8]張俊貞，馮銳，牛玉鳳，等.紫外分光光度法測定鹽酸苯海拉明糖漿中主藥的含量[J].中國藥房，2008，19（22）：1741-1742.

[9]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：724-725.

[10]吳愛琴，鄧紅，葉俊鵬.HPLC法測定鹽酸苯海拉明軟膠囊中的二苯酮[J].廣東藥學院學報，2003，19（4）：314-315.

Content determination of diphenhydramine hydrochloride cream by HPLC

BAI Lin1, FAN Jin-zhao2, CAI Le1, XU Feng-hua1(1. Department of Pharmaceutical Care, PLA General Hospital, Beijing 100853, China; 2. Bengbu Medical College, Bengbu 233000, China)

Objective:To establish the HPLC method for determining the content of diphenhydramine hydrochloride cream.Methods:HPLC analysis was carried out with Platisil C18column (250 mm×4.6 mm, 5 μm), the mobile phase consisted of acetonitrile-water-triethylamine (50 : 50 : 0.5), the detection wavelength was 258 nm, the fl ow rate was 0.8 mL·min-1and the column temperature was 40 ℃.Results:The samples were separated well from impurities by this HPLC method. The calibration curve of diphenhydramine hydrochloride was linear in the range of 125.0 – 1 000.0 μg·mL-1(r = 1.000 0). The average recovery and the RSD of diphenhydramine hydrochloride were 98.18%, 0.40% (n = 9), respectively.Conclusion:This method is accurate and feasible, which can be applied as the quantitative method for the determination of diphenhydramine hydrochloride cream.

HPLC; Diphenhydramine hydrochloride cream; Content determination

R917

A

1672 – 8157(2014)06 – 0348 – 03

2014-03-03

2014-05-16）

總后制劑標準提高計劃重點課題：半固體制劑標準提高系列研究（13ZJZ05）

徐風華，女，研究員，研究方向：藥物新劑型與新型遞藥系統研究。E-mail：xufh@yahoo.com

白林，女，主任藥師，研究方向：藥物分析與藥品質量控制。E-mail：bailin301@126.com