TGF-β1基因多態性與乙型肝炎肝硬化關系的Meta分析

薛敏敏 徐忠良 董公明 謝 芳 吳佩群 白 嵐

肝硬化是一種常見的慢性肝病，在我國，乙型病毒性肝炎是引起肝硬化的主要原因[1]。肝硬化的病因和發病機制尚未完全闡明，細胞因子在其中的作用越來越受到關注。轉化生長因子（TGF）-β1與多種組織或器官的纖維化性疾病密切相關。有研究表明，TGF-β1基因多態性與心肌梗死、系統性硬化、多發性硬化癥、肝臟纖維化等多種疾病相關[2-3]。有關TGF-β1 509C/T、869T/C基因多態性與乙型肝炎肝硬化關系的研究較多，但是各研究結論不一致[4-7]。本研究運用Meta分析方法，對以往多個關于中國人群TGF-β1 509C/T、869T/C基因多態性與乙型肝炎肝硬化關系的病例對照研究的文獻進行合并分析，旨在獲得關于TGF-β1基因多態性與乙型肝炎肝硬化之間關系的可靠證據。

1 資料與方法

1.1 檢索策略 以“肝纖維化或肝硬化，轉化生長因子，基因”為檢索詞，在摘要和（或）全文中限定509或869位點，檢索中國生物醫學文獻數據庫、重慶維普中文科技期刊全文數據庫、清華CNKI數據庫、萬方科技期刊全文數據庫中自建庫到2013年7月，發表的關于TGF-β1基因509位點、869位點多態性與乙肝肝硬化關系的文獻，并通過Pubmed（檢索詞為“liver cirrhosis or hepatic fibrosis”and“TGF or transforming growth factor”and“gene”and“Chinese”）檢索英文期刊或者有英文摘要的期刊上發表的關于中國人群的研究報道。并通過文獻追溯的方式對該領域主要研究者的報道進一步查漏。1.2 文獻的納入與剔除 納入標準：（1）國內或國外期刊發表的關于TGF-β1基因509位點、869位點多態性與中國人群乙型肝炎肝硬化相關性的病例對照研究。（2）病例組肝硬化標準符合中華醫學會推薦標準。（3）對照組為無乙型肝炎的健康對照人群。（4）同一作者的重復文獻或對同一人群的多次報道選擇質量最好的一篇。排除標準：（1）文獻中未提供病例與對照的來源或無對照、對照不符合要求的文獻。（2）病例組未給出明確的診斷標準的文獻。（3）資料收集方法不科學、分析不恰當的文獻。（4）綜述性文獻。兩名獨立的文獻搜集人員以互盲的形式分別對文獻進行初級檢索，確定初級檢索內容后對文獻進行納入和剔除，對意見不一致的文獻共同商討而獲得一致的意見。采用統一規范的數據提取表提取數據。

1.3 統計學方法 根據Meta分析的要求進行數據整理與合并，并與原始文獻的數據進行核對，所有統計分析應用Rev?Man 5.1軟件完成。TGF-β1基因位點多態性對乙肝肝硬化的風險采用OR及其95%CI進行描述，檢驗水準α=0.05。首先進行異質性檢驗，若納入文獻之間同質性較好，則采用固定效應模型進行分析；如果納入文獻之間異質性較大，則用隨機效應模型進行分析。然后繪制漏斗圖，對發表偏倚進行評估，并計算失效安全系數估計發表偏倚對結果的影響。

2 結果

2.1 納入研究的基本特征 初檢到191篇文獻，根據以上納入標準和排除標準，最終共納入6篇病例對照研究文獻。其中3篇文獻同時包含509和869位點，2篇文獻只包含509位點，1篇文獻只包含869位點。納入研究的TGF-β1基因509位點、869位點多態性分布見表1。

2.2 Meta分析結果

2.2.1 TGF-β1基因509位點T等位基因與乙型肝炎肝硬化的關系 異質性檢驗結果顯示χ2=23.54，自由度為4，P＜0.001，說明各研究間有異質性，采用隨機效應模型進行Meta分析。乙型肝炎肝硬化病例組等位基因1 172個，健康對照組等位基因1 102個，以T等位基因為暴露因素，C等位基因為非暴露因素進行分析，結果顯示OR=1.02，95%CI為（0.67～1.54），未發現509位點攜帶T等位基因者發生乙型肝炎肝硬化的危險性高于攜帶C等位基因者，見圖1。

