果蔬汁中含氯殺菌劑的氣相色譜分析

史龍梅 牛志遠 付艷芳 李歡 周建科

（河北大學化學與環境科學學院，河北保定071002）

果蔬汁中含氯殺菌劑的氣相色譜分析

史龍梅*牛志遠 付艷芳 李歡 周建科**

（河北大學化學與環境科學學院，河北保定071002）

以甲苯為萃取劑，甲醇為分散劑，分散液液微萃取果蔬汁中2，4，6-三氯酚、五氯苯甲醚、五氯硝基苯3種含氯殺菌劑，毛細管氣相色譜分離/電子捕獲檢測器測定。試驗主要考察了分散劑、萃取劑、鹽效應及酸度對目標化合物萃取的影響情況。結果表明，在5.0 μg/mL～100.0 μg/mL范圍內3種組分有良好線性，相關系數大于0.999 3，平均回收率分別為95.3%、96.5%、81.5%，相對標準偏差為5.53%、6.37%、5.94%。

分散液液微萃取；氣相色譜；有機氯殺菌劑；果蔬汁

水果蔬菜中農藥殘留問題十分嚴峻，已引起人們廣泛關注與重視，同時，果蔬汁飲料的質量和安全勢必受到威脅。五氯硝基苯屬有機氮保護性殺菌劑，主要用于土壤和種子處理，對多種蔬菜的苗期病害及土壤傳染的病害有較好的防治效果，其化學性質穩定，難以降解，殘留期長，具有高毒性和生物蓄積性，對生物體內分泌系統有干擾。國家標準GB 2673-2012規定果蔬中五氯硝基苯最大殘留限量≤0.1 mg/kg。2，4，6-三氯酚作為一種防腐劑、殺菌劑，被眾多國家定為環境中優先控制污染物，氯酚類化合物對人類健康和環境產生危害。文獻報道含氯殺菌劑的檢測通常采用氣相色譜法、高效液相色譜法、氣質聯用、液質聯用法，同時檢測2，4，6-三氯酚、五氯苯甲醚和五氯硝基苯的方法尚未見報道。

本文采用分散液液微萃取樣品處理方法，氣相色譜/電子捕獲檢測器測定果蔬汁中有機氯殺菌劑，結果令人滿意。

1 試驗部分

1.1 儀器和試劑

Varian3400氣相色譜儀；ECD檢測器；N-2000型雙通道色譜工作站，浙江大學智能信息工程研究所；SZ-93自動雙重純凈水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；80-2型離心機；XW-80A旋渦混合器。

2，4，6-三氯酚，瑞典Acros Organics公司；五氯苯甲醚和五氯硝基苯，Sigma-Aldrich公司；除甲醇為色譜純外，其余試劑均為分析純；混合果蔬飲料樣品，當地超市。

標準儲備溶液：分別準確稱取適量3種標準品，甲醇作溶劑，配制成2.0 mg/mL的標準儲備液，4℃條件下貯藏備用。標準工作溶液：用甲醇逐級稀釋儲備液。

1.2 色譜條件

色譜柱：ATTM-PESTICIDE，內徑0.25 μm，30 m×0.25 mm，Alltech；柱溫130℃；1075分流/不分流注樣器，不分流進樣，分流閥關閉時間為0.5 min；進樣量1 μL；進樣器溫度300℃；ECD檢測器，檢測器溫度300℃；載氣為高純氮氣；柱前壓0.21 MPa，流量1.5 mL/min。

1.3 樣品處理

將混合果蔬汁樣品過孔徑0.45 μm微孔濾膜，取5 mL置于具塞尖底離心試管中，注入1.5 mL混合萃取劑（甲醇與甲苯體積比為4∶1），樣品與萃取劑混合形成乳濁液，靜置2 min，在2 500 r/min轉速下離心2 min。用10 mL注射器將下層樣品吸出棄去，上層甲苯相析出量為260 μL，取1 μL進樣分析。

2 結果與討論

2.1 色譜條件優化

考察了程序升溫及各種恒溫條件下2，4，6-三氯酚、五氯苯甲醚和五氯硝基苯的分離情況，發現柱溫恒溫130℃時3組分的分離和響應值情況最好，最終確定柱溫為恒溫130℃。標準溶液色譜圖如圖1所示。

