藿香正氣制劑中厚樸不同提取工藝對胃腸活動的影響研究

張慧敏，任虹，何瑤，傅超美，羅妮妮， 蔣燕萍

《中華人民共和國藥典》（2010年版）收載藿香正氣制劑具有解表化濕、理氣和中的功效。厚樸作為該方臣藥，功善行氣燥濕，主要用于治療濕滯傷中，食積氣滯，腹脹便秘，脘腹脹痛。其功效主治基本符合大部分現(xiàn)代人利用藿香正氣系列制劑治療中暑、感冒和“胃腸道不適”等病癥。通過對歷版《中國藥典》、《中成藥部頒標(biāo)準(zhǔn)》等所收載藿香正氣制劑標(biāo)準(zhǔn)的查閱，發(fā)現(xiàn)其中厚樸一味藥材的提取工藝主要有60%、70%、95%乙醇進(jìn)行熱回流提取等[1～4]。提取溶媒對藥物有效成分的提取率及藥效影響較大，因此本課題組選用藿香正氣方中厚樸為模型藥物，就其不同提取工藝促進(jìn)胃腸蠕動作用進(jìn)行研究。

1 試驗儀器與材料

1.1 儀器

數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4(國華電器有限公司) ；R501B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申順生物科技有限公司)；常規(guī)手術(shù)器械。

1.2 試藥

吲哚美辛腸溶片（重慶科瑞制藥有限責(zé)任公司，25 mg/片）；酚酞片（臨汾奇林藥業(yè)有限公司，0.1 g/片）；消旋山莨菪堿片（杭州民生藥業(yè)有限公司，5 mg/片）；西沙必利片（浙江京新藥業(yè)股份有限公司，5 mg/片）；L-精氨酸（成都市科龍化工試劑廠）。

1.3 動物

昆明種小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，由成都達(dá)碩生物科技有限公司（科技部實驗動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK(川)2008-24）提供；清潔級SD大鼠，雌雄各半，體重（200±20）g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗動物中心（科技部實驗動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK（川）2008-21）提供。

1.4 試驗藥液的制備

取厚樸40 g ,分別用60%、70%、95%乙醇加熱回流3次, 每次200 mL ,每次提取1 h , 合并提取液，濾過，減壓回收乙醇后，調(diào)整體積為1000 mL；左旋精氨酸加生理鹽水溶解，并以鹽酸調(diào)至pH7.0。

2 方法與結(jié)果

2.1 對消旋山莨菪堿模型小鼠排便的影響研究[5～8]

2.1.1 造模方法 選取清潔級昆明種小鼠（20±2）g，雌雄各半。適應(yīng)數(shù)天后，隨機分為6組，每組10 只。分為正常對照組、模型對照組、陽性對照組、厚樸藥物組1號、2號、3號。正常對照組和模型對照組灌胃蒸餾水(5 mL．kg-1)，厚樸藥物組1號、2號、3號每日分別灌胃60%、70%、95%乙醇熱回流法厚樸提取物（200 mg．kg-1），陽性對照組灌胃酚酞片（12.5 mg．kg-1)水溶液，連續(xù)灌胃7天。在給藥后第8 天，各組小鼠禁食不禁水12 h后。正常對照組灌胃蒸餾水(5 mL．kg-1)，其余各組灌胃消旋山莨菪堿片 (4 mg．kg-1)水溶液。30 min 后，各組小鼠灌胃受試藥物。

2.1.2 實驗結(jié)果 觀察并記錄各組小鼠首次排便時間、6 h小鼠排便的粒數(shù)并稱量排出糞便的重量。結(jié)果見表1。

表1 厚樸提取物對小鼠排便作用的影響(±S,n=10)

組別 首次排便時間/min 6 h排便粒數(shù) 6 h排便重量/g空白對照組 44.2±13.1 7.2±3.4 0.36±0.109模型組 61.1±9.8** 4.1±3.1** 0.29±0.094 *陽性對照組 49.8±19.7△△ 5.7±1.3△ 0.37±0.059 △△厚樸藥物組1 53.4±17.7△△ 5.2±3.3△ 0.35±0.099△

注：與正常對照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01,與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01

結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組的首次排便時間、6 h 排便粒數(shù)和6 h 排便重量均有顯著性差異，說明便秘模型造模成功（P＜0.05）。與模型組相比，酚酞片陽性組與厚樸提取物各組均能顯著縮短小鼠首次排便時間（P＜0.05），顯著增加小鼠6 h排便粒數(shù)（P＜0.05）和6 h 排便重量（P＜0.05）。表明厚樸提取液能有效緩解消旋山莨菪堿模型小鼠的便秘，而厚樸提取物3組之間的差異不明顯，厚樸藥物組2號（70%乙醇熱回流提取組）有優(yōu)于其余兩組的趨勢。

2.2 對左旋精氨酸致胃腸運動障礙模型大鼠的胃腸運動的影響研究[6～11]

