慢性乙型肝炎HBV-DNA載量與炎性因子、肝臟 酶學指標的相關性研究

周燕飛，龔杰，張曉梅

論著·臨床

慢性乙型肝炎HBV-DNA載量與炎性因子、肝臟 酶學指標的相關性研究

周燕飛，龔杰，張曉梅

目的探討慢性乙型肝炎患者血清不同HBV-DNA載量與炎性因子、肝功能酶學指標的關系。方法對78例慢性乙型肝炎患者分別用實時熒光定量PCR技術檢測血清HBV-DNA載量,并以此分為陰性組(17例)、低載量組(30例)、中載量組(19例)、高載量組(12例)4組，比較各組高敏C反應蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、肝功能相關酶(ALT、AST、GGT)的水平，并探討其相關性。結果隨著HBV-DNA載量的增高，TNF-α、IL-6均明顯升高，表現為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。血清hs-CRP中載量組、低載量組間水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，其余2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。各組間血清ALT、AST、GGT水平比較，表現為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間比較差異有顯著統計學意義(P<0.05)。ALT與TNF-α、IL-6相關(r=0.68、0.56，P<0.05)；ALT與hs-CRP無相關性(r=0.23，P>0.05)。結論炎性因子在乙肝的發病過程中有重要作用，綜合檢測血清炎性因子和肝臟酶學對了解乙肝體內免疫狀態、臨床診斷和預后有重要意義。

乙肝病毒DNA；超敏C反應蛋白；腫瘤壞死因子α；白介素-6；丙氨酸氨基轉移酶；天冬氨酸氨基轉移酶；谷氨酸轉移酶

乙型病毒性肝炎(HBV)是我國法定乙類傳染病，其發病率高，流行性廣，嚴重威脅人類健康。一部分慢性HBV感染可自慢性無癥狀的乙型肝炎攜帶者發展為慢性乙型肝炎、肝硬化，甚至肝癌[1]。在其發病過程中，由免疫反應介導的炎性損傷始終貫穿其中，細胞因子的活化、增殖、凋亡發揮著重要的調控作用。血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、谷氨酸轉移酶(GGT)水平是反映肝功能損傷程度的主要酶學指標，了解細胞因子與肝細胞損傷發生發展的關系有助于對乙肝的診斷及療效進行評價。本研究通過檢測乙肝HBV-DNA載量和炎性因子、肝臟酶學指標水平，探討HBV發病過程中三者的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年1—12月在我院住院治療的78例乙型肝炎患者，均符合中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂“2000年病毒性肝炎防治方案”[2]的診斷標準，所有病例均經臨床(病史、癥狀、體征)、實驗室檢查及影像學檢查(B型超聲或CT)確診，并排除其他類型的病毒性肝炎、自身免疫性肝病、酒精性肝病、代謝性肝病、藥物性肝損害等其他慢性肝病。其中男44例，女34例，年齡20～55歲。按血清HBV-DNA載量分為4組:陰性組(HBV-DNA載量<103copies/ml)17例，其中男8例,女9例，年齡26～49(32±12)歲，病程6～17(12±3)個月；低載量組(HBV-DNA載量>103～105copies/ml)30例,其中男18例,女12例，年齡30～55(37±7)歲，病程3～55(32±18)個月；中載量組(HBV-DNA載量>105～107copies/ml)19例,其中男8例,女11例，年齡32～48(40±5)歲，病程15～75(48±36)個月；高載量組(HBV-DNA載量>107copies/ml)12例,其中男10例,女2例，年齡20～44(34±6)歲，病程1～38(15±9)個月。

1.2 檢測方法 所有患者空腹狀態下，采集外周靜脈血10 ml，分離血清4℃保存，2 h內檢測各項指標。

1.2.1 血清HBV-DNA載量檢測：采用DA7600實時熒光定量PCR儀，檢測儀器及試劑由中山大學達安基因股份有限公司提供，HBV-DNA載量正常參考范圍<103copies/ml。

1.2.2 血清炎性因子檢測：hs-CRP采用日立7600全自動生化儀免疫比濁法進行檢測，試劑由上海科華公司提供；TNF-α采用ELISA法，試劑由深圳晶美生物有限公司提供；IL-6采用羅氏E601化學發光儀進行檢測，試劑由羅氏公司原裝進口提供。

1.2.3 血清肝臟酶學檢測：ALT、AST、GGT采用日立7600全自動生化儀酶學法進行檢測，試劑由上海科華公司提供，ALT正常參考范圍<40 U/L,AST正常參考范圍<37 U/L,GGT正常參考范圍<58 U/L。

2 結 果

2.1 不同HBV-DNA載量組血清炎性因子水平比較 隨著HBV-DNA載量的增高，炎性因子TNF-α、IL-6均明顯升高，表現為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間水平比較差異有統計學意義(P<0.05)。血清hs-CRP在中、低載量組間水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

注：與陰性組比較，aP<0.05；與低載量組比較，bP<0.05；與中載量組比較，cP<0.05

2.2 不同HBV-DNA載量組血清肝臟酶學指標濃度比較 隨著HBV-DNA載量的增高，血清酶含量均明顯升高，各組間血清ALT、AST、GGT水平比較，表現為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間水平比較差異有顯著統計學意義(P<0.05)。見表2。