圖1 標準溶液色譜圖

2.2 萃取條件優化

2.2.1 萃取劑的選擇

對萃取劑要求是：密度最好比水大，便于操作；在水中溶解度很小；對分析物有良好的萃取能力；與所用檢測器相適應，雜峰干擾小。

首先，常見的密度比水大的二氯甲烷、三氯甲烷等溶劑不能用于電子捕獲檢測器。考察了二硫化碳、甲苯和二甲苯作為萃取劑的情況。結果表明，二硫化碳作為萃取劑時，萃取不出2，4，6-三氯酚，萃取效率低；二甲苯作萃取劑萃取效率高但對組分有干擾；甲苯作萃取劑時無雜質峰干擾，萃取效率高，故選擇甲苯作萃取劑。

2.2.2 分散劑

考察了甲醇、丙酮、乙腈3種有機溶劑作分散劑的分散萃取情況，試驗結果表明，丙酮和乙腈作為分散劑萃取效率低；甲醇無雜質峰干擾，萃取效率高，所以用甲醇作為分散劑。

2.2.3 萃取劑體積

試驗考察了100 μL～600 μL的萃取劑對回收率的影響，結果如圖2所示。保持甲醇體積為1.2 mL，甲苯的體積為300 μL時，3種組分的萃取效果最佳。

圖2 萃取劑體積對萃取效率的影響

2.2.4 樣品pH值

在一定pH范圍內，調節樣品酸度有利于提高萃取效率。考察了樣品pH對回收率的影響。試驗結果表明，當pH＜3時，回收率會降低；當pH＞3時，隨著pH的增加，回收率基本不變，而實際樣品pH值為3.6，故無需再調節酸度。

2.2.5 鹽析效應

試驗考察了600 mg～1 000 mg的氯化鈉含量對萃取率的影響。結果表明，加鹽與否對萃取效率影響甚微，所以試驗選擇不加鹽。

2.3 線性方程和檢出限

用甲醇對標準儲備混合液分級稀釋，配成系列質量濃度的工作溶液后，在所選的色譜條件下，以y（峰面積）對x（質量濃度）繪制工作曲線，3種組分在5.0 mg/L～100.0 mg/L范圍內線性良好，其線性方程與相關系數及方法檢出限見表1。

表1 線性方程及檢出限

2.4 樣品加標回收及RSD測定

取適量混標加入5 mL混合果蔬汁樣品中，在最佳萃取條件和色譜條件下，測定加標后3種組分的含量，平行測定6次，計算相應的加標回收率和RSD，結果見表2。樣品加標色譜圖見圖3。

表2 平均回收率和精密度（n=6）

2.5 實際樣品測定

取5 mL混合果蔬汁實際樣品，平行測定3次，3種組分均未檢出，樣品色譜圖如圖4所示。

圖3 樣品加標色譜圖

圖4 實際樣品色譜圖

3 結論

采用分散液液微萃取-氣相色譜法測定果蔬汁中的含氯殺菌劑，樣品處理方法操作簡便，快速高效，所用試劑少，是一種對環境友好，操作簡便的分析方法，適合果蔬汁飲料中該類化合物的測定。

［1］高志杰.氣相色譜法測定韭菜中五氯硝基苯殘留研究［J］.中國衛生檢驗雜志，2008，18（4）：635-636.

［2］國家質量監督檢驗檢疫總局.GB 2763-2012食品中農藥最大殘留限量［S］.北京：中國標準出版社，2012：1-158.

［3］RIBEIRO A，NEVES M H，ALMEIDA M F，et al.Direct determination of chlorophenols in landfill leachates by solid-phasemicro-extraction-gaschromatographymass spectrometry［J］.Journal of Chromatography A，2002，975（2）：267-274.

［4］潘玉香，董靜，孫軍，等.氣相色譜法測定復雜基質蔬菜中11種農藥的殘留量［J］.理化檢驗：化學分冊，2009，45（7）：852-854.

［5］董冀川，楊瓊.氣相色譜法同時分析測定土壤中15種有機氯農藥殘留［J］.中國環境監測，2009，25（4）：7-10.

［6］李新紀，孫永德.水中酚類優先監測物的氣相色譜測定法［J］.環境監測管理與技術，1993，5（4）：24-28.

［7］曲麗娟，鮮啟鳴，鄒惠仙.固相微萃取－氣相色譜法測定飲用水及其水源水中的氯酚［J］.環境污染與治理，2004，26（2）：154-156.

［8］鄔晨陽，馬建明，龔文杰，等.高效液相色譜法測定蔬菜中五氯硝基苯殘留［J］.中國衛生檢驗雜志，2008，18（12）：2 587-2 588.