2.2.2 TGF-β1基因509位點TT和CT基因型與乙型肝炎肝硬化的關系 異質性檢驗結果顯示χ2= 28.18，自由度為4，P＜0.001，說明各研究間有異質性，采用隨機效應模型進行Meta分析。乙型肝炎肝硬化病例組586例，健康對照組551例，以TT和CT基因型為暴露因素，CC基因型為非暴露因素進行分析，結果顯示OR=0.80，95%CI為（0.36～1.78），未發現509位點TT和CT基因型發生乙型肝炎肝硬化的危險性高于CC基因型，見圖2。

Table 1 Genetic distributions of TGF-β1 509 and 869 genes in all included studies表1 納入文獻的TGF-β1基因509位點、869位點多態性分布

2.2.3 TGF-β1基因869位點C等位基因與乙型肝炎肝硬化的關系 異質性檢驗結果顯示χ2=11.69，自由度為3，P=0.009，說明各研究間有異質性，采用隨機效應模型進行Meta分析。乙型肝炎肝硬化病例組等位基因742個，健康對照組等位基因752個，以C等位基因為暴露因素，T等位基因為非暴露因素進行分析，結果顯示OR=1.05，95%CI為（0.69～1.62），未發現869位點攜帶C等位基因者發生乙型肝炎肝硬化的危險性高于攜帶T等位基因者，見圖3。

2.2.4 TGF-β1基因869位點CC和TC基因型與乙型肝炎肝硬化的關系 異質性檢驗結果顯示χ2= 12.09，自由度為3，P=0.007，說明各研究間有異質性，采用隨機效應模型進行Meta分析。乙型肝炎肝硬化病例組371例，健康對照組376例，以CC和TC基因型為暴露因素，TT基因型為非暴露因素進行分析，結果顯示OR=0.98，95%CI為（0.48～2.00），未發現869位點CC和TC基因型發生乙型肝炎肝硬化的危險性高于TT基因型，見圖4。

2.3 發表偏倚的評估 以納入的每個獨立研究效應值OR為橫坐標，標準誤的倒數為縱坐標，對509T等位基因和869C等位基因繪制漏斗圖。可以發現納入Meta分析中的各獨立研究效應值OR在坐標軸上圍繞漏斗圖的中心線散開，說明無明顯的發表偏倚。同時利用失效安全系數計算公式：Nfs0.05=(∑Z/ 1.645)2-k對發表偏倚進行量化估計，經計算，509位點Nfs0.05=29，869位點Nfs0.05=12，分別需要相同病因作用且有統計學意義的各29篇和12篇新研究才能逆轉本次Meta分析的結果，見圖5、6。

Figure 1 Meta-analysis for association between T allele of TGF-β1 509 and liver cirrhosis圖1 TGF-β1基因509位點T等位基因與乙型肝炎肝硬化關系的Meta分析

Figure 2 Meta-analysis for association between TGF-β1 509 polymorphism and liver cirrhosis圖2 TGF-β1基因509位點TT和CT基因型與乙型肝炎肝硬化關系的Meta分析

Figure 3 Meta-analysis for association between C allele of TGF-β1 869 and liver cirrhosis圖3 TGF-β1基因869位點C等位基因與乙型肝炎肝硬化的關系的Meta分析

Figure 4 Meta-analysis for association between TGF-β1 869 polymorphism and liver cirrhosis圖4 TGF-β1基因869位點CC和TC基因型與乙型肝炎肝硬化的關系的Meta分析

