HPLC法測定注射用阿尼芬凈的含量

李 娜，馮 中

（魯南制藥集團股份有限公司，山東臨沂276000）

HPLC法測定注射用阿尼芬凈的含量

李 娜，馮 中

（魯南制藥集團股份有限公司，山東臨沂276000）

目的建立測定注射用阿尼芬凈含量的高效液相色譜方法。方法采用Welch Ultimate XB－C8（4.6× 250 mm，5μm）色譜柱，以0.03 mol·L－1磷酸氫二鈉溶液（以0.5 mol·L－1的氫氧化鈉溶液調pH至5.0）－乙腈（70∶30）為流動相，檢測波長為227 nm，流速1.0 mL·min－1。結果阿尼芬凈濃度在25.13～175.92μg·m L－1濃度范圍內線性良好（r＝0.999 8），平均回收率為99.53%，RSD為0.45%。結論本方法專屬性強、準確度高，可用于注射用阿尼芬凈的質量控制。

高效液相色譜法；注射用阿尼芬凈；含量

阿尼芬凈（anidulafungin）是第三代棘白菌素類的半合成抗真菌藥，屬于兩性霉素B的衍生物，FDA批準其用于治療假絲酵母（Candida）引起的某些感染。臨床研究顯示阿尼芬凈在食道念珠菌病、念珠菌血癥（candidemia）以及其他包括腹部膿腫和腹膜炎在內的假絲酵母感染的治療中是安全且有效的，同其他棘白菌素類抗真菌藥比較，分布容積更大，抗菌譜更廣［1～7］。

目前尚無文獻報道阿尼芬凈含量測定的方法，筆者經過反復摸索，按照《中國藥典》［8］要求，首次建立了測定注射用阿尼芬凈含量的反相HPLC法，結果表明，該方法準確可靠，靈敏度高，可用于測定注射用阿尼芬凈的含量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（Agilent 1200型）；十萬分之一電子天平（Mettler Toledo XS205），磷酸氫二鈉為分析純，乙腈為色譜純，水為蒸餾水。阿尼芬凈對照品（原料滴定法標定，純度98.8%，批號：120101）；注射用阿尼芬凈由山東新時代藥業有限公司提供（批號為120701，120702，120703）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為Welch Ultimate XB－C8（4.6×250 mm，5μm）；以0.03 mol·L－1磷酸氫二鈉溶液（以0.5 mol·L－1的氫氧化鈉溶液調pH至5.0）－乙腈（70∶30）為流動相，檢測波長為227 nm，進樣量20μL。理論板數按阿尼芬凈峰計算不低于4 000。

2.2 溶液制備 取本品5瓶，將內容物混合均勻后精密稱定（相當于阿尼芬凈12.5 mg），加流動相溶解并稀釋成含阿尼芬凈0.125 mg·mL－1的溶液，作為供試品溶液；另取阿尼芬凈對照品適量，精密稱定，加流動相稀釋成每1 mL中約含阿尼芬凈0.125 mg的溶液，作為對照品溶液；另取注射用阿尼芬凈空白輔料適量，同法配制作為陰性空白溶液。

2.3 專屬性試驗 按照上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性空白溶液各20μL注入高效液相色譜儀，并記錄色譜圖，HPLC圖譜見圖1。試驗結果表明：按阿尼芬凈峰計算理論板數為10 324；空白輔料對本品的含量測定未見干擾，說明本法專屬性較好。

圖1 注射用阿尼芬凈含量測定的HPLC色譜圖

2.4 線性與范圍試驗 精密稱取阿尼芬凈對照品63.59 mg（約含阿尼芬凈62.83 mg），置50 mL量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻后作為對照品儲備液；精密量取上述儲備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，分別置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度C（μg·mL－1）對主峰峰面積A進行線性回歸，得線性方程為：A＝16.346C＋4.411 9（r＝0.999 8）。結果表明阿尼芬凈含量在25.13～175.92μg·mL－1范圍內時線性關系良好。

2.5 精密度試驗 分別精密量取線性與范圍試驗項下的對照品儲備液0.8、1.0和1.2 mL，分別置10 mL量瓶中，用流動相稀釋制成濃度分別為100.53（80%）、125.66（100%）和150.79μg·mL－1（120%）的溶液，各3份，分別精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積計算精密度RSD分別為0.32%、0.13%、0.26%。