注：與陰性組比較，aP<0.05：與低載量組比較，bP<0.05；與中載量組比較，cP<0.05

2.3 血清炎性因子與肝臟酶學指標的相關性 統計結果顯示，ALT與TNF-α、IL-6呈正相關(r=0.68、0.56，P<0.05)，隨著ALT水平的增高，TNF-α和IL-6水平也隨之升高。ALT與hs-CRP無相關性(r=0.23，P>0.05)。

3 討 論

慢性乙型病毒性肝炎的發生及發展機制尚未完全闡明，除與乙肝病毒變異、宿主性別、年齡和遺傳基因有關外，還與肝臟內炎性活動密切相關[3，4]。目前大量研究認為，肝細胞病變主要取決于機體的免疫狀態，而細胞因子在免疫系統中起著重要的調控作用[5]。

肝臟作為體內重要的消化代謝系統，含有大量肝巨噬細胞。當肝細胞受損時，Kupffer細胞釋放大量的TNF-α、IL-6等細胞因子，這些細胞因子會在體內激發一系列的級聯反應[6]，TNF-α直接刺激肝星狀細胞增殖和膠原合成，從而促進釋放更多的細胞因子如TGF-β、PDGF等，形成正反饋的放大作用[7，8]，IL-6在TNF-α刺激后產生，促進中性粒細胞的活化、聚集，引起血小板活化、凝血功能障礙、腎小管壞死、骨骼肌溶解損傷、肝纖維化等，血清中細胞因子濃度的升高可反映組織損傷程度[9]。CRP是一種急性時相反應蛋白，能促進中性粒細胞和巨噬細胞的趨化吞噬，促進炎性反應。但在本研究中，CRP水平變化與乙肝HBV-DNA在中載量組與低載量組無統計學意義，可能與患者均為慢性乙肝，非急性發展期監測水平有關。但隨著HBV-DNA載量增高，炎性因子TNF-α、IL-6逐步升高，組間比較差異有統計學意義，表明體內病毒復制越嚴重，免疫炎性因子活動程度越高，同時也會正反饋導致肝損傷。

肝功能指標包括ALT、AST、GGT，當肝細胞受損、肝細胞膜通透性升高，血清中酶含量增加，是衡量肝細胞受損程度的常用指標[10，11]，綜合分析HBV-DNA水平及肝功能指標,才能更加客觀和準確地評估病情的變化、嚴重程度[12]。隨著HBV-DNA載量增高，乙肝患者血清酶活性水平也隨之升高，表現為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，各組間差異有統計學意義。

ALT、TNF-α、IL-6三者相關性良好，這可能因為乙肝病毒造成肝細胞損傷，通透性增加，轉氨酶和炎性因子激發機體免疫反應[13]，其血清濃度越高，預后越嚴重。這說明炎性因子在乙肝的發生、發展及預后中發揮重要作用, 因此, 在疾病診治中，應聯合相關炎性因子和肝臟酶學等指標綜合檢測，對評價預后及轉歸都有較大的實用價值，對這些問題的深入研究將有助于為乙肝治療開辟新的廣闊空間。

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8 齊育英,林振忠,明德松.IL-6、IL-10、IL-17在慢性乙型病毒性肝炎患者血中水平分析[J].中國免疫學雜志,2013,29(11):1177-1180.

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RelationshipbetweendifferentHBV-DNAloadofchronichepatitisBandinflammatoryfactor,liverfunctionenzymes

ZHOUYanfei,GONGJie,ZHANGXiaomei.

DepartmentofInfection,theFifthHospitalofWuhanCity,Wuhan430050,China

ObjectiveTo investigate the relationship between serum in patients with chronic hepatitis B of different HBV-DNA load and inflammatory factor, liver function enzymes.MethodsSeventy-eight cases of chronic hepatitis B patients were

real-time fluorescence quantitative PCR detection of serum HBV-DNA load, and then they were divided into negative group (17 cases), low load group (30 cases), median load group (19 cases), high load group (12 cases). High sensitivity C reactive protein (Hs-CRP), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin 6 (IL-6), liver function enzymes (ALT, AST, GGT) level were compared among the four groups, and to explore the correlation among these factors.ResultsAlong with the increase of HBV-DNA load, TNF-α, IL-6 were significantly increased, revealed as high load group > median load group > low load group > positive group, there was statistically significant difference among these groups (P<0.05). No statistical significance were found within group (P>0.05). There were no significant differences between median and low load group of the levels of serum hs-CRP(P>0.05), the difference between the rest 2 groups was statistically significant(P<0.05). Comparison of serum ALT, AST, GGT levels among these groups, it showed as high load group>median load group>low load group > negative group, there was significant difference among these groups (P<0.05). ALT and TNF-α, IL-6 were positive correlated (r=0.68,r=0.56,P<0.05); there is no correlation between ALT and hs CRP (r=0.23,P>0.05).ConclusionInflammatory cytokines have an important role in the pathogenesis of hepatitis B, comprehensive detection of serum inflammatory cytokines and liver enzymes have significant for understanding the immune status of hepatitis B in vivo, clinical diagnosis and prognosis.

Hepatitis B virus DNA; High sensitivity C reactive protein; Tumor necrosis factor α; Interleukin 6; Alanine aminotransferase; Aspartate aminotransferase; Glutamate transferase

430050 武漢市第五醫院醫院感染管理科(周燕飛)，檢驗科(龔杰)，感染科(張曉梅)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.08.012

2014-03-25)