Figure 5 The funnel plots of 509 T allele publication bias圖5 509T等位基因發表偏倚漏斗圖

Figure 6 The funnel plots of 869 C allele publication bias圖6 869C等位基因發表偏倚漏斗圖

3 討論

病例對照研究可以分析遺傳因素在多因素復雜疾病中的作用，并可計算遺傳因素危險性的OR值。由于單個研究中樣本例數較小，常導致研究結果的不穩定，而Meta分析可以把具有相同研究目的的研究結果進行定量合并，以彌補單個研究的不足，從而提高檢驗效能，獲得更為穩定的結果[10]。在肝臟發生病變時，TGF-β1是一種強效的促纖維化的細胞因子，可以通過刺激細胞外基質的合成并抑制其降解而促進纖維化的形成[11-12]。TGF-β1基因有多個位點具有多態性，包括：位于啟動子區的-988、-800、-509，內含子區的+72，外顯子區的869、code25[3]。其中509位點、869位點是研究較多的2個位點。近年來，關于TGF-β1基因多態性與乙型肝炎肝硬化的關系引起了國內外研究者的重視，但不同研究結果之間存在一定差異。本文通過檢索國內外已發表的文獻，對納入的6篇不同地點、不同時間研究TGF-β1基因509位點、869位點變異與中國人群乙型肝炎肝硬化關系的數據進行分析，評價中國人群中TGF-β1基因多態性與乙型肝炎肝硬化的關聯性及關聯強度。

本研究表明，TGF-β1基因509位點、869位點多態性均與乙型肝炎肝硬化風險無關。這與張志強等[13]的研究結論不一致。筆者的研究也分別對509位點TT、CT基因型與CC基因型進行了對比分析，但未發現TT、CT基因型乙型肝炎肝硬化風險升高。筆者廣泛搜索了TGF-β1基因與乙肝肝硬化的文獻后新發現兩篇509位點的研究[5,8]，正是這兩篇遺漏的研究造成了原研究TT基因型乙肝肝硬化風險升高的陽性結果。本次Meta分析納入的栗華[4]與羅斌[5]的研究結論相反，其余研究為陰性結果。這也是造成本次Meta分析異質性大的原因。不同研究之間差異的原因尚不明確，但是Meta分析的思想就是搜索全面的證據來解決爭議的問題，所以應納入所有符合條件的研究而不是主觀排除某一研究。關于869位點，石偉珍等[4]的研究是造成異質性的原因，但即使排除該研究，C等位基因的風險為T等位基因的1.25(95%CI:1.00～1.57)倍，CC和TC基因型的風險為TT基因型的1.33(95%CI:0.93～1.90)倍，差異仍無統計學意義。

對各種偏倚的控制從而提高結果的真實性和可靠性是Meta分析中非常重要的一個環節。為了減少Meta分析的偏倚，本研究聯合使用了多種有效的文獻檢索途徑，盡可能全面的檢索相關文獻，并發現了既往研究中遺漏的文獻。在文獻質量評估時參考英國牛津循證醫學中心嚴格評價項目（Oxford criti?cal appraisal skill program,Oxford CASP,2004）的要求對納入文獻進行質量評價，剔除了無對照和重復報道的文獻。本研究中引入的Wang等[8,14-16]的研究以相同的研究人群發表了4篇文章，在搜索之后筆者認真比對排除了王皓作為第一作者重復發表的2篇和楊再興作為第一作者發表的1篇文章，只納入了1篇質量較高的研究。另外，由于遺傳因素在不同種族的作用有所不同，所以本研究限定只納入在中國人群中進行的研究，以盡可能減少人種差異造成的偏倚。發表偏倚是影響Meta分析結果的重要因素，漏斗圖的對稱性可以對發表偏倚進行直觀評估，本次研究中兩個等位基因漏斗圖未見明顯不對稱性，提示無明顯發表偏倚。同時計算得出的509位點Nfs0.05=29，869位點Nfs0.05=12，即分別需要相同病因作用且有統計學意義的各29篇和12篇新研究才能逆轉本次Meta分析的結果，說明發表偏倚的影響程度較小，可靠性較好。

本研究結果顯示在中國人群中未發現TGF-β1基因509位點、869位點多態性與乙型肝炎肝硬化風險有關，但需要指出的是本次Meta分析只涉及單因素研究，未考慮到TGF-β1基因多態性與環境因素及多基因連鎖的交互作用，而環境因素、多基因連鎖的交互作用可能影響乙型肝炎肝硬化的易感性。

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