2.6 穩定性試驗 分別配制供試品溶液與對照品溶液適量，在配制后0、1、2、4、6、8 h取樣，依法測定并記錄阿尼芬凈峰面積，計算相對標準偏差。結果表明供試品溶液與對照品溶液峰面積的RSD分別為0.10%和0.08%，說明阿尼芬凈溶液在8 h內穩定性良好。

2.7 回收率試驗 精密稱取阿尼芬凈對照品10.12、 12.65和15.18 mg和空白輔料各3份，分別置于100 mL容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻后作為供試品溶液。精密稱取阿尼芬凈對照品12.65 mg，置于100 mL容量瓶中，加流動相制成每1 mL中約含阿尼芬凈0.125 mg的溶液，作為對照品溶液；取上述兩種溶液，依法測定，按外標法以峰面積計算回收率，平均回收率為99.53%，RSD為0.45%（n＝9）。

2.8 樣品測定 取注射用阿尼芬凈3批樣品，依法測定，含量分別為100.26%、99.59%和99.30%。

3 討論

作為一種抗感染藥物類全身用抗真菌藥物，阿尼芬凈不經過肝代謝和腎清除，使聯合用藥以及肝、腎功能不良患者無需調整劑量成為可能，且用藥安全，耐受性好，對治療念珠菌和霉曲菌引起的嚴重感染具有廣闊的前景［9］。本文建立了測定注射用阿尼芬凈含量的方法，經試驗，該方法專屬性強，精密度良好，準確度高，溶液穩定，可用于注射用阿尼芬凈的含量測定。

［1］劉偉，楊慶宇.阿尼芬凈與氟康唑治療白色念珠菌引起念珠菌血癥的療效對比［J］.中國醫院藥學雜志，2013，33（10）：806－809.

［2］曹國穎，傅得興.新型棘白菌素類抗真菌藥阿尼芬凈［J］.中國新藥雜志，2005，14（11）：1358－1361.

［3］苗宇，關永霞.4″－正戊氧基－1，1′∶4′，1″－三聯苯－4－甲酸的合成［J］.藥學研究，2013，32（8）：492－493.

［4］陳頔，曹國穎，傅得興，等.棘白霉素類抗真菌藥的研究進展［J］.中國新藥雜志，2007，16（14）：1082－1087.

［5］Verweij PE，Oakley KL，Morrissey J，et al.Efficacy of LY 303366 againstamphotericin B－susceptible and－resistant Aspergillus fumigatus in a murine model of invasive aspergillosis［J］.Antimicrob Agents Chemother，1998，42（4）：873－878.

［6］謝新宇.新型抗真菌藥阿尼芬凈的研究進展［J］.河北化工，2011，34（5）：33－34，57.

［7］苗宇，關永霞.4″－正戊氧基－1，1′∶4′，1″－三聯苯－4－甲酸的合成［J］.藥學研究，2013，32（8）：492－493.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄V D.

［9］曹國穎，傅得興.新型棘白菌素類抗真菌藥阿尼芬凈［J］.中國新藥雜志，2005，14（11）：1358－1361.

Determ ination of Anidulafungin for Injection by HPLC

LINa，FENG Zhong
（Lunan Pharmaceutical Co.，Ltd.，Linyi276000，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination of Anidulafungin for Injection.MethodsA stable HPLCmethod was established，and the chromatography was accomplished on a Welch Ultimate XB－C8（4.6×250 mm，5μm），themobile phase consisted of 0.03 mol·L－1sodium hydrogen phosphate solution（adjust pH to 5.0 by 0.5 mol·L－1sodium hydroxide solution）－acetonitrile（70∶30），the detection wavelength was 227 nm，the flow rate was 1.0 mL·min－1.Resu ltsThe calibration curve was linear in the range of 25.13～175.92μg·mL－1（r＝0.999 8）；The average recovery was 99.53%with corresponding RSD of0.45%.ConclusionThemethod was exclusive of strong，high accuracy，and can be used for the quality control of Anidulafungin for Injection.

HPLC；Anidulafungin for Injection；Content

R927.2

A

2095－5375（2014）11－0633－002

李娜，女，研究方向：藥物研發，E-mail：13734352772＠163.com