左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對HL－60細胞增殖的影響

楊 斌，楊小葉，曾 春，劉 元，曹 斌

（1.廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西南寧530021；2.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022）

左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對HL－60細胞增殖的影響

楊 斌1，楊小葉1，曾 春1，劉 元2，曹 斌2

（1.廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西南寧530021；2.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022）

目的探討左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對HL－60細胞的增殖抑制作用。方法運用CCK－8法測定不同劑量組DMDAI－L的含藥血清對HL－60細胞的增殖影響。結(jié)果DMDAI－L高中低劑量組含藥血清作用HL－60細胞48 h抑制率分別為30.29%、20.72%、13.97%，而陽性組（環(huán)磷酰胺）抑制率為18.16%，高、中、低劑量組、陽性對照組與空白對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論DMDAI－L含藥血清能夠有效抑制HL－60細胞增殖。

左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯；HL－60細胞；含藥血清

血清藥理學是指在動物經(jīng)口服給藥一段時間后采血分離血清，用此含藥血清進行體外藥理實驗的一種實驗方法，血清化學主要是研究血清中的化學成分［1］。左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯（1，6－di－O－（methysulfonyl）－2，3，4，5－Dianhydro－L－iditol，DMDAI－L）屬于烷化劑類細胞抑制劑，體外實驗研究發(fā)現(xiàn)DMDAI－L對急性髓系白血病HL－60細胞有很好的抑制作用并且誘導(dǎo)HL－60細胞凋亡［2，3］。為了進一步探討經(jīng)口服途徑給藥，在體內(nèi)吸收、生物轉(zhuǎn)化等一系列過程后，血清中含藥活性成分對HL－60細胞的生長影響，因此本實驗首次通過血清藥理學的方法測定通過動物體內(nèi)吸收及代謝后，DMDAI－L的含藥血清對HL－60細胞增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 健康的雄性SD大鼠，SPF級，（250± 5）g，廣西醫(yī)科大學動物實驗中心提供，試驗動物生產(chǎn)許可證SCXK（桂）2009－0002，試驗動物使用許可證SCXK（桂）2009－0004。

1.2 藥品、試劑與儀器 DMDAI－L由廣西中醫(yī)藥研究所劉元副研究員提供；人原髓細胞白血病細胞HL－60購自武漢博士德生物工程研究院；CCK－8試劑盒購置碧云天生物技術(shù)研究所；超凈工作臺（上海浦東躍欣科學儀器廠）；CO2飽和濕度恒溫箱（美國Forma scientificlnc公司）；倒置光學顯微鏡（日本Olympus公司）；高速冷凍低溫離心機（美國Thermo scientific公司）。

1.3 DMDAI－L含藥血清的制備 參考文獻［4］方法略有改變，取SD雄性大鼠15只編號，隨機分為五組，每組3只，分別為空白對照組（等體積0.5% CMC－Na的生理鹽水）、DMDAI－L高、中、低劑量組（75、50、25 mg·kg－1）、環(huán)磷酰胺陽性對照組（25 mg·kg－1），空白對照組和給藥組為灌胃給藥方式，環(huán)磷酰胺腹腔注射，給藥前禁食不禁水12 h。給藥3 d，每天給藥兩次，末次給藥后2 h用20%的烏拉坦麻醉，腹主動脈取血。室溫靜置2 h、2 500 rpm離心20 min，吸取上清血清，56℃滅活30 min，0.22 μm過濾除菌，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 DMDAI－L含藥血清對HL－60增殖的影響取生長狀態(tài)良好的HL－60細胞，調(diào)整細胞密度為1×105·mL－1接種于96孔板，每孔75μL，預(yù)培養(yǎng)6 h后，給予各組含藥血清25μL，使血清終濃度為25%，作用48 h后每孔加入CCK－8試劑10 μL，37℃恒溫孵育3 h，450 nm酶標儀測定每孔OD值，實驗重復(fù)3次。

2 實驗結(jié)果

2.1 倒置顯微鏡下觀察DMDAI－L含藥血清對HL－60細胞的形態(tài)學改變 空白血清組HL－60細胞狀態(tài)良好，細胞膜清晰透亮，細胞核大而且明顯，大多數(shù)細胞呈圓形而且個頭均一。給予個劑量組含藥血清后作用48 h后，與空白血清對照組比較，細胞增殖有逐漸降低的趨勢，特別是高劑量組，細胞形態(tài)改變明顯，細胞表面皺縮、體積縮小，甚至出現(xiàn)細胞碎片（見圖1）。

圖1 各組DMDAI－L含藥血清作用HL－60細胞48 h形態(tài)學的改變（×100）

2.2 DMDAI－L含藥血清對HL－60細胞作用48 h的影響 由表1可見，各劑量組的含藥血清濃度為25%對HL－60細胞的生長有抑制作用，陽性對照組以及低、中、高劑量組與空白對照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），表明左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯含藥血清對HL－60細胞作用有明顯抑制作用。

