HPLC法測定異福膠囊的有關物質

張立光

（蘇州衛生職業技術學院，江蘇蘇州215009）

HPLC法測定異福膠囊的有關物質

張立光

（蘇州衛生職業技術學院，江蘇蘇州215009）

目的建立高效液相色譜法測定異福膠囊中有關物質的方法。方法色譜柱為Kromasil C18，柱溫為40℃，流動相為甲醇－pH 7.0的磷酸鹽緩沖液（0.01 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液，用0.1 mol·L－1氫氧化鈉調pH）（60∶40），檢測波長為254 nm，流速為1.0 mL·min－1，進樣量為20μL。結果有關物質與主藥色譜達到有效分離，1009011批樣品中雜質I、醌式利福平、各雜質和分別為0、0.68%、3.2%。結論本方法準確、靈敏度更高，可用于該制劑的有關物質檢查。

高效液相色譜法；異福膠囊；有關物質

世界衛生組織為遏制全球結核病的威脅，主張使用抗結核藥物的固定劑量復合劑（FDCs）代替抗結核單藥制劑治療結核病。異福膠囊的質量標準為中華人民共和國藥典標準，沒有對有關物質進行控制，但FDCs的有關物質至關重要。筆者參考國際藥典建立了高效液相色譜（HPLC）法測定異福膠囊的有關物質的方法。結果表明，本方法能準確地對有關物質進行定性分析。

1 儀器與試藥

日立HPLC儀，包括L－2400紫外檢測器，L－2130泵，T－2000L型色譜工作站。賽多利斯BS21S分析天平，BP121S分析天平；利福平對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：130496－200702，含量：98.0%）；異煙肼對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100578－200401，含量：100.0%）；醌式利福平對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：130413－200303）；異福膠囊（自制，批號：1009011，1009021，1009031）；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果［1，2］

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18（4.6 mm× 250 mm，5μm）；柱溫：40℃；流動相：甲醇－pH 7.0的磷酸鹽緩沖液（0.01 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液，用0.1 mol·L－1氫氧化鈉調pH至7.0）（6∶4）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：254 nm。進樣量：20μL。取空白輔料溶液、對照品溶液進樣測定。結果表明，主峰與雜質峰能夠達到有效分離，色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白溶液 精密稱取不含利福平的空白樣

品適量，同法制成空白溶液。

圖1 利福平異煙肼對照品溶液

2.2.2 對照品溶液 取醌式利福平4mg，置25mL量瓶中，加異煙肼與利福平在酸中作用產物溶液（取利福平對照品4 mg和異煙肼對照品2 mg，加1 mol·L－1乙酸溶液25 mL使溶解，在室溫下放置30 min），加醌式利福平4 mg，溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液與自身對照溶液 稱取本品20粒，去膠囊殼，研細，稱取相當于利福平40 mg的粉末迅速置于200 mL中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸鹽緩沖液（4∶6）］稀釋至刻度，振搖，濾過，即得供試品溶液。再取供試品溶液5mL置于100 mL容量瓶中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸鹽緩沖液（4∶6）］稀釋至刻度，得每mL含利福平10μg的溶液，即自身對照溶液。

2.2.4 雜質限度標準的制定 供試品溶液的色譜圖中如檢出與雜質Ⅰ峰和醌式利福平峰保留時間一致的色譜峰，其峰面積分別不得大于對照溶液中利福平主峰面積的1倍（5.0%）和0.8倍（4.0%），其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液中利福平主峰面積的0.3倍（1.5%），除主峰外的其他峰面積和不得大于供試液中主峰面積的2倍（10%），小于供試液中主峰面積0.02倍（0.1%）的峰和相對于利福平保留時間小于0.23倍的峰忽略不計。

2.3 最低檢測限試驗 醌式利福平：取醌式利福平對照品0.003 0 g至100mL量瓶中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸鹽緩沖液（4∶6）］定容至刻度得到0.03 mg·mL－1的溶液，將此溶液逐級稀釋后進行測定，按3∶1信噪比作檢測限。結果表明，最低檢測濃度為0.000 15 mg·mL－1。

2.4 破壞性試驗 酸破壞溶液的制備：取膠囊內容物，研細，取細粉0.060 2 g至50 mL錐形瓶中，加入0.1 mol·L－1鹽酸溶液2 mL，25℃恒溫放置80 min后，加入0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液2 mL中和，轉移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

堿破壞溶液的制備：取細粉0.060 3 g至50 mL錐形瓶中，加入0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液2 mL，于烘箱中60℃恒溫放置60 min后，加入0.1 mol·L－1鹽酸溶液2 mL中和，轉移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

高溫破壞溶液的制備：取細粉0.060 3 g，于烘箱100℃恒溫放置12 h后，轉移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

氧化破壞溶液的制備：取細粉0.060 2 g至50 mL錐形瓶中，加入30%過氧化氫溶液1 mL，25℃恒溫放置30 min后，轉移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

強光破壞溶液的制備：取細粉0.060 2 g至表面皿中，于光照試驗箱中4 500 Lx光照條件下，25℃恒溫放置10 d后，轉移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

取上述各破壞樣品溶液，按擬定的有關物質檢查方法檢查，記錄色譜圖并計算。

結果表明各種破壞條件下各雜質峰與主峰能夠很好地分離。

2.5 樣品有關物質測定 取3批樣品，按擬定的有關物質檢查方法檢查，結果見表1。

表1 3批樣品的有關物質檢查結果

2.6 穩定性試驗 將樣品在40℃相對濕度（RH）75%的條件下放置6個月，于1、2、3、6個月時分別取樣，測定其有關物質，并與0個月時進行比較。結果表明，樣品在40℃、RH＝75%條件下放置6個月穩定。

3 討論

2010 年版《中國藥典》收載的異福膠囊沒有對有關物質進行控制［1］，筆者建立了HPLC法測定異福膠囊中有關物質。本方法操作簡單準確，靈敏度高。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：298－299.

［2］畢秀玲，錢小平，趙迎春，等.高效液相色譜法測定異福片中利福平含量［J］.中國藥業，2013，22（2）：17－18.

Determination of related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules by HPLC

ZHANG Li-guang
（Suzhou Health College of Technology，Suzhou 215009，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of the related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules.MethodsThe determination was performed with a Kromasil C18column with the column temperature maintained at40℃，and the mobile phase was methanol－pH 7.0 buffer solution（0.01 mol·L－1Potassium dihydrogen phosphate，adjust pH with 0.1 mol·L－1Sodium hydroxide）（60∶40）with flow rate of 1.0 mL·min－1.The UV detection wavelength was set at254 nm and the sample size was 20μL.ResultsThe relevant substances of I were well separated from the chief agent，and the related substances in the sample 1009011 were 0，0.68%，3.2%，respectively.ConclusionThe proposed method was accurate and sensitive.It was applicable for the determination of the related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules.

HPLC；Rifampicin and Isoniazid Capsules；Related substances

R927.11

A

2095－5375（2014）01－0014－002

張立光，女，研究方向：藥物合成和藥物分析，E－mail：ivy0714＠126.com