［9］李永新，孫成均，趙劍虹，等.高效液相色譜法同時測定蔬菜水果中的12種農藥殘留［J］.色譜，2006，24（3）：251-255.

［10］劉桂明，鄧義敏.水中苯酚、五氯酚、2，4，6-三氯酚的高效液相色譜法［J］.云南環境科學，2000，19（4）：59-61.

［11］樊苑牧，賀小雨，俞雪鈞，等.氣相色譜-質譜聯用對紡織品中1 6種含氯酚及鄰苯基苯酚、β-萘酚殘留量的測定［J］.分析測試學報，2009，28（7）：794-798

［12］PEREZ-MAGARINO S，REVILLA I，GONZALE-SANJOSE M L，et a1.Various applications of liquid chromatography-massspectrometrytotheanalysisofphenolic compounds［J］.Journal of Chromatography A，1999，847（1-2）：75-81.

［13］楊秋紅，程小艷，楊坪，等.固相萃取-高效液相色譜串聯質譜同時檢測地表水中的2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚［J］.分析化學，2011，39（8）：1 208-1 212.

表4 牛蒡保健型鮮啤酒理化指標

5.3 牛蒡保健型鮮啤酒的衛生指標符合GB2758-2012規定。

6 結論

牛蒡原汁的最佳添加時間是在原料糖化時，牛蒡原汁最佳添加量為4%，啤酒發酵最佳時間為13 d，最終的牛蒡啤酒風味口感最佳，啤酒綜合評分最高。

參考文獻

［1］劉丹赤，尹玲，邵長明.牛蒡的研究與開發進展［J］.北方園藝，2007（8）：41-42.

［2］金新華.食藥俱佳話牛蒡［J］.上海蔬菜，2008（1）：110-111.

［3］董梅，姚惠源.牛蒡根中菊糖的提取與制備［J］.食品工業，2005（2）：43-45.

［4］屠用利.菊糖的功能與應用［J］.食品工業，1997（4）：45-46.

［5］吳國鋒，李國全，馬永強.工業發酵分析［M］.北京：化學工業出版社，2006.

［6］孫培龍，吳石金.生物化學技術實驗指導［M］.北京：化學工業出版社，2008.

［7］董曉燕.生物化學實驗［M］.北京：化學工業出版社，2003.

［8］熊善柏，趙山，李云捷，等.菊糖的提取與精制［J］.冷飲與速凍食品工業，2001，7（4）：1-3.

［9］SCHOEBERGER C，KROTTENTHALER M，BACK W，et al.Sensory and analytical characterization of nonvolatile taste-active compounds in bottom-fermented beers［J］. Technical quarterly，2002，39（4）:210-217.

［10］宦銀根，李燕.牛蒡飲料生產工藝［J］.食品科學，1998，19（9）：66-67.

［11］李建松.去皮牛蒡護色方法的研究［J］.江蘇食品與發酵，1989，9（3）：17-18.

［12］張翠萍，胡巍.越桔中主要化學成分及其生物活性的概述［J］.黑河科技，2000（2）：74.

Gas chromatography analysis ofchlorine bactericide in fruit juices

SHI Long-mei*NIUZhi-yuan FUYan-fang LI Huan ZHOUJian-ke**
（College ofchemistryand environmental science，Hebei university，Hebei Baoding071002，China）

With methylbenzene as extractant and methanol as dispersant，three kinds of chlorine bactericide in fruit juice were extracted by dispersive liquid-liquid microextraction（DLLME）method.The 2，4，6-trichlorophenol, pentachloroanisole and pentachloronitrobenzene were determined bycapillarygas chromatographywith ECD.The influences ofdispersant,extractant,salt effect and pH on extraction efficiencyoftarget compounds were investigated.The linearityofregressionequationsweregood in therangeof5.0 μg/mL～100.0 μg/mL,with correlation coefficientsweregreater than 0.999 3.The average recoveries were 95.18%,96.42%and 81.37%,respectively.The relative standard deviations werelessthan6.37%.

dispersive liquid-liquid microextraction；gas chromatography；organochlorine fungicides；fruit juice

TS225.7

A

1673-6044（2014）01-0051-04

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.01.017

*史龍梅，女，1988年出生，河北大學分析化學專業研究生在讀。

**周建科，通訊作者，E-mail:zhoujianke@aliyun.com.

2013-12-30

修回日期：2014-01-06