2.2.1 造模方法 選取清潔級SD大鼠（200±20）g，雌雄各半，適應(yīng)數(shù)天后，隨機分為6組，每組10 只。分別為正常對照組、模型對照組、陽性對照組、厚樸藥物組1號、2號、3號。正常對照組,每日腹腔內(nèi)注射與其它組容量相同的生理鹽水，灌胃蒸餾水5 mL．kg-1；模型組腹腔內(nèi)注射左旋精氨酸，劑量為：第l 天5 g．kg-1，第2～5天2.5 g．kg-1，同時灌胃蒸餾水5 mL．kg-1；陽性對照組:每日灌胃西沙必利（22.5 mg．kg-1）混懸液，左旋精氨酸用量及用法同造模組；厚樸藥物組：厚樸藥物組1號、2號、3號每日分別灌胃60%、70%、95%乙醇熱回流法厚樸提取物（5mL．kg-1），左旋精氨酸用法和用量同造模組。

連續(xù)給藥后第6天，即實驗前，將各組大鼠禁食不禁水18 h，第7天灌藥1 h后，灌胃半固體糊2 mL/只，(半固體糊的配制：取10 g 羧甲基纖維素鈉，溶于250 mL 生理鹽水中，分別加入奶粉18 g、糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，攪拌均勻，配制成300 mL，約300 g 的黑色半固體糊狀物；冰箱冷藏，用時恢復(fù)至室溫)，30 min后采用脫頸法處死。剖開腹腔后迅速取出整個胃腸于實驗臺上，結(jié)扎胃賁門，輕輕剝離，鋪直，測量幽門至盲腸部全長及幽門至半固體糊前沿的距離，以幽門至半固體糊前沿距離占幽門至回盲部全長的百分率為半固體糊推進(jìn)百分率。然后結(jié)扎胃幽門，取胃，用濾紙拭干后稱全重，沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后拭干，稱胃凈重，以胃全重和胃凈重的差值為胃殘留物重，以此與所給糊重的百分比為胃內(nèi)殘留率。

2.2.2 實驗結(jié)果 計算小腸推進(jìn)率和胃內(nèi)殘留率，結(jié)果見表2。

小腸推進(jìn)率(%)=[幽門至半固體糊前沿距離/幽門至回盲部全長]×100%

胃殘留率(%)=[(胃全重－胃凈重)/炭糊重]×100%

表2 厚樸提取物對胃腸運動障礙模型大鼠胃腸運動的影響(±S,n=10)

表2 厚樸提取物對胃腸運動障礙模型大鼠胃腸運動的影響(±S,n=10)

注：與正常對照組比較 (1)P＜0.01,與模型組比較(2)P＜0.01

組別 胃殘留率/% 小腸推進(jìn)率/%空白對照組 84.2±13.0 58.3±5.4模型組 99.1±19.8(1) 49.1±7.7(1)陽性對照組 86.8±19.9(2) 55.7±3.9(2)厚樸藥物組 -1 89.9±17.7(2) 53.9±4.3(2)厚樸藥物組- 2 87.1±10.1(2) 54.1±5.1(2)厚樸藥物組- 3 90.1±13.0(2) 53.1±3.5(2)

與正常對照組相比，模型組胃排空、小腸推進(jìn)顯著減慢（P＜0.01），表明造模成功。與模型組相比，西沙必利片陽性組與厚樸提取物各組均能顯著改善大鼠胃腸動力障礙模型的胃排空（P＜0.01）和小腸推進(jìn)（P＜0.01）。表明厚樸提取液能有效促進(jìn)大鼠胃排空和胃腸蠕動，而厚樸提取物3組之間的差異不明顯，其中厚樸藥物組2號（70%乙醇熱回流提取組）有優(yōu)于其余兩組的趨勢。

3 討論

厚樸中主要成分為厚樸酚、和厚樸酚，味苦，辛，溫。歸脾、肺、胃、大腸經(jīng)，具有下氣除滿、燥濕消痰的功效，主治脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳。厚樸在一定程度上能促進(jìn)實驗動物的胃腸蠕動，這與厚樸功效中調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)功能相吻合，亦與藿香正氣制劑理氣和中的功效相符合。因此，本文選取消旋山莨菪堿模型小鼠實驗和左旋精氨酸致胃腸運動障礙模型大鼠實驗以考察厚樸不同提取工藝緩解便秘作用和促進(jìn)胃排空和小腸推進(jìn)運動作用。

中藥療效的好壞，提取工藝是重要的影響因素之一，從厚樸不同提取工藝對消旋山莨菪堿模型小鼠實驗和左旋精氨酸致胃腸運動障礙模型大鼠實驗中可以看出70%乙醇熱回流提取組優(yōu)于60%乙醇熱回流提取組和95%乙醇熱回流提取組，但三者差異不顯著。因此接下來有必要采用HPLC、LC-MS 等技術(shù)對3 種不同提取工藝制備的提取液進(jìn)行化學(xué)成分的分析，結(jié)合厚樸中有效成分含量、其他藥效學(xué)指標(biāo)、生產(chǎn)成本等因素，進(jìn)一步篩選出制備工藝合理、質(zhì)量穩(wěn)定可控、臨床療效顯著的最佳提取工藝。

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