HPLC法測(cè)定維生素B6乳膏中維生素B6的含量

王 慧

（洛陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南洛陽(yáng)471023）

HPLC法測(cè)定維生素B6乳膏中維生素B6的含量

王 慧

（洛陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南洛陽(yáng)471023）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定維生素B6乳膏中維生素B6的含量。方法采用Purospher STAR RP－18e色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相為0.04%戊烷磺酸鈉溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）－甲醇（85∶15）；柱溫為30℃；流速為1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)為291 nm。結(jié)果維生素B6在0.021 6～0.216mg·mL－1（r＝0.999 8）的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；維生素B6的平均加樣回收率為98.57%（RSD＝0.72%）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，結(jié)果穩(wěn)定，可為維生素B6乳膏的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

維生素B6乳膏；維生素B6；含量；高效液相色譜法

維生素B6乳膏［批準(zhǔn)文號(hào)：豫食藥監(jiān)注制（2004）030031號(hào)］是以維生素B6和乳膏基質(zhì)混合而成的醫(yī)院制劑，臨床主要用于痤瘡、酒渣鼻、脂溢性濕疹、皺皮癥。為提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更好的控制制劑質(zhì)量，本文采用HPLC法測(cè)定維生素B6乳膏中維生素B6的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國(guó)DIONEX U3000色譜系統(tǒng)；Chromeleon 7.10色譜工作站；島津UV－2401PC紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器；Precisa 92SM－202A－DR電子分析天平。

1.2 試藥 維生素B6對(duì)照品（批號(hào)：100116－200502，供含量測(cè)定用），購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。維生素B6乳膏（批號(hào)：20130223、20130308、20130412，規(guī)格：20 g∶200 mg），由河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院制劑室提供。甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：Purospher STAR RP－18e（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.04%戊烷磺酸鈉溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）－甲醇（85∶15）；流速：1.0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)：291 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。在此條件下，理論塔板數(shù)不低于4 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取維生素B6對(duì)照品適量，精密稱定，加鹽酸溶液（9→1 000）使溶解，并稀釋制成1.3 mg·mL－1的維生素B6對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL，置50 mL量瓶中，加鹽酸溶液（9→1 000）稀釋制成0.13 mg·mL－1的維生素B6對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品約2.5 g，精密稱定，加水溫?zé)岵嚢?，充分溶解，用鹽酸溶液（9→1 000）80mL移至200mL量瓶中，超聲25min使維生素B6溶解，放冷，加鹽酸溶液（9→1 000）稀釋至刻度，搖勻，過(guò)微孔濾膜（0.45μm），即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取乳膏基質(zhì)適量，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 干擾試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL，注入液相色譜儀，在“2.1”色譜條件下進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示，乳膏基質(zhì)對(duì)維生素B6的含量測(cè)定無(wú)干擾。

2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取維生素B6對(duì)照品10.82 mg，置25 mL量瓶中，加鹽酸溶液（9→1 000）稀釋至刻度，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，用鹽酸溶液（9→1 000）稀釋至刻度，搖勻，分別配制成濃度為0.021 6、0.043 3、0.086 6、0.129 8、0.216 0 mg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取上述溶液各10μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以維生素B6對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝327.92X＋0.023 6，r＝0.999 8。表明維生素B6在0.021 6～0.216 mg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為0.13 mg·mL－1的維生素B6對(duì)照品溶液10μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得平均峰面積RSD為0.67%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液10μL，分別于配制后0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣，測(cè)得平均峰面積RSD為1.02%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)維生素B6乳膏（批號(hào)：20130223）6份，按“2.3”項(xiàng)下平行制備供試品溶液，各精密吸取10μL，按上述色譜條件測(cè)定。樣品中維生素B6的平均含量為10.07 mg·g－1，RSD為0.32%。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的維生素B6乳膏（10.07 mg·g－1）6份，每份約1.3 g，精密稱定，用微量加樣移液槍分別精密加入“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液8、10、12 mL，混合均勻后，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，測(cè)定回收率。平均加樣回收率為98.57%，RSD為0.72%。

2.11 樣品含量測(cè)定 分別取不同批號(hào)的維生素B6乳膏，每批2份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液10μL注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算維生素B6的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 維生素B6乳膏含量測(cè)定結(jié)果（mg·g－1，n＝2）

3 討論

3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)的考察 參照相關(guān)文獻(xiàn)［1，2］，選擇0.04%戊烷磺酸鈉溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）－甲醇（85∶15）為流動(dòng)相，在291 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，結(jié)果主成分峰形良好，洗脫時(shí)間適中，色譜圖基線穩(wěn)定，故選其作為流動(dòng)相及檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 提取溶劑、提取方法的選擇 在提取溶劑的選擇上，首先采用的是0.04%戊烷磺酸鈉溶液（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）－甲醇（85∶15）［1］，由于乳膏基質(zhì)中含有硬脂酸、凡士林、單硬脂酸甘油酯以及尼泊金甲酯等成分，這些成分易溶于有機(jī)溶劑而對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成干擾，而維生素B6又是一種水溶性維生素，易溶于水及乙醇，且在酸液中穩(wěn)定，故最后采用先用少量水?dāng)嚢枋咕S生素B6充分溶解，再用鹽酸溶液（9→1 000）轉(zhuǎn)移至量瓶稀釋溶解的方法。經(jīng)試驗(yàn)表明，此方法對(duì)水溶性的維生素B6提取效率高，維生素B6也很穩(wěn)定，經(jīng)過(guò)濾，乳膏基質(zhì)基本被濾除，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)干擾。

在提取方法的選擇上，比較了超聲和水浴兩種提取方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，維生素B6遇熱不穩(wěn)定，故舍棄水浴的提取方法。同一批號(hào)維生素B6乳膏（批號(hào)：20130223）按“2.3”項(xiàng)下方法除超聲時(shí)間分別為10、15、20、25和30 min外，其他步驟平行操作，含量測(cè)得結(jié)果分別為9.22、9.64、9.88、10.07、10.06。因此，采用超聲25 min提取法提取維生素B6乳膏中的維生素B6。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社2010：899－900.

［2］乜紅磊，張磊.HPLC法測(cè)定復(fù)方硫唑乳膏中甲硝唑含量［J］.齊魯藥事，2012，31（8）：468－469.

Determ ination of Vitam in B6in Vitam in B6Cream by HPLC

WANG Hui
（Luoyang Institute for Food and Drug Control，Luoyang 471023，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Vitamin B6in Vitamin B6Cream.M ethodsThe HPLC was performed on a Purospher STAR RP－18e analytical column（4.6 mm×250 mm，5 μm），and themobile phase consists of0.04%pentance sulfonic acid sodium solution（adjusting pH to3.0 by glacial acetic acid）－methanol（85∶15）at the column temperature of 30℃.The flow rate was 1.0 mL·min－1and the detection wavelength was 297 nm.ResultsThe linear range of vitamin B6was 0.021 6～0.216 mg·mL－1（r＝0.999 8）.The average recovery was 98.57%（RSD＝0.72%）.ConclusionThemethod was sensitive，accurate and reliable for the quality control and evaluation of Vitamin B6Cream.

Vitamin B6Cream；Vitamin B6；Determination；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0094－002

王慧，女，研究方向：藥物分析，E－mail：wang.hui83＠163.com