表1 各劑量組DMDAI－L含藥血清對HL－60細胞作用48 h的抑制率

3 討論

在體外抗腫瘤實驗中［5］，當藥物的結(jié)構(gòu)形式與體內(nèi)的理化性質(zhì)、作用形式存在差異時，往往藥物直接加入離體反應(yīng)體系的體外實驗結(jié)果不能客觀、真實地反應(yīng)藥物的作用效果，然而血清藥理學能在一定程度上彌補了這種缺陷。含藥血清所含的藥物成分一般經(jīng)過體內(nèi)一系列生物轉(zhuǎn)化后真正發(fā)揮作用的有效成分，同時包含那些在藥物作用下機體所產(chǎn)生的內(nèi)生性的有效成分，即各種生理活性物質(zhì)。血清中的有效成分是藥物和機體相互作用之后產(chǎn)生的。

有些藥物的代謝產(chǎn)物，藥效高于母體藥物，可直接合成該代謝產(chǎn)物作為藥用，從而發(fā)現(xiàn)藥效更好的藥物［6］。例如：抗過敏藥氯雷他定（loratadine）在消化道被吸收后，很快脫去乙氧羧基側(cè)鏈降解為對H受體活性更強的去羧氯雷他定（desloratadine，現(xiàn)已成為第二代新藥）［7］。所以通過對藥物代謝產(chǎn)物的研究是發(fā)現(xiàn)新藥的一種途徑。本課題組前期研究，提示DMDAI－L體外肝微粒體孵育代謝后結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，導(dǎo)致其藥效也發(fā)生了改變，本實驗研究以含藥血清的方法證明了DMDAI－L進過體內(nèi)消化吸收生物轉(zhuǎn)化后，其含藥血清仍然對HL－60細胞有抑制作用。據(jù)文獻分析，迄今含藥血清實驗方法偏重于藥效的研究，沒有對血清中的有效成分做進一步的分析，尚缺乏對血清中所有藥物成分的定性、定量分析，藥物在體內(nèi)的代謝過程也未知。因此DMDAI－L含藥血清中的具體成分值得進一步的研究，同時應(yīng)該更深入的研究其代謝產(chǎn)物，并對其代謝產(chǎn)物的藥效進行研究。

［1］潘衛(wèi)松，劉美鳳，石鉞，等.血清藥理學、血清化學和中藥藥代動力學［J］.世界科學技術(shù)（中藥現(xiàn)代化），2002，4（3）：53－56.

［2］曾春，郭超，石玲東，等.左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯對HL－60細胞增殖和凋亡的影響［J］.廣西醫(yī)科大學學報，2012，29（2）：183－186.

［3］韋煥英，姚樹漢，周龍強，等.左旋－二脫水伊地醇雙甲磺酸酯抗腫瘤作用及毒性［J］.癌癥，1991，10（3）：193.

［4］王力倩，李儀奎，付勝光.血清藥理學方法研究探索［J］.中藥藥理與臨床，1997，13（3）：29－31.

［5］侯華新，黎丹戎，鄺曉聰，等.氧化苦參堿對卵巢癌HO8910細胞凋亡影響的血清藥理學研究［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學，2006，23（5）：349－352.

［6］陳競洪，李林，屈英微，等.藥物代謝研究在新藥研究中的作用［J］.河北工業(yè)科技，2005，22（2）：114－116.

［7］Henz BM.The pharmacologic profile of desloratadine：a review［J］.Allergy，2001，56（Suppl65）：7－13.

The effect of serum containing DMDAI－L on human myeloid leukem ia HL－60 cells

YANG Bin1，YANG Xiao-ye1，ZENG Chun1，LIU Yuan2，CAO Bin2
（1.Pharmaceutical College，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China；2.Guangxi Institution of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China）

ObjectiveTo detect the effectof serum containing DMDAI－L on humanmyeloid leukemia HL－60 cells.M ethodsThe proliferation inhibitory effect of serum containing DMDAI－L on human myeloid leukemia HL－60 cells were detected by CCK－8 assay in vitro.ResultsThe high，medium and low－dose groups of serum containing DMDAIL can inhibit the growth of HL－60 cells，the inhibition rate of high，medium and low－dose groups for 48 hours were 30.29%，20.72%，13.97%and cyclophosphamide group was 18.16%，there was significantly difference related to the control group（P＜0.05）.ConclusionThe serum containing DMDAI－L can inhibit the growth of HL－60 cells effectively.

DMDAI－L；HL－60 cells；Medicated serum

R965

A

2095－5375（2014）11－0626－003

廣西自然科學基金項目應(yīng)用基礎(chǔ)研究專項基金資助（No.桂科基0991013）

楊斌，男，教授，研究方向：腫瘤藥理，E－mail：8160722＠qq.com

曹斌，女，副研究員，研究方向：中藥藥理學，Tel：13907863117，E－mail：zyyskjb